Vc含量測定課件

實驗五蘆筍中Vc的提取及含量測定實驗?zāi)康膶嶒炘碓噭﹥x器實驗步驟結(jié)果計算注意事項一、實驗?zāi)康?、了解Vc的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)、作用及測定方法。2、熟悉樣品預(yù)處理、定容、分光光度計的使用。4、掌握2，4–二硝基苯肼法測Vc的原理與方法。3、掌握蘆筍中Vc的提取方法。維生素C脫氫維生素CVc又稱抗壞血酸（ascorbicacid）維生素的結(jié)構(gòu)C可以解離出兩個H+烯二醇結(jié)構(gòu)具有強還原性脫氫形式不穩(wěn)定易降解二酮古樂糖酸+H2O-H2O（還原型）（氧化型）有活性還原型與氧化型可相互轉(zhuǎn)化[O]草酸+蘇阿糖酸易溶于水，溶于乙醇，不溶于乙醚、苯。酸性溶液(pH＜4)較穩(wěn)定，中性以上極不穩(wěn)定。對光、熱、金屬離子（鐵、銅）敏感。容易被氧化。維生素C的特性用活性炭把樣品中的還原型抗壞血酸氧化為脫氫型抗壞血酸，繼續(xù)氧化為二酮古樂糖酸。二酮古樂糖酸與2，4-二硝基苯肼偶聯(lián)生成紅色的脎。根據(jù)脎在硫酸溶液中的含量與總抗壞血酸含量成正比進行比色測定。實驗原理三、試劑與儀器（1）1％草酸、2％草酸（2）活性炭（經(jīng)HCl處理無鐵離子）（4）2％2,4-二硝基苯肼（5）4.5mol?L-1硫酸溶液（3）1%硫脲、2%硫脲（6）抗壞血酸標準溶液（1mg?

mL-1）提取Vc氧化處理控制氧化顯色四、實驗步驟1、樣品中Vc的提取100g蘆筍樣品+100mL2%草酸搗碎機搗成勻漿轉(zhuǎn)移至燒杯，1%草酸洗滌搗碎機杯、杯蓋及刀數(shù)次，洗滌液一并轉(zhuǎn)移1%草酸洗滌布氏漏斗數(shù)次抽濾至殘渣無色濾液移至500mL容量瓶，1%草酸洗滌抽濾瓶數(shù)次，洗滌液一并轉(zhuǎn)移，定容。減壓過濾提取液比色管編號：123氧化稀釋液4.00mL二硝基苯肼2.00mL37℃恒溫水浴3h冰水冷卻室溫冷卻，滴加硝基苯肼2.00mL，15min后置于冰水滴加5mL85%硫酸520nm，1cm比色皿測A取出，室溫置30min3、顯色測A容量瓶編號：1472356Vc標準使用液1.002.004.006.008.009.0010.001%硫脲定容二硝基苯肼2.00mL37℃恒溫水浴3h冰水冷卻，滴加5.00mL85%硫酸取出，室溫置30min520nm，1cm比色皿測A五、結(jié)果計算每百克食品中含抗壞血酸的毫克數(shù)

C--------×100

W

C：相當于標準溶液的量(mg)W：測定時所取得樣品溶液相當于樣品的量(g)式中：X---樣品中總抗壞血酸含量，mg/100gc---從標準曲線查得“樣品氧化液”中總Vc的濃度，ug/mlV---試樣用1%草酸定容的體積，mlm---樣品質(zhì)量，gF---樣品氧化處理過程中的稀釋倍數(shù)5、計算：①從標準曲線查出氧化稀釋液的維生素C的濃度。ρ

ug/mL②計算從提取到氧化處理過程中稀釋的倍數(shù)。F：對于干樣，F(xiàn)＝2；對于鮮樣，F(xiàn)＝取漿量/2樣品量×2③按教材P202公式計算總抗壞血酸含量。mg/100g五、注意事項說明：(1)

加入85％硫酸后，將試管從水中取出。溶液的顏色會繼續(xù)變深所以必須計算好，加入硫酸后準于30分鐘內(nèi)比色。(2)硫酸可防止抗壞血酸被氧化，且可幫助準于的形成，最終溶液中硫酸的濃度均需一致，否則影響色度。還原型抗壞血酸脫氫型抗壞血酸氧化二酮古樂糖酸氧化二酮古樂糖酸2，4-二硝基苯肼＋脎濃硫酸雙-2，4-二硝基苯520nm比色3、測定步驟樣品的制備顯色硫酸處理比色氧化稱一定樣（100g)鮮樣→加等量1%草酸→于高速搗碎機搗碎→取勻漿1—40g→用1%草酸定容100ml→過濾→濾液待用取濾液25ml→加2g活性炭→搖1分鐘→靜置過濾→棄去初濾液，取濾液10ml→加入2%硫脲溶液→混勻→得樣品氧化液取上述氧化液各4ml于三支試管中→向其中兩支管加入2%2，4-二硝基苯肼1.0ml,另一管作空白→將三支管加蓋→于37℃保溫箱3小時→取出后樣品管放入冰水中→樣品空白管取出后冷至室溫→在樣品空白管加入2，4-二硝基苯肼1ml→置于室溫下放置10-15min→樣品管和空白管都于冰浴中向上述已放入冰水中的三支試管各加入（9+1）H2SO45ml于各管中（邊加邊搖）→將試管從冰浴中取出→室溫下放置30分鐘后立即比色，在520nm測吸光度，從標準曲線上查出相應(yīng)的含量THEEND①所有試劑最好用重蒸餾水配制。②樣品采取后，應(yīng)浸泡在已知量的2%草酸溶液中，以防止維生素C氧化損失。測定時整個操作過程要迅速，防止抗壞血酸被氧化。③若測動物性樣品，須用10%三氯乙酸代替2%草酸溶液提取。④若樣品濾液顏色較深，影響滴定終點觀察，可加入白陶土再過濾。白陶土使用前應(yīng)測定回收率。⑤若樣品中含有Fe2+、Cu2+、Sn2+、亞硫酸鹽、硫代硫酸