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5’RACE試劑盒原理及注意事項SMARTer?RACE5’/3’KitFromTaKaRaCode:624858第1頁原理SMARTScribeReverseTranscriptaseSMARTerIIAOligonucleotide（-70℃）第2頁5’RACEFirst-StrandcDNASynthesis

試劑清單10μlSMARTerIIAOligonucleotide(24μM)(-70℃)10μl5'RACECDSPrimerA(12μM)40μl5XFirst-StrandBuffer(RNAse-Free)5μlDithiothreitol(DTT)(100mM)1mlDeionizedH2O10μlRNaseInhibitor(40U/μl)20μlSMARTScribeReverseTranscriptase(100U/μl)10μldNTPmix(20mM)第3頁5’RACEPCR

試劑清單400μl10XUniversalPrimerAMix(UPM)（混合引物）50μlUniversalPrimerShort(10μM)(已合成)1.25mlSeqAmpPCRBuffer(2X)（混合試劑）50μlSeqAmpDNAPolymerase(已用完)第4頁GSP引物設(shè)計23-28bp,50%-70%GCTm≥65°C,bestresultsTm>70°CProductrange:1-3kbAddGATTACGCCAAGCTTto5’ends（linearizedpRACEvector）NestedprimerLongprimer=5’CTAATACGACTCACTATAGGGCAAGCAGTGGTATCAACGCAGAGT–3'Shortprimer=5’–CTAATACGACTCACTATAGGGC–3’第5頁RACE-ReadycDNA獲得在所有過程中都使用Tricine-EDTABuffer稀釋cDNA樣本Protocol有變化20ul第6頁5’RapidAmplificationofcDNAEnds(5’RACE)Protocol改動含dNTP已用完混合引物第7頁5’RapidAmplificationofcDNAEnds(5’RACE)Program變化第8頁具體參照試劑盒配套闡明書第9頁實驗室常用DNApolymeraseEasyTaqAP111TaKaRaTaqR001B第10頁ProtocolEasyTaqAP111TaKaRaTaqR001B第11頁ProgramEasyTaqAP111TaKaRaTaqR001B第12頁Additional兩者均在擴增產(chǎn)物3’端帶A堿基EasyTaq

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