農(nóng)藥毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)

昆蟲乙酰膽堿酯酶活性的測定一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模毫私庖阴Ｄ憠A酯酶的作用，掌握乙酰膽堿酯酶活性的測定方法。二、實(shí)驗(yàn)材料試劑:0.05mo1/L,pH7.2磷酸鹽緩沖液(PBS);ATCh液稱取ATCh75mgpH7.2PBS100m1即成。DTNB液:稱取DTNB13mg加pH7.2PBS1OOml測試前按不同比例用乙醇充分溶解。三、實(shí)驗(yàn)步驟1、樣品制備:采用本所飼養(yǎng)的淡色庫蚊CulexpipienspallensCoquillett敏感品系蚊蟲和室內(nèi)選育的抗殘殺威品系淡色庫蚊作酶源。將N3-4天未吸血雌性成蚊，放人1.5m1100[1pH7.2PBS15min，取上清液再加900plpH7.2PBS稀釋，待用。2、 實(shí)驗(yàn)方:將100協(xié)1蚊蟲混勻液滴%孔微滴定板孔中每孔再加混有1x10-4mol/L的殘殺威ATCh液1OOmhZ,，放30C孵育30分鐘后，每孔再加100ulDTNB液，待反應(yīng)5分鐘后，用酶標(biāo)北京新技術(shù)研究所提供MB-III型進(jìn)行比色。四、結(jié)果分析410mu4-10孔取其OD值。昆蟲中腸淀粉酶活性測定一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模毫私庵心c淀粉酶的作用，掌握中腸淀粉酶活性的測定方法。二、實(shí)驗(yàn)方法1、腸液的提?。弘姶碳しㄈ∧c液,10Ｋ離心5ｍｉｎ,上清液為酶液,用085%生理鹽水稀釋5倍備用。2：測定步驟：α(α+β)淀粉酶的活性測定每個重復(fù)區(qū)用5同時做等量對照試管,每個試管加酶液1ｍＬ,在70℃恒溫水浴中15ｍｉｎ,1ｍＬｐＨ5.6,4ｍＬ04ｍｏｌ/ＬＮａＯＨ,純化酶的活40℃(±05℃)15ｍｉｎ,402ｍＬ,搖勻,40℃水浴5ｍｉｎ,4ｍＬ04ｍｏｌ/ＬＮａＯＨ,終止酶反應(yīng)。三、結(jié)果分析410mu波長下讀取光密度。取其OD平均值。昆蟲中腸酯酶活性的測定一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模毫私庵心c酯酶的作用，掌握中腸酯酶活性的測定方法。二、實(shí)驗(yàn)材料供試物質(zhì)與供試?yán)ウ?谷甾,含量95%;瑞香亭含量95%;毒色原酮,含量95%。三、實(shí)驗(yàn)方法處理昆蟲時,用β-3種化合物(200μｇｍＬ)和印楝素(80μｇｍＬ)處理葉碟后連續(xù)飼喂菜粉蝶5齡幼蟲ｈ10條,,1ｍＬ磷酸鹽緩沖液(004μｍｏｌｍＬ,ｐＨ=7),在冰浴中勻漿,將勻漿液倒入離心管中離心(2100Ｇ,15ｍｉｎ)后取上清液用緩10倍作為酶液。用“Ｆｏｌｉｎ-母液中蛋白質(zhì)含量,即1ｍＬ酶液母液+5ｍＬＦｏｌｉｎ-液+05ｍＬＦｏｌｉｎ-乙液+1ｍＬ雙蒸水,然后在30℃下反30ｍｉｎ后,求出ＯＤ500值,1ｍＬ中蛋白質(zhì)的量(ｍｇ),最后換算成ｍｇ/ｍｉｎ水解α-醋酸萘酯的μｍｏｌ數(shù)作為酶活力指標(biāo)。在具塞試管內(nèi)加入5ｍＬ(3×10-4μｍｏｌｍＬα-)置于2525ｍｉｎ,1ｍＬ,2530ｍｉｎ,1ｍＬ顯色劑(1%25%2∶5混合)搖勻,中止反應(yīng)并顯色,30ｍｉｎ定ＯＤ600值。四、結(jié)果分析從標(biāo)準(zhǔn)曲線上求出α-萘酚的濃度。昆蟲谷胱甘肽過氧化物酶活力測定一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模夯锩富钚缘臏y定方法。二、實(shí)驗(yàn)材料黑腹果蠅(drosophilamelanogaster),野生型Or。將15天齡未交配果蠅隨機(jī)分成4組,每組1000只,雌雄各半,分別給予含亞硒酸鈉0、015、210和810Lg?g的培養(yǎng)基,雌雄分開喂養(yǎng)。三、實(shí)驗(yàn)方法1、前處理各實(shí)驗(yàn)組雌雄果蠅給予不同濃度亞硒酸鈉喂養(yǎng)16天后分別麻醉,加入冷生理鹽水,在冰浴中制成7%勻漿(每組雌雄果蠅勻漿一式5份),3500r?min低