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文檔簡介

實驗二人類外周血淋巴細胞培養(yǎng)

及染色體標本的制備

溫州醫(yī)學院生命科學學院生物系唐霄雯

1、學習人類外周血淋巴細胞的培養(yǎng)技術(shù)。

2、掌握人類淋巴細胞染色體標本的制備。目的要求實驗原理有絲分裂中期相的染色體具有一定形態(tài)和大小，且輪廓結(jié)構(gòu)最為典型。1952年美籍華人徐道覺發(fā)現(xiàn)低滲可以使細胞膨脹，染色體分散。1956年美籍華人蔣有興和Leran等人，在染色體制片中利用了可以破壞紡錘絲使細胞分裂停止在中期的秋水仙素。1960年Nowell等人發(fā)現(xiàn)植物凝集素（簡稱PHA）可以使處于G1期或G0期的淋巴細胞轉(zhuǎn)化為淋巴母細胞，從而進入分裂期。在制備人類染色體標本時，外周血淋巴細胞常做為首選材料。加固定液至5ml,靜置15’5ml培養(yǎng)液+0.5ml血70h

加秋水仙素繼續(xù)培養(yǎng)至72h

收集細胞1000rpm,8’

棄上清

37℃0.075MKCl6ml,混勻37℃,水浴15’預固定(加固定液1ml,輕混勻)

1000rpm,8’

1000rpm,8’棄上清棄上清沉淀沉淀加固定液5ml，靜置15’

制備片：每人1張(滴片、微烤、晾干)

1000rpm,8’棄上清鏡檢

Ⅲ、Ⅳ號片待用Ⅱ號片染色5’,水洗正常人類染色體各組的主要形態(tài)組號染色體號形態(tài)著絲粒位置隨體A1-3最大1、3號中央著絲粒無2號亞中著絲粒B4-5次大亞中著絲粒無C6-12+X中等亞中著絲粒無D13-15中等近端著絲粒有E16-18小16號中央著絲粒無17、18號亞中著絲粒F19-20次小中央著絲粒無G21-22+Y最小近端著絲粒21、22有、Y無注意事項1、兩人一組，每組一個培養(yǎng)瓶，共制備四張染色體標本，每張玻片請標上Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ。2、培養(yǎng)瓶分普通培養(yǎng)和加BrdU培養(yǎng)兩種，請拿到標有Brdu培養(yǎng)瓶的小組在制備好的玻片上

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