項(xiàng)目3發(fā)酵技術(shù)生產(chǎn)生物藥物任務(wù)1發(fā)酵法生產(chǎn)白細(xì)胞介素課件

項(xiàng)目3：發(fā)酵技術(shù)生產(chǎn)生物藥物

任務(wù)1：發(fā)酵法生產(chǎn)L－天冬酰胺酶

項(xiàng)目3：發(fā)酵技術(shù)生產(chǎn)生物藥物

任務(wù)1：發(fā)酵法生產(chǎn)L－天冬酰1教學(xué)安排：

1.員工培訓(xùn)由老師講解L－天冬酰胺酶生產(chǎn)的理論基礎(chǔ)。分配實(shí)操任務(wù)：L－天冬酰胺酶發(fā)酵生產(chǎn)。

教學(xué)安排：2

2.學(xué)生模擬組建運(yùn)營一個(gè)L－天冬酰胺酶生產(chǎn)企業(yè)，撰寫計(jì)劃書(在理論教學(xué)期間完成)。

市場(chǎng)部：L－天冬酰胺酶的結(jié)構(gòu)、功能、用途，L－天冬酰胺酶市場(chǎng)狀況與銷售預(yù)測(cè)，競(jìng)爭(zhēng)對(duì)手狀況與分析。技術(shù)部：確定L－天冬酰胺酶生產(chǎn)的工藝流程及工藝參數(shù)，編制生產(chǎn)操作規(guī)程，確定生產(chǎn)車間的布局。2.學(xué)生模擬組建運(yùn)營一個(gè)L－天冬酰胺酶生產(chǎn)3品控部：制定L－天冬酰胺酶的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，生產(chǎn)取樣分析操作規(guī)程，質(zhì)量檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)和操作規(guī)程?？偨?jīng)理：協(xié)調(diào)監(jiān)督各部工作，最后拿出完整的計(jì)劃書。品控部：制定L－天冬酰胺酶的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，生產(chǎn)4

一藥用酶的分類及應(yīng)用（一）促進(jìn)消化酶類水解和消化食物。（二）消炎酶類蛋白酶類有消炎作用。（三）與治療心腦血管疾病有關(guān)的酶類鏈激酶、尿激酶、纖溶酶、凝血酶和蚓激酶。第一節(jié)藥用酶概述一藥用酶的分類及應(yīng)用第一節(jié)藥用酶概述5

（四）抗腫瘤的酶類門冬酰氨酶、谷氨酰氨酶、蛋氨酸酶、酪氨酸氧化酶。（五）與生物氧化還原電子傳遞有關(guān)的酶細(xì)胞色素C、超氧化物歧化酶、過氧化酶。（六）其他藥用酶解毒：青霉素酶、有機(jī)磷解毒酶等。降低組織間黏度：透明質(zhì)酸。降血壓和血脂：彈性蛋白酶。治療血管收縮有關(guān)：激肽釋放酶。（四）抗腫瘤的酶類6第二節(jié)L-天冬酰酶生產(chǎn)工藝一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)由四個(gè)相同亞基組成，有222個(gè)對(duì)稱軸，每個(gè)亞基含326個(gè)氨基酸殘基。用于兒童急性淋巴細(xì)胞白血病、單細(xì)胞白血病、淋巴肉瘤、胰腺癌等。第二節(jié)L-天冬酰酶生產(chǎn)工藝一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)7

機(jī)理：降低人體內(nèi)天冬酰胺和谷氨酰胺濃度，正常細(xì)胞可自我合成，癌細(xì)胞不具備這種能力，從而受到抑制。

性狀：白色粉末，微吸濕，溶于水，不溶于有機(jī)溶劑。機(jī)理：8二、生產(chǎn)工藝1工藝路線二、生產(chǎn)工藝9項(xiàng)目3發(fā)酵技術(shù)生產(chǎn)生物藥物任務(wù)1發(fā)酵法生產(chǎn)白細(xì)胞介素課件102工藝過程及控制要點(diǎn)(1)菌種培養(yǎng)采取大腸桿菌AS1-375，普通牛肉培養(yǎng)基，接種后于37℃培養(yǎng)24h。

2工藝過程及控制要點(diǎn)11(2)種子培養(yǎng)

16％玉米漿，接種量1％～1.5％，37℃通氣攪拌培養(yǎng)4～8h。(2)種子培養(yǎng)12(3)發(fā)酵罐培養(yǎng)玉米漿培養(yǎng)基，接種量8％，37℃通氣攪拌培養(yǎng)6～8h，離心分離發(fā)酵液，得菌體，加2倍量丙酮攪拌，壓濾，濾餅過篩，自然風(fēng)干成菌體干粉。

(3)發(fā)酵罐培養(yǎng)13(4)提取、沉淀、熱處理

每千克菌體干粉加入0.Olmol／LpH8.0的硼酸緩沖液lOL37℃保溫?cái)嚢?.5h，降溫到30℃以后，用5mol／L醋酸調(diào)節(jié)pH4.2～4.4進(jìn)行壓濾，濾液中加入0.2倍體積的丙酮，放置3～4h，過濾，收集沉淀，自然風(fēng)干，即得干粗酶。

(4)提取、沉淀、熱處理14取粗制酶，加入0.3％甘氨酸溶液，調(diào)節(jié)pH8.8，攪拌1.5h，離心，收集上清液，加熱到60℃30min進(jìn)行熱處理。離心棄去沉淀，上清液加2倍體積的丙酮，析出沉淀，離心，收集酶沉淀，用0.01mol／L，pH8.0磷酸緩沖液溶解，再離心棄去不溶物，得上清酶溶液。

取粗制酶，加入0.3％甘氨酸溶液，調(diào)節(jié)pH8.8，15(5)精制、凍干上述酶溶液調(diào)節(jié)pH8.8，離心棄去沉淀，清液再調(diào)pH7.7加入50％聚乙二醇，使?jié)舛冗_(dá)到16％。在2～5℃放置4～5天，離心得沉淀。用蒸餾水溶解，加4倍量的丙酮，沉淀，同法反復(fù)1次，沉淀用pH6.4，0.05mol／L磷酸緩沖液溶解，50％聚乙二醇反復(fù)處理1次，即得無熱原的L—天門冬酰胺酶。溶于0.5mol／L磷酸緩沖液，在無菌條件下用6號(hào)垂熔漏斗過濾，分裝，冷凍干燥制得注射用L—天門冬酰胺酶成品，每支1萬或2萬單位。(5)精制、凍干163檢測(cè)方法取lml0.04mol／L的L—天門冬酰胺，0.5mol／LpH8.4的硼酸緩沖液，0.5ml細(xì)胞懸浮液或酶液，于37℃水浴中保溫15min后加0.5ml15％三氯醋酸，以終止反應(yīng)沉淀細(xì)胞或酶蛋白，離心取上清液1ml。加2ml奈斯勒試劑和7ml蒸餾水15min后，于500nm波長處比色測(cè)定產(chǎn)生的氨。

3檢測(cè)方法17作業(yè)：1酶類藥物的分類與用途有哪些？2酶類藥物的提取與精制有哪些注意事項(xiàng)？3酶類藥物有哪些精制方法？4如何生產(chǎn)L-門冬酰胺酶？作業(yè)：18項(xiàng)目3：發(fā)酵技術(shù)生產(chǎn)生物藥物

任務(wù)1：發(fā)酵法生產(chǎn)L－天冬酰胺酶

項(xiàng)目3：發(fā)酵技術(shù)生產(chǎn)生物藥物

任務(wù)1：發(fā)酵法生產(chǎn)L－天冬酰19教學(xué)安排：

1.員工培訓(xùn)由老師講解L－天冬酰胺酶生產(chǎn)的理論基礎(chǔ)。分配實(shí)操任務(wù)：L－天冬酰胺酶發(fā)酵生產(chǎn)。

教學(xué)安排：20

2.學(xué)生模擬組建運(yùn)營一個(gè)L－天冬酰胺酶生產(chǎn)企業(yè)，撰寫計(jì)劃書(在理論教學(xué)期間完成)。

市場(chǎng)部：L－天冬酰胺酶的結(jié)構(gòu)、功能、用途，L－天冬酰胺酶市場(chǎng)狀況與銷售預(yù)測(cè)，競(jìng)爭(zhēng)對(duì)手狀況與分析。技術(shù)部：確定L－天冬酰胺酶生產(chǎn)的工藝流程及工藝參數(shù)，編制生產(chǎn)操作規(guī)程，確定生產(chǎn)車間的布局。2.學(xué)生模擬組建運(yùn)營一個(gè)L－天冬酰胺酶生產(chǎn)21品控部：制定L－天冬酰胺酶的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，生產(chǎn)取樣分析操作規(guī)程，質(zhì)量檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)和操作規(guī)程?？偨?jīng)理：協(xié)調(diào)監(jiān)督各部工作，最后拿出完整的計(jì)劃書。品控部：制定L－天冬酰胺酶的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，生產(chǎn)22

一藥用酶的分類及應(yīng)用（一）促進(jìn)消化酶類水解和消化食物。（二）消炎酶類蛋白酶類有消炎作用。（三）與治療心腦血管疾病有關(guān)的酶類鏈激酶、尿激酶、纖溶酶、凝血酶和蚓激酶。第一節(jié)藥用酶概述一藥用酶的分類及應(yīng)用第一節(jié)藥用酶概述23

（四）抗腫瘤的酶類門冬酰氨酶、谷氨酰氨酶、蛋氨酸酶、酪氨酸氧化酶。（五）與生物氧化還原電子傳遞有關(guān)的酶細(xì)胞色素C、超氧化物歧化酶、過氧化酶。（六）其他藥用酶解毒：青霉素酶、有機(jī)磷解毒酶等。降低組織間黏度：透明質(zhì)酸。降血壓和血脂：彈性蛋白酶。治療血管收縮有關(guān)：激肽釋放酶。（四）抗腫瘤的酶類24第二節(jié)L-天冬酰酶生產(chǎn)工藝一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)由四個(gè)相同亞基組成，有222個(gè)對(duì)稱軸，每個(gè)亞基含326個(gè)氨基酸殘基。用于兒童急性淋巴細(xì)胞白血病、單細(xì)胞白血病、淋巴肉瘤、胰腺癌等。第二節(jié)L-天冬酰酶生產(chǎn)工藝一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)25

機(jī)理：降低人體內(nèi)天冬酰胺和谷氨酰胺濃度，正常細(xì)胞可自我合成，癌細(xì)胞不具備這種能力，從而受到抑制。

性狀：白色粉末，微吸濕，溶于水，不溶于有機(jī)溶劑。機(jī)理：26二、生產(chǎn)工藝1工藝路線二、生產(chǎn)工藝27項(xiàng)目3發(fā)酵技術(shù)生產(chǎn)生物藥物任務(wù)1發(fā)酵法生產(chǎn)白細(xì)胞介素課件282工藝過程及控制要點(diǎn)(1)菌種培養(yǎng)采取大腸桿菌AS1-375，普通牛肉培養(yǎng)基，接種后于37℃培養(yǎng)24h。

2工藝過程及控制要點(diǎn)29(2)種子培養(yǎng)

16％玉米漿，接種量1％～1.5％，37℃通氣攪拌培養(yǎng)4～8h。(2)種子培養(yǎng)30(3)發(fā)酵罐培養(yǎng)玉米漿培養(yǎng)基，接種量8％，37℃通氣攪拌培養(yǎng)6～8h，離心分離發(fā)酵液，得菌體，加2倍量丙酮攪拌，壓濾，濾餅過篩，自然風(fēng)干成菌體干粉。

(3)發(fā)酵罐培養(yǎng)31(4)提取、沉淀、熱處理

每千克菌體干粉加入0.Olmol／LpH8.0的硼酸緩沖液lOL37℃保溫?cái)嚢?.5h，降溫到30℃以后，用5mol／L醋酸調(diào)節(jié)pH4.2～4.4進(jìn)行壓濾，濾液中加入0.2倍體積的丙酮，放置3～4h，過濾，收集沉淀，自然風(fēng)干，即得干粗酶。

(4)提取、沉淀、熱處理32取粗制酶，加入0.3％甘氨酸溶液，調(diào)節(jié)pH8.8，攪拌1.5h，離心，收集上清液，加熱到60℃30min進(jìn)行熱處理。離心棄去沉淀，上清液加2倍體積的丙酮，析出沉淀，離心，收集酶沉淀，用0.01mol／L，pH8.0磷酸緩沖液溶解，再離心棄去不溶物，得上清酶溶液。

取粗制酶，加入0.3％甘氨酸溶液，調(diào)節(jié)pH8.8，33(5)精制、凍干上述酶溶液調(diào)節(jié)pH8.8，離心棄去沉淀，清液再調(diào)pH7.7加入50％聚乙二醇，使?jié)舛冗_(dá)到16％。在2～5℃放置4～5天，離心得沉淀。用蒸餾水溶解，加4倍量的丙酮，沉淀，同法反復(fù)1次，沉淀用pH6.4，0.05mol／L磷酸緩沖液溶解，50％聚乙二醇反復(fù)處理1次，即得無熱原的L—天門冬酰胺酶。溶于0.5mol／L磷酸緩沖液，在無菌條件下用6號(hào)垂熔漏斗過濾，分裝，冷凍干燥制得注射用L—天門冬酰胺酶成品，每支1萬或2萬單位。(5)精制、凍干343檢測(cè)方法取lml0.04mol／L的L—天門冬酰胺，0.5mol