血液分析儀及其臨床應(yīng)用課件

血液分析儀及其臨床應(yīng)用血液分析儀及其臨床應(yīng)用1血液分析儀（hematologyanalyzer,HA）：臨床血液一般檢查最常用儀器。

50年代，美國(guó)庫爾特（W.H.Coulter）發(fā)明電子血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀并申請(qǐng)專利。血液分析儀（hematologyanalyzer,HA）2血液分析儀優(yōu)勢(shì)：檢測(cè)項(xiàng)目多速度快精度高易操作血液分析儀優(yōu)勢(shì)：3一、檢測(cè)原理檢測(cè)功能：細(xì)胞計(jì)數(shù)功能細(xì)胞分類功能

檢測(cè)原理分為2類：（一）電阻抗法1.電阻抗原理(principleofelectricalimpedance)，又稱庫爾特原理（Coulterprinciple）一、檢測(cè)原理4Couler計(jì)數(shù)原理

孔電流真空內(nèi)電極外電極-+血細(xì)胞懸液標(biāo)本杯Couler計(jì)數(shù)原理5血液分析儀及其臨床應(yīng)用課件62.計(jì)數(shù)部件結(jié)構(gòu)組成等滲電解質(zhì)溶液細(xì)胞懸液小孔管（傳感器transducer）寶石孔（直徑<100μm，厚度約75μm）脈沖數(shù)量和大小反映細(xì)胞：數(shù)量體積大小2.計(jì)數(shù)部件結(jié)構(gòu)組成73.白細(xì)胞計(jì)數(shù)和分類計(jì)數(shù)原理儀器將體積為35～450fL的血細(xì)胞，分為256個(gè)通道（channel）。每個(gè)通道：1.64fl根據(jù)細(xì)胞大小，分別置于不同的通道中，顯示血細(xì)胞體積分布直方圖（Histogram）。

3.白細(xì)胞計(jì)數(shù)和分類計(jì)數(shù)原理8經(jīng)溶血素處理脫水后，血細(xì)胞體積大小發(fā)生了變化?。?！第一群（35～90fl）小細(xì)胞區(qū)：淋巴細(xì)胞（體積最?。阂话阍?5～90fl。第二群（90～160fl）是單個(gè)核細(xì)胞區(qū)，（中間細(xì)胞）：?jiǎn)魏思?xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞、原始、幼稚細(xì)胞、異常細(xì)胞等第三群（160fl以上）大細(xì)胞區(qū)：嗜中性粒細(xì)胞（體積最大）：一般在135-350fl經(jīng)溶血素處理脫水后，血細(xì)胞體積大小發(fā)生了變化?。?！9三分群血液分析儀正常白細(xì)胞分類模式圖（直方圖）

3590160300400450(fl)%三分群血液分析儀正常白細(xì)胞分類模式圖（直方圖）%10儀器組成：①信號(hào)發(fā)生器②放大器③閾值調(diào)節(jié)④甄別器⑤整形器⑥計(jì)數(shù)系統(tǒng)

儀器組成：112.電阻抗法紅細(xì)胞檢測(cè)原理（1）紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和血細(xì)胞比容測(cè)定與白細(xì)胞計(jì)數(shù)相似。(%)100200300400(fl)2.電阻抗法紅細(xì)胞檢測(cè)原理10012(2)血紅蛋白測(cè)定：血紅蛋白與溶血?jiǎng)┲械奶囟ㄔ噭┙Y(jié)合形成一種血紅蛋白衍生物，在530～550nm下進(jìn)行比色。ICSH推薦用氰化高鐵法（540nm比色）。非氰化溶血?jiǎng)?，如SDS-Hb。(3)紅細(xì)胞其他參數(shù)檢測(cè)(2)血紅蛋白測(cè)定：血紅蛋白與溶血?jiǎng)┲械奶囟ㄔ噭┙Y(jié)合形成一種133.電阻抗法血小板檢測(cè)原理血小板計(jì)數(shù)（platelet,PLT）：隨紅細(xì)胞在一個(gè)系統(tǒng)中進(jìn)行檢測(cè)。直方圖在2～28fl（不同儀器不一）。血小板平均體積（meanplateletvolume,MPV）。

102030(fl)%3.電阻抗法血小板檢測(cè)原理1014（二）光散射法血液分析儀檢測(cè)原理組合應(yīng)用電學(xué)光學(xué)細(xì)胞化學(xué)等（二）光散射法血液分析儀檢測(cè)原理15細(xì)胞流電學(xué)和光學(xué)檢測(cè)圖（AcT5diff）細(xì)胞流電學(xué)和光學(xué)檢測(cè)圖（AcT5diff）16光散射法白細(xì)胞檢測(cè)原理類別（1）激光與細(xì)胞化學(xué)法1）過氧化物酶檢測(cè)通道：嗜酸性粒細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞過氧化物酶活性比單核細(xì)胞強(qiáng)淋巴細(xì)胞、嗜堿粒細(xì)胞無過氧化物酶活性。散射圖定位：X軸為吸光率（酶反應(yīng)強(qiáng)度）、Y軸為光散射（細(xì)胞大小）顯示檢測(cè)結(jié)果。2）嗜堿性粒細(xì)胞/分葉核檢測(cè)通道。

光散射法白細(xì)胞檢測(cè)原理類別17（2）容量、電導(dǎo)、光散射（volume，conductivity，scatter,VCS）法：血細(xì)胞未經(jīng)任何處理，保持與體內(nèi)完全相同狀態(tài)下進(jìn)行。

VCS法檢測(cè)原理細(xì)胞體積技術(shù)（測(cè)量細(xì)胞大?。╇妼?dǎo)性技術(shù)（測(cè)量細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)）光散射（scatter,S）技術(shù)（測(cè)量細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞核和細(xì)胞顆粒）。（2）容量、電導(dǎo)、光散射（volume，conductivi18體積電導(dǎo)光散射體積電導(dǎo)19VCS可顯示3種細(xì)胞散點(diǎn)圖DF1（體積值和散射光值）DF2（體積值和電導(dǎo)值）DF3（體積值和電導(dǎo)值）：只顯示basophilVCS可顯示3種細(xì)胞散點(diǎn)圖20細(xì)胞流電學(xué)和光學(xué)散點(diǎn)圖（AcT5diff）細(xì)胞流電學(xué)和光學(xué)散點(diǎn)圖（AcT5diff）21VCS血液分析儀正常白細(xì)胞散點(diǎn)圖實(shí)例VCS血液分析儀正常白細(xì)胞散點(diǎn)圖實(shí)例22（3）電阻抗與射頻法（能透入細(xì)胞內(nèi)，測(cè)量核的大小及顆粒的多少）：①嗜酸性粒細(xì)胞檢測(cè)系統(tǒng)②嗜堿性粒細(xì)胞檢測(cè)系統(tǒng)③5種白細(xì)胞分類檢測(cè)系統(tǒng)：直流電（directcurrent，DC）為橫坐標(biāo)，以射頻（radiofrequency，RF）為縱坐標(biāo)。④幼稚細(xì)胞檢測(cè)系統(tǒng)：幼稚細(xì)胞膜脂質(zhì)較成熟細(xì)胞少。加入硫化氨基酸，與幼稚細(xì)胞的結(jié)合量多于較成熟的細(xì)胞幼稚細(xì)胞對(duì)溶血?jiǎng)┯械挚棺饔?，從而提供幼稚髓?xì)胞信息（immaturemyeloidinformation，IMI）。

（3）電阻抗與射頻法（能透入細(xì)胞內(nèi)，測(cè)量核的大小及顆粒的多少23（4）多角度偏振光散射（multi-anglepolarizedscatterseparationofwhitecell,MAPSS）法①0°：前角光散射（1°～3°），可粗略測(cè)定細(xì)胞大小。②10°：狹角光散射（7°～11°），可測(cè)定細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)相對(duì)特征。③90°：垂直光散射（70°～110°），測(cè)定細(xì)胞核分葉情況。④90°：消偏振光散射（70°～110°），區(qū)分嗜酸性粒細(xì)胞與其他細(xì)胞。

（4）多角度偏振光散射（multi-anglepolari242.光散射法紅細(xì)胞檢測(cè)原理低角度(2°～3°)：測(cè)量紅細(xì)胞體積高角度(5°～15°)：測(cè)定紅細(xì)胞血紅蛋白濃度得到MCV、MCH、MCHC測(cè)定值，計(jì)算出RDW、紅細(xì)胞血紅蛋白分布寬度（redbloodcellhemoglobindistributionwidth，HDW）2.光散射法紅細(xì)胞檢測(cè)原理253.光散射法血小板檢測(cè)原理Mie理論（Mietheoryoflightscatterforhomogeneousspheres）：當(dāng)球形化的血小板一個(gè)一個(gè)通過激光照射區(qū)時(shí)：3.光散射法血小板檢測(cè)原理26高角度（5°～15°）：檢測(cè)細(xì)胞折射指數(shù)（reactiveindex，RI）；低角度（2°～3°）：測(cè)量細(xì)胞大小。大血小板與各種碎片如果體積相似，但由于內(nèi)容物不同，RI相差較大，故能鑒別。

高角度（5°～15°）：檢測(cè)細(xì)胞折射指數(shù)（reactive275.網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（reticulocyte，RET）原理20世紀(jì)90年代起，有多種檢測(cè)原理相似網(wǎng)織紅細(xì)胞分析儀。（1）血液分析儀檢測(cè)原理：用新亞甲藍(lán)染色使紅細(xì)胞RNA著色或用熒光染料對(duì)RNA進(jìn)行染色。5.網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（reticulocyte，RET）原理28檢測(cè)參數(shù)：網(wǎng)織紅細(xì)胞絕對(duì)值（RET#）網(wǎng)織紅細(xì)胞百分?jǐn)?shù)（RET%）網(wǎng)織紅細(xì)胞平均體積（MCVr）網(wǎng)織紅細(xì)胞成熟指數(shù)（RMI）網(wǎng)織紅細(xì)胞分布寬度（reticulocytedistributionwidth,RDWr）檢測(cè)參數(shù)：29新亞甲藍(lán)網(wǎng)織紅細(xì)胞染色新亞甲藍(lán)網(wǎng)織紅細(xì)胞染色30血液分析儀及其臨床應(yīng)用課件31光散射法網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測(cè)散點(diǎn)圖光散射法網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測(cè)散點(diǎn)圖32二、檢測(cè)參數(shù)（一）檢測(cè)參數(shù)中高檔儀器檢測(cè)參數(shù)：20項(xiàng)左右或超過40多項(xiàng)二、檢測(cè)參數(shù)33（二）檢測(cè)結(jié)果及表達(dá)形式表常見血液分析報(bào)告用語及英文縮寫詞（二）檢測(cè)結(jié)果及表達(dá)形式34三、細(xì)胞直方圖橫坐標(biāo)為血細(xì)胞體積大小縱坐標(biāo)為不同體積細(xì)胞的相對(duì)頻率。

（一）白細(xì)胞直方圖正常白細(xì)胞直方圖出現(xiàn)異常直方圖時(shí)，常伴警報(bào)信號(hào)，如“H（high，高）”或“L（low，低）”。

三、細(xì)胞直方圖35（二）紅細(xì)胞直方圖正常紅細(xì)胞分布：50～200fl峰左移峰右移雙峰

（三）血小板直方圖正常血小板直方圖呈左偏態(tài)分布：2～30fl分布，主要在2～15fl。（二）紅細(xì)胞直方圖36四、方法學(xué)評(píng)價(jià)（一）儀器類型和特點(diǎn)1.單純電阻抗法三分群血液分析儀特點(diǎn)（1）檢測(cè)參數(shù)：紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血小板（2）白細(xì)胞分類（3）直方圖（4）報(bào)警(flag)功能：文字、圖標(biāo)

四、方法學(xué)評(píng)價(jià)372.綜合光學(xué)電學(xué)技術(shù)血液分析儀特點(diǎn)（1）檢測(cè)參數(shù)：紅細(xì)胞白細(xì)胞血小板網(wǎng)織紅細(xì)胞幼稚細(xì)胞2.綜合光學(xué)電學(xué)技術(shù)血液分析儀特點(diǎn)（1）檢測(cè)參數(shù)：38（2）白細(xì)胞分類五分類，準(zhǔn)確性較三分群血液分析儀高。（3）直方圖和散點(diǎn)圖：紅細(xì)胞直方圖白細(xì)胞直方圖血小板直方圖白細(xì)胞分類散點(diǎn)圖。（4）報(bào)警功能：文字、圖標(biāo)（2）白細(xì)胞分類393.自動(dòng)化程度操作過程：半自動(dòng)、全自動(dòng)儲(chǔ)存信息：質(zhì)量控制：質(zhì)量控制軟件、顯示質(zhì)控圖形

至今，血液分析儀還只能用作健康人血液篩檢之用，尚不能完全代替顯微鏡功能。3.自動(dòng)化程度40(二)儀器性能評(píng)價(jià)（ICSH）

1.可比性(comparability)指血液分析儀測(cè)定結(jié)果，與常規(guī)方法所測(cè)結(jié)果相比較。顯微鏡法是血細(xì)胞檢驗(yàn)基礎(chǔ)。P＞0.05有可比性。P＜0.05無可比性結(jié)論：計(jì)數(shù)細(xì)胞越多、選用吸管、計(jì)數(shù)盤越多，計(jì)數(shù)結(jié)果接近真值。實(shí)際工作中，鏡檢法很難達(dá)到此要求。

(二)儀器性能評(píng)價(jià)（ICSH）41經(jīng)嚴(yán)格校正的血液分析儀：計(jì)數(shù)細(xì)胞多操作步驟標(biāo)準(zhǔn)化精確性高（CV可＜2%）準(zhǔn)確性較高經(jīng)嚴(yán)格校正的血液分析儀：422.準(zhǔn)確性(accuracy)準(zhǔn)確性是指測(cè)定結(jié)果與真值一致性的程度。

3.總重復(fù)性(overallprecision)指同一份標(biāo)本多次測(cè)量的結(jié)果接近的程度。重復(fù)測(cè)定1份抗凝靜脈血10次，計(jì)算CV值。2.準(zhǔn)確性(accuracy)準(zhǔn)確性是指測(cè)定結(jié)果與真434.精密度(precision)批內(nèi)（within-batch）精密度：同一批樣本重復(fù)測(cè)定結(jié)果的評(píng)價(jià)。批間(between-batch)精密度：對(duì)兩批或兩批以上樣本重復(fù)測(cè)定結(jié)果的評(píng)價(jià)。

攜帶污染率(carryover)：連續(xù)測(cè)定1份高值樣本3次（i1、i2、i3）再測(cè)定1份低值樣本3次（j1、j2、j3）攜帶污染率（%）＝（j1-j3）/（i3-J3）4.精密度(precision)44精確度和準(zhǔn)確度精確度和準(zhǔn)確度455.線性范圍指測(cè)定值與稀釋倍數(shù)是否呈比例關(guān)系。線性關(guān)系范圍越寬越理想。P＜0.01,非線性相關(guān)。P＞0.05，未偏離線性。5.線性范圍46稀釋效果MCHMCVMCHCRBC稀釋效果47（三）影響直方圖變化的因素1.儀器因素血細(xì)胞體積大小儀器閾值孔電壓2.試劑因素稀釋液：導(dǎo)電率、滲透壓、離子強(qiáng)度溶血?jiǎng)悍N類、濃度、用量和溶血時(shí)間（三）影響直方圖變化的因素483.操作人員技能：高素質(zhì)技術(shù)培訓(xùn)上崗前要仔細(xì)閱讀隨機(jī)手冊(cè)掌握ICSH推薦的儀器性能評(píng)價(jià)方法全程質(zhì)量控制3.操作人員技能：494.循證醫(yī)學(xué)對(duì)血液分析儀應(yīng)用指導(dǎo)

（1）循證醫(yī)學(xué)（evidence-basedmedicine,EBM）：謹(jǐn)慎、準(zhǔn)確、合理而明智地對(duì)每個(gè)患者作出臨床決策。循證檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)（evidence-basedlaboratorymedicine,EBLM）。（2）為臨床提供真實(shí)可靠實(shí)驗(yàn)診斷證據(jù)。（3）用循征檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)思維客觀評(píng)價(jià)檢驗(yàn)。

4.循證醫(yī)學(xué)對(duì)血液分析儀應(yīng)用指導(dǎo)50五、臨床應(yīng)用（一）檢測(cè)參數(shù)臨床意義1.紅細(xì)胞參數(shù)（1）MCV和RDW：可用于缺鐵性貧血的早期診斷和鑒別診斷。（2）紅細(xì)胞血紅蛋白分布寬度五、臨床應(yīng)用512.血小板參數(shù)

（1）血小板計(jì)數(shù)（2）血小板平均體積（meanplateletvolume,MPV）:鑒別血小板減低的病因：MPV增高：外周血血小板破壞過多致血小板減低

2.血小板參數(shù)52MPV減低：骨髓病變引起血小板減低。評(píng)估骨髓造血功能恢復(fù)的情況：局部炎癥：骨髓造血未受抑制，MPV正常。敗血癥：骨髓造血功能抑制，MPV減低。白血病緩解：MPV增高。骨髓造血衰竭：MPV、PLT持續(xù)減低。

MPV越小，骨髓受抑制越嚴(yán)重。骨髓功能恢復(fù)時(shí)，首先MPV上升，然后PLT逐漸上升。MPV與血小板功能明顯相關(guān)：有出血傾向者M(jìn)PV顯著低于無出血傾向者。MPV減低：53（二）紅細(xì)胞直方圖在貧血中的應(yīng)用1.小細(xì)胞性貧血（1）RDW正常：輕型地中海貧血（2）RDW輕度增高：缺鐵性貧血（3）RDW明顯增高，兩個(gè)細(xì)胞峰，小細(xì)胞峰明顯左移：鐵粒幼細(xì)胞性貧血、缺鐵性貧血經(jīng)治療有效（二）紅細(xì)胞直方圖在貧血中的應(yīng)用542.大細(xì)胞性貧血(1)RDW正常，細(xì)胞主峰明顯右移：溶血性貧血白血病前期再生障礙性貧血巨幼細(xì)胞性貧血(2)RDW輕度增高，紅細(xì)胞峰明顯右移，基底增寬：葉酸、維生素B12缺乏性巨幼細(xì)胞性貧血。(3)RDW明顯增高，紅細(xì)胞峰明顯右移，出現(xiàn)兩個(gè)峰：巨幼細(xì)胞貧血，葉酸、維生素B12治療初。2.大細(xì)胞性貧血553.正細(xì)胞性貧血

（1）RDW正常：慢性病急性失血骨髓纖維化骨髓發(fā)育不良

(2)RDW輕度增高：血紅蛋白異常骨髓纖維化

（3）RDW明顯增高：早期或混合性營(yíng)養(yǎng)不良3.正細(xì)胞性貧血56（三）血小板直方圖臨床應(yīng)用1.紅細(xì)胞碎片可干擾血小板直方圖2.血小板聚集直方圖峰左側(cè)起點(diǎn)較高M(jìn)CV和RDW正常，可排除小紅細(xì)胞干擾

3.小紅細(xì)胞干擾峰右側(cè)離橫坐標(biāo)較高，呈脫尾狀。

4.小血小板峰左移，MPV偏小。血涂片可見較多小血小板。

5.MPV與PLT呈非線性負(fù)相關(guān)。（三）血小板直方圖臨床應(yīng)用57（四）白細(xì)胞直方圖臨床應(yīng)用直方圖只能提示白細(xì)胞比例變化或可能出現(xiàn)異常細(xì)胞，故要求用顯微鏡復(fù)查血涂片。1.中性粒細(xì)胞增高(淋巴細(xì)胞相對(duì)減低)嗜中性粒細(xì)胞增多淋巴細(xì)胞減低癥

（四）白細(xì)胞直方圖臨床應(yīng)用58（四）白細(xì)胞直方圖臨床應(yīng)用直方圖只能提示白細(xì)胞比例變化或可能出現(xiàn)異常細(xì)胞，故要求用顯微鏡復(fù)查血涂片。1.中性粒細(xì)胞增高(淋巴細(xì)胞相對(duì)減低)嗜中性粒細(xì)胞增多淋巴細(xì)胞減低癥2.中性粒細(xì)胞減低（淋巴細(xì)胞比例增高）嬰幼兒再生障礙性貧血嗜中性粒細(xì)胞缺乏癥淋巴細(xì)胞增多癥傳染性單核細(xì)胞增多癥慢性淋巴細(xì)胞白血病

血液分析儀及其臨床應(yīng)用課件593.嗜酸性粒細(xì)胞或單核細(xì)胞淋巴細(xì)胞與單核細(xì)胞之間區(qū)域異常?？赡艽嬖冢寒愋土馨图?xì)胞、漿細(xì)胞，原始細(xì)胞，嗜酸性粒細(xì)胞，嗜堿性粒細(xì)胞等。4.急性白血病白血病細(xì)胞在某一區(qū)域出高大細(xì)胞峰，同時(shí)有報(bào)警。5.慢性白血病在單個(gè)核細(xì)胞區(qū)和嗜中性粒細(xì)胞區(qū)左側(cè)范圍有一高大的細(xì)胞峰。

3.嗜酸性粒細(xì)胞或單核細(xì)胞606.有核細(xì)胞干擾未溶解有核紅細(xì)胞巨大血小板乳糜顆粒6.有核細(xì)胞干擾61（五）網(wǎng)織紅細(xì)胞參數(shù)臨床應(yīng)用（1）骨髓移植（bonemarrowtransplant,BNT）：RET是獨(dú)立監(jiān)測(cè)骨髓造血恢復(fù)的參數(shù)HFR變化比RET總數(shù)變化更有重要意義。

（2）貧血：HFR、MFR和LFR是反映造血功能新參數(shù)。貧血鑒別診斷的初篩指標(biāo)。

（五）網(wǎng)織紅細(xì)胞參數(shù)臨床應(yīng)用62（3）放射療法和化學(xué)療法：HFR、MFR和LFR是骨髓抑制或恢復(fù)造血較敏感的指標(biāo)。（4）網(wǎng)織紅細(xì)胞成熟指數(shù)RMI=(MFR＋HFR)/LFR×100RMI減低提示骨髓衰竭和造血無效。（3）放射療法和化學(xué)療法：HFR、MFR和LFR是骨髓抑制或63血液分析儀及其臨床應(yīng)用血液分析儀及其臨床應(yīng)用64血液分析儀（hematologyanalyzer,HA）：臨床血液一般檢查最常用儀器。

50年代，美國(guó)庫爾特（W.H.Coulter）發(fā)明電子血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀并申請(qǐng)專利。血液分析儀（hematologyanalyzer,HA）65血液分析儀優(yōu)勢(shì)：檢測(cè)項(xiàng)目多速度快精度高易操作血液分析儀優(yōu)勢(shì)：66一、檢測(cè)原理檢測(cè)功能：細(xì)胞計(jì)數(shù)功能細(xì)胞分類功能

檢測(cè)原理分為2類：（一）電阻抗法1.電阻抗原理(principleofelectricalimpedance)，又稱庫爾特原理（Coulterprinciple）一、檢測(cè)原理67Couler計(jì)數(shù)原理

孔電流真空內(nèi)電極外電極-+血細(xì)胞懸液標(biāo)本杯Couler計(jì)數(shù)原理68血液分析儀及其臨床應(yīng)用課件692.計(jì)數(shù)部件結(jié)構(gòu)組成等滲電解質(zhì)溶液細(xì)胞懸液小孔管（傳感器transducer）寶石孔（直徑<100μm，厚度約75μm）脈沖數(shù)量和大小反映細(xì)胞：數(shù)量體積大小2.計(jì)數(shù)部件結(jié)構(gòu)組成703.白細(xì)胞計(jì)數(shù)和分類計(jì)數(shù)原理儀器將體積為35～450fL的血細(xì)胞，分為256個(gè)通道（channel）。每個(gè)通道：1.64fl根據(jù)細(xì)胞大小，分別置于不同的通道中，顯示血細(xì)胞體積分布直方圖（Histogram）。

3.白細(xì)胞計(jì)數(shù)和分類計(jì)數(shù)原理71經(jīng)溶血素處理脫水后，血細(xì)胞體積大小發(fā)生了變化?。?！第一群（35～90fl）小細(xì)胞區(qū)：淋巴細(xì)胞（體積最?。阂话阍?5～90fl。第二群（90～160fl）是單個(gè)核細(xì)胞區(qū)，（中間細(xì)胞）：?jiǎn)魏思?xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞、原始、幼稚細(xì)胞、異常細(xì)胞等第三群（160fl以上）大細(xì)胞區(qū)：嗜中性粒細(xì)胞（體積最大）：一般在135-350fl經(jīng)溶血素處理脫水后，血細(xì)胞體積大小發(fā)生了變化！??！72三分群血液分析儀正常白細(xì)胞分類模式圖（直方圖）

3590160300400450(fl)%三分群血液分析儀正常白細(xì)胞分類模式圖（直方圖）%73儀器組成：①信號(hào)發(fā)生器②放大器③閾值調(diào)節(jié)④甄別器⑤整形器⑥計(jì)數(shù)系統(tǒng)

儀器組成：742.電阻抗法紅細(xì)胞檢測(cè)原理（1）紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和血細(xì)胞比容測(cè)定與白細(xì)胞計(jì)數(shù)相似。(%)100200300400(fl)2.電阻抗法紅細(xì)胞檢測(cè)原理10075(2)血紅蛋白測(cè)定：血紅蛋白與溶血?jiǎng)┲械奶囟ㄔ噭┙Y(jié)合形成一種血紅蛋白衍生物，在530～550nm下進(jìn)行比色。ICSH推薦用氰化高鐵法（540nm比色）。非氰化溶血?jiǎng)?，如SDS-Hb。(3)紅細(xì)胞其他參數(shù)檢測(cè)(2)血紅蛋白測(cè)定：血紅蛋白與溶血?jiǎng)┲械奶囟ㄔ噭┙Y(jié)合形成一種763.電阻抗法血小板檢測(cè)原理血小板計(jì)數(shù)（platelet,PLT）：隨紅細(xì)胞在一個(gè)系統(tǒng)中進(jìn)行檢測(cè)。直方圖在2～28fl（不同儀器不一）。血小板平均體積（meanplateletvolume,MPV）。

102030(fl)%3.電阻抗法血小板檢測(cè)原理1077（二）光散射法血液分析儀檢測(cè)原理組合應(yīng)用電學(xué)光學(xué)細(xì)胞化學(xué)等（二）光散射法血液分析儀檢測(cè)原理78細(xì)胞流電學(xué)和光學(xué)檢測(cè)圖（AcT5diff）細(xì)胞流電學(xué)和光學(xué)檢測(cè)圖（AcT5diff）79光散射法白細(xì)胞檢測(cè)原理類別（1）激光與細(xì)胞化學(xué)法1）過氧化物酶檢測(cè)通道：嗜酸性粒細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞過氧化物酶活性比單核細(xì)胞強(qiáng)淋巴細(xì)胞、嗜堿粒細(xì)胞無過氧化物酶活性。散射圖定位：X軸為吸光率（酶反應(yīng)強(qiáng)度）、Y軸為光散射（細(xì)胞大小）顯示檢測(cè)結(jié)果。2）嗜堿性粒細(xì)胞/分葉核檢測(cè)通道。

光散射法白細(xì)胞檢測(cè)原理類別80（2）容量、電導(dǎo)、光散射（volume，conductivity，scatter,VCS）法：血細(xì)胞未經(jīng)任何處理，保持與體內(nèi)完全相同狀態(tài)下進(jìn)行。

VCS法檢測(cè)原理細(xì)胞體積技術(shù)（測(cè)量細(xì)胞大?。╇妼?dǎo)性技術(shù)（測(cè)量細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)）光散射（scatter,S）技術(shù)（測(cè)量細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞核和細(xì)胞顆粒）。（2）容量、電導(dǎo)、光散射（volume，conductivi81體積電導(dǎo)光散射體積電導(dǎo)82VCS可顯示3種細(xì)胞散點(diǎn)圖DF1（體積值和散射光值）DF2（體積值和電導(dǎo)值）DF3（體積值和電導(dǎo)值）：只顯示basophilVCS可顯示3種細(xì)胞散點(diǎn)圖83細(xì)胞流電學(xué)和光學(xué)散點(diǎn)圖（AcT5diff）細(xì)胞流電學(xué)和光學(xué)散點(diǎn)圖（AcT5diff）84VCS血液分析儀正常白細(xì)胞散點(diǎn)圖實(shí)例VCS血液分析儀正常白細(xì)胞散點(diǎn)圖實(shí)例85（3）電阻抗與射頻法（能透入細(xì)胞內(nèi)，測(cè)量核的大小及顆粒的多少）：①嗜酸性粒細(xì)胞檢測(cè)系統(tǒng)②嗜堿性粒細(xì)胞檢測(cè)系統(tǒng)③5種白細(xì)胞分類檢測(cè)系統(tǒng)：直流電（directcurrent，DC）為橫坐標(biāo)，以射頻（radiofrequency，RF）為縱坐標(biāo)。④幼稚細(xì)胞檢測(cè)系統(tǒng)：幼稚細(xì)胞膜脂質(zhì)較成熟細(xì)胞少。加入硫化氨基酸，與幼稚細(xì)胞的結(jié)合量多于較成熟的細(xì)胞幼稚細(xì)胞對(duì)溶血?jiǎng)┯械挚棺饔?，從而提供幼稚髓?xì)胞信息（immaturemyeloidinformation，IMI）。

（3）電阻抗與射頻法（能透入細(xì)胞內(nèi)，測(cè)量核的大小及顆粒的多少86（4）多角度偏振光散射（multi-anglepolarizedscatterseparationofwhitecell,MAPSS）法①0°：前角光散射（1°～3°），可粗略測(cè)定細(xì)胞大小。②10°：狹角光散射（7°～11°），可測(cè)定細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)相對(duì)特征。③90°：垂直光散射（70°～110°），測(cè)定細(xì)胞核分葉情況。④90°：消偏振光散射（70°～110°），區(qū)分嗜酸性粒細(xì)胞與其他細(xì)胞。

（4）多角度偏振光散射（multi-anglepolari872.光散射法紅細(xì)胞檢測(cè)原理低角度(2°～3°)：測(cè)量紅細(xì)胞體積高角度(5°～15°)：測(cè)定紅細(xì)胞血紅蛋白濃度得到MCV、MCH、MCHC測(cè)定值，計(jì)算出RDW、紅細(xì)胞血紅蛋白分布寬度（redbloodcellhemoglobindistributionwidth，HDW）2.光散射法紅細(xì)胞檢測(cè)原理883.光散射法血小板檢測(cè)原理Mie理論（Mietheoryoflightscatterforhomogeneousspheres）：當(dāng)球形化的血小板一個(gè)一個(gè)通過激光照射區(qū)時(shí)：3.光散射法血小板檢測(cè)原理89高角度（5°～15°）：檢測(cè)細(xì)胞折射指數(shù)（reactiveindex，RI）；低角度（2°～3°）：測(cè)量細(xì)胞大小。大血小板與各種碎片如果體積相似，但由于內(nèi)容物不同，RI相差較大，故能鑒別。

高角度（5°～15°）：檢測(cè)細(xì)胞折射指數(shù)（reactive905.網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（reticulocyte，RET）原理20世紀(jì)90年代起，有多種檢測(cè)原理相似網(wǎng)織紅細(xì)胞分析儀。（1）血液分析儀檢測(cè)原理：用新亞甲藍(lán)染色使紅細(xì)胞RNA著色或用熒光染料對(duì)RNA進(jìn)行染色。5.網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（reticulocyte，RET）原理91檢測(cè)參數(shù)：網(wǎng)織紅細(xì)胞絕對(duì)值（RET#）網(wǎng)織紅細(xì)胞百分?jǐn)?shù)（RET%）網(wǎng)織紅細(xì)胞平均體積（MCVr）網(wǎng)織紅細(xì)胞成熟指數(shù)（RMI）網(wǎng)織紅細(xì)胞分布寬度（reticulocytedistributionwidth,RDWr）檢測(cè)參數(shù)：92新亞甲藍(lán)網(wǎng)織紅細(xì)胞染色新亞甲藍(lán)網(wǎng)織紅細(xì)胞染色93血液分析儀及其臨床應(yīng)用課件94光散射法網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測(cè)散點(diǎn)圖光散射法網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測(cè)散點(diǎn)圖95二、檢測(cè)參數(shù)（一）檢測(cè)參數(shù)中高檔儀器檢測(cè)參數(shù)：20項(xiàng)左右或超過40多項(xiàng)二、檢測(cè)參數(shù)96（二）檢測(cè)結(jié)果及表達(dá)形式表常見血液分析報(bào)告用語及英文縮寫詞（二）檢測(cè)結(jié)果及表達(dá)形式97三、細(xì)胞直方圖橫坐標(biāo)為血細(xì)胞體積大小縱坐標(biāo)為不同體積細(xì)胞的相對(duì)頻率。

（一）白細(xì)胞直方圖正常白細(xì)胞直方圖出現(xiàn)異常直方圖時(shí)，常伴警報(bào)信號(hào)，如“H（high，高）”或“L（low，低）”。

三、細(xì)胞直方圖98（二）紅細(xì)胞直方圖正常紅細(xì)胞分布：50～200fl峰左移峰右移雙峰

（三）血小板直方圖正常血小板直方圖呈左偏態(tài)分布：2～30fl分布，主要在2～15fl。（二）紅細(xì)胞直方圖99四、方法學(xué)評(píng)價(jià)（一）儀器類型和特點(diǎn)1.單純電阻抗法三分群血液分析儀特點(diǎn)（1）檢測(cè)參數(shù)：紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血小板（2）白細(xì)胞分類（3）直方圖（4）報(bào)警(flag)功能：文字、圖標(biāo)

四、方法學(xué)評(píng)價(jià)1002.綜合光學(xué)電學(xué)技術(shù)血液分析儀特點(diǎn)（1）檢測(cè)參數(shù)：紅細(xì)胞白細(xì)胞血小板網(wǎng)織紅細(xì)胞幼稚細(xì)胞2.綜合光學(xué)電學(xué)技術(shù)血液分析儀特點(diǎn)（1）檢測(cè)參數(shù)：101（2）白細(xì)胞分類五分類，準(zhǔn)確性較三分群血液分析儀高。（3）直方圖和散點(diǎn)圖：紅細(xì)胞直方圖白細(xì)胞直方圖血小板直方圖白細(xì)胞分類散點(diǎn)圖。（4）報(bào)警功能：文字、圖標(biāo)（2）白細(xì)胞分類1023.自動(dòng)化程度操作過程：半自動(dòng)、全自動(dòng)儲(chǔ)存信息：質(zhì)量控制：質(zhì)量控制軟件、顯示質(zhì)控圖形

至今，血液分析儀還只能用作健康人血液篩檢之用，尚不能完全代替顯微鏡功能。3.自動(dòng)化程度103(二)儀器性能評(píng)價(jià)（ICSH）

1.可比性(comparability)指血液分析儀測(cè)定結(jié)果，與常規(guī)方法所測(cè)結(jié)果相比較。顯微鏡法是血細(xì)胞檢驗(yàn)基礎(chǔ)。P＞0.05有可比性。P＜0.05無可比性結(jié)論：計(jì)數(shù)細(xì)胞越多、選用吸管、計(jì)數(shù)盤越多，計(jì)數(shù)結(jié)果接近真值。實(shí)際工作中，鏡檢法很難達(dá)到此要求。

(二)儀器性能評(píng)價(jià)（ICSH）104經(jīng)嚴(yán)格校正的血液分析儀：計(jì)數(shù)細(xì)胞多操作步驟標(biāo)準(zhǔn)化精確性高（CV可＜2%）準(zhǔn)確性較高經(jīng)嚴(yán)格校正的血液分析儀：1052.準(zhǔn)確性(accuracy)準(zhǔn)確性是指測(cè)定結(jié)果與真值一致性的程度。

3.總重復(fù)性(overallprecision)指同一份標(biāo)本多次測(cè)量的結(jié)果接近的程度。重復(fù)測(cè)定1份抗凝靜脈血10次，計(jì)算CV值。2.準(zhǔn)確性(accuracy)準(zhǔn)確性是指測(cè)定結(jié)果與真1064.精密度(precision)批內(nèi)（within-batch）精密度：同一批樣本重復(fù)測(cè)定結(jié)果的評(píng)價(jià)。批間(between-batch)精密度：對(duì)兩批或兩批以上樣本重復(fù)測(cè)定結(jié)果的評(píng)價(jià)。

攜帶污染率(carryover)：連續(xù)測(cè)定1份高值樣本3次（i1、i2、i3）再測(cè)定1份低值樣本3次（j1、j2、j3）攜帶污染率（%）＝（j1-j3）/（i3-J3）4.精密度(precision)107精確度和準(zhǔn)確度精確度和準(zhǔn)確度1085.線性范圍指測(cè)定值與稀釋倍數(shù)是否呈比例關(guān)系。線性關(guān)系范圍越寬越理想。P＜0.01,非線性相關(guān)。P＞0.05，未偏離線性。5.線性范圍109稀釋效果MCHMCVMCHCRBC稀釋效果110（三）影響直方圖變化的因素1.儀器因素血細(xì)胞體積大小儀器閾值孔電壓2.試劑因素稀釋液：導(dǎo)電率、滲透壓、離子強(qiáng)度溶血?jiǎng)悍N類、濃度、用量和溶血時(shí)間（三）影響直方圖變化的因素1113.操作人員技能：高素質(zhì)技術(shù)培訓(xùn)上崗前要仔細(xì)閱讀隨機(jī)手冊(cè)掌握ICSH推薦的儀器性能評(píng)價(jià)方法全程質(zhì)量控制3.操作人員技能：1124.循證醫(yī)學(xué)對(duì)血液分析儀應(yīng)用指導(dǎo)

（1）循證醫(yī)學(xué)（evidence-basedmedicine,EBM）：謹(jǐn)慎、準(zhǔn)確、合理而明智地對(duì)每個(gè)患者作出臨床決策。循證檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)（evidence-basedlaboratorymedicine,EBLM）。（2）為臨床提供真實(shí)可靠實(shí)驗(yàn)診斷證據(jù)。（3）用循征檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)思維客觀評(píng)價(jià)檢驗(yàn)。

4.循證醫(yī)學(xué)對(duì)血液分析儀應(yīng)用指導(dǎo)113五、臨床應(yīng)用（一）檢測(cè)參數(shù)臨床意義1.紅細(xì)胞參數(shù)（1）MCV和RDW：可用于缺鐵性貧血的早期診斷和鑒別診斷。（2）紅細(xì)胞血紅蛋白分布寬度五、臨床應(yīng)用1142.血小板參數(shù)

（1）血小板計(jì)數(shù)（2）血小板平均體積（meanplateletvolume,MPV）:鑒別血小板減低的病因：MPV增高：外周血血小板破壞過多致血小板減低

2.血小板參數(shù)115MPV減低：骨髓病變引起血小板減低。評(píng)估骨髓造血功能恢復(fù)的情況：局部炎癥：骨髓造血未受抑制，MPV正常。敗血癥：骨髓造血功能抑制，MPV減低。白血病緩解：