膠體金生產(chǎn)工藝配方原則課件

膠體金生產(chǎn)工藝配方原則1膠體金生產(chǎn)工藝配方原則1內(nèi)容一、和膜相關(guān)的配方和原理二、和金子墊相關(guān)的配方和原理三、和樣品墊相關(guān)的配方和原理四、相關(guān)問題2內(nèi)容一、和膜相關(guān)的配方和原理2一、和膜相關(guān)的配方和原理電鏡下的NC膜3一、和膜相關(guān)的配方和原理電鏡下的NC膜3硝酸纖維膜生產(chǎn)工藝圖4硝酸纖維膜生產(chǎn)工藝圖4孔徑定義的問題5孔徑定義的問題5孔徑對側(cè)向?qū)游鏊俣鹊挠绊?孔徑對側(cè)向?qū)游鏊俣鹊挠绊?不同種類膜的IgG結(jié)合能力7不同種類膜的IgG結(jié)合能力7不同種類膜的BSA結(jié)合能力8不同種類膜的BSA結(jié)合能力8為什么蛋白會結(jié)合到膜上?結(jié)合力是什么?靜電疏水力這兩種結(jié)合力的效應(yīng)是什么?使蛋白從溶液中分離出來長久結(jié)合作用9為什么蛋白會結(jié)合到膜上?結(jié)合力是什么?9靜電作用力靜電作用力是正負(fù)電荷相互吸引產(chǎn)生的作用力疏水作用力疏水作用力又稱為疏水鍵。它是由側(cè)鏈的疏水基團(tuán)相互接近.而形成的一種作用力。對維持分子的三、四級結(jié)構(gòu)起著重要的作用。每一個蛋白質(zhì)都具有疏水基團(tuán)和親水基團(tuán)。10靜電作用力10蛋白質(zhì)疏水性狀和親水性狀當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)溶解在溶劑中時，蛋白質(zhì)處于非常穩(wěn)定的狀態(tài)，此時蛋白質(zhì)的親水基團(tuán)展開在外，疏水基團(tuán)收縮在內(nèi)，親水基團(tuán)和水分子接觸，保證了溶解性的狀態(tài)；當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)沉淀出來時，疏水基團(tuán)展開，親水基團(tuán)收縮，此時為疏水狀態(tài)，也呈現(xiàn)不穩(wěn)定的固體狀態(tài)，疏水基團(tuán)和其他固體物的疏水基團(tuán)通過疏水作用力結(jié)合，達(dá)到固定的目的。11蛋白質(zhì)疏水性狀和親水性狀11蛋白結(jié)合到固相材料上蛋白結(jié)合到固相材料上是一個多步驟過程取決于蛋白溶液擴(kuò)散到固相表面蛋白從溶液中分離出來蛋白吸附到固相上蛋白重排到最低能態(tài)12蛋白結(jié)合到固相材料上蛋白結(jié)合到固相材料上是一個多步驟過程12吸附過程溶液中的蛋白蛋白轉(zhuǎn)移到表面區(qū)域吸附蛋白在表面重排13吸附過程溶液中的蛋白蛋白轉(zhuǎn)移到表面區(qū)域吸附蛋白在表面重排13多位點結(jié)合只有1個位點的結(jié)合是可逆的多位點結(jié)合使得蛋白穩(wěn)定在固相表面，即使其中的每個單位點都是可逆的14多位點結(jié)合只有1個位點的結(jié)合是可逆的多位點結(jié)合使得蛋白穩(wěn)定在影響蛋白結(jié)合的因素蛋白緩沖液使用的膜蛋白自身應(yīng)用體系15影響蛋白結(jié)合的因素15蛋白緩沖液沒有通用的緩沖液，不同的系統(tǒng)必須分別優(yōu)化。作用：提供適合的PH,改善親水性,增溶性,提高穩(wěn)定性定律:

“蛋白在緩沖液中越不穩(wěn)定，蛋白結(jié)合力越強(qiáng)”16蛋白緩沖液沒有通用的緩沖液，不同的系統(tǒng)必須分別優(yōu)化。16緩沖液的優(yōu)化離子強(qiáng)度對于蛋白從溶液中脫離出來很重要，少量的離子強(qiáng)度，蛋白難以從溶液中脫離沉淀出來，過量的的離子強(qiáng)度，溶液配制中就已會出現(xiàn)沉淀。pH蛋白在等電點最不穩(wěn)定沉淀劑通常用醇降低蛋白的穩(wěn)定性，也可潤濕膜，減少膜帶有的靜電，利于結(jié)合包被。鹽通常不會影響對某些蛋白，兩性離子的鹽類有助于蛋白結(jié)合減少信號強(qiáng)度，消假陽17緩沖液的優(yōu)化離子強(qiáng)度17糖：對包被蛋白的穩(wěn)定性有重要作用，減緩老化速度，也可以增加親水力。惰性蛋白：對消除假陽有重要作用表面活性劑：增加親水力，也可增色。1818緩沖液的基本成分各種緩沖系:Tris-HCl,PB,CB等鹽類：NaCl糖：蔗糖，海藻糖等表面活性劑：Tween20，Tritonx-100等惰性蛋白：Casein等防腐劑：疊氮鈉，卡松等19緩沖液的基本成分各種緩沖系:Tris-HCl,PB,推薦的起始緩沖液10mMPhosphatepH7.03%Ethanol20推薦的起始緩沖液10mMPhosphate20能夠生產(chǎn)出大顆粒膠體金一、和膜相關(guān)的配方和原理定律:抗甲狀腺球蛋白、抗胰島素等嗜靶抗原的自身抗體，有時能與靶抗原結(jié)合形成復(fù)合物，在ELISA方法中均可干擾抗原抗體測定結(jié)果?？乖贵w反應(yīng)一般在pH為6～9進(jìn)行。您的釋放墊是怎樣封閉的?解決方法：在樣品墊或金子墊或硝酸纖維素膜上加入相應(yīng)的抗體，將這類物質(zhì)在T線前消除掉。各種緩沖系:Tris-HCl,PB,CB等每一個蛋白質(zhì)都具有疏水基團(tuán)和親水基團(tuán)。3）大分子物質(zhì)：PEG4000，PEG20000，PVP，PVA您的釋放墊是怎樣封閉的?裸金聚集，周圍具有大量的負(fù)電荷，當(dāng)樣本爬過金墊，裸金隨著向上跑，在T線位置只要碰到帶有正電荷的蛋白，即發(fā)生反應(yīng)，形成假陽線條。減少或者改變封閉方法

e.抗原抗體反應(yīng)必須在合適的pH環(huán)境中進(jìn)行，pH過高或過低都將影響抗原與抗體的理化性質(zhì)。為了消除嗜異性抗體的影響，可通過在樣品墊中加入正常的動物血清或純化的鼠IGg，又或者在膜上噴有鼠IGgA線，金子中加有正常的動物血清或純化的鼠IGg等等方式將嗜異性抗體排斥在T線前，消除這方面的假陽。對于蛋白從溶液中脫離出來很重要，少量的離子強(qiáng)度，蛋白難以從溶液中脫離沉淀出來，過量的的離子強(qiáng)度，溶液配制中就已會出現(xiàn)沉淀。反應(yīng)環(huán)境為酸性時，已發(fā)生此類結(jié)合。只有1個位點的結(jié)合是可逆的比較容易控制顆粒大小，CV也比較小側(cè)向?qū)游鲋薪Y(jié)合物釋放墊的原理而形成的一種作用力。每一個蛋白質(zhì)都具有疏水基團(tuán)和親水基團(tuán)。防腐劑：疊氮鈉，卡松等一、和膜相關(guān)的配方和原理蛋白質(zhì)具有兩性電離性質(zhì)，因此每種蛋白質(zhì)都有固定的等電點。但電解質(zhì)的濃度不宜過高，否則會出現(xiàn)鹽析現(xiàn)象。5）小分子保護(hù)物質(zhì)：糖類物質(zhì)，如蔗糖，海藻糖等。HAuCL4+e-Au05）小分子保護(hù)物質(zhì)：糖類物質(zhì)，如蔗糖，海藻糖等。三、和樣品墊相關(guān)的配方和原理“潛水艇”效應(yīng)表面活性劑處理過的膜在使用時的常見問題因為使用的表面活性劑是水溶性的噴膜時這些表面活性劑被“沖走”了21能夠生產(chǎn)出大顆粒膠體金“潛水艇”效應(yīng)表面活性劑處理過的膜在反應(yīng)動力學(xué)流速增加,反應(yīng)速率減低流速增加,檢測時間縮短流速增加,靈敏度降低流速增加,試劑用量增加流速增加,背景降低距離增加,流速降低孔徑增加,蛋白結(jié)合量減少22反應(yīng)動力學(xué)流速增加,反應(yīng)速率減低22二、和金子墊相關(guān)的配方和原理

和金子墊相關(guān)的工藝和配方有：1）標(biāo)記工藝；2）金標(biāo)稀釋液3）金墊處理液23二、和金子墊相關(guān)的配方和原理

和金子墊相關(guān)的工藝和配方有：2標(biāo)記工藝膠體金：一般指金的水溶液，又稱金溶膠。---金以微小的粒子分散在水中所形成的金溶膠。其中分散的金顆粒直徑一般在1~100nm之間，為負(fù)電荷分布。24標(biāo)記工藝膠體金：一般指金的水溶液，又稱金溶膠。24高質(zhì)量結(jié)合物單個分散的顆粒圓形顆粒很少聚集這樣得到的膠體穩(wěn)定性和重復(fù)性好Clusterfree,highqualitygoldreagentClustered,poorqualitygoldreagent25高質(zhì)量結(jié)合物單個分散的顆粒Clusterfree,hi膠體金的生產(chǎn)膠體金的形成是還原HAuCl4.HAuCL4+e-Au0還原劑越強(qiáng)，得到的金顆粒越小生產(chǎn)40nm診斷用金顆粒一般用檸檬酸三鈉26膠體金的生產(chǎn)膠體金的形成是還原HAuCl4.26膠體金顆粒的形成27膠體金顆粒的形成27膠體金的生產(chǎn)2種重要步驟直接形成分步形成大多數(shù)人用分步形成比較容易控制顆粒大小，CV也比較小能夠生產(chǎn)出大顆粒膠體金28膠體金的生產(chǎn)2種重要步驟28顆粒大小對膠體的影響29顆粒大小對膠體的影響29蛋白標(biāo)記原理蛋白質(zhì)在等電點或稍偏堿的情況下，依靠靜電引力或疏水力或共價鍵，被牢固地吸附于膠體金顆粒表。由于蛋白質(zhì)分子牢固地結(jié)合在金顆粒表面，形成一個蛋白層，從而阻止了膠體金顆粒的相互接觸，使該膠聯(lián)溶液較為穩(wěn)定。30蛋白標(biāo)記原理蛋白質(zhì)在等電點或稍偏堿的情況下，依靠靜電引力或疏要點蛋白的預(yù)處理使用低濃度和正確的pH值，確保最小的聚集合適的蛋白量（可通過鹽滴定進(jìn)行評價）攪拌速度、容器的潔凈程度、離心的速度31要點蛋白的預(yù)處理31鹽滴定鹽滴定不能衡量蛋白單層的形成鹽滴定只能代表鹽溶液中多少量的蛋白可以使膠體金穩(wěn)定pH和時間都會有影響32鹽滴定鹽滴定不能衡量蛋白單層的形成32蛋白邦定作用力電荷作用力（靜電作用力）疏水力共價鍵33蛋白邦定作用力333434金標(biāo)稀釋液合適的離子種類和強(qiáng)度，0.2M左右，常用有磷酸鹽等。大分子物質(zhì)作為膠體金干燥后均勻散布的骨架，常用大分子物質(zhì)如PEG4000，PEG20000，PVP。小分子物質(zhì)對蛋白活性保護(hù)，

蛋白儲存常用的甘油、蔗糖、海藻糖、各類低聚糖等，對產(chǎn)品的儲存穩(wěn)定性有幫助。

35金標(biāo)稀釋液合適的離子種類和強(qiáng)度，0.2M左右，常用有磷酸鹽等惰性蛋白，它是保護(hù)目的蛋白的活性，也維持膠體金的膠體穩(wěn)定，它們是消除非特異性的封閉物質(zhì)，也起著有分散膠體金顆粒的骨架作用。常用有BSA、OVA、Casein。表面活性劑，具有增加親水性，促進(jìn)結(jié)合等作用。常用的有Tween-20，Tritonx-100。

36惰性蛋白，它是保護(hù)目的蛋白的活性，也維持膠體金的膠體穩(wěn)定，它評價金標(biāo)稀釋液的參數(shù)金子釋放程度及速度。金標(biāo)液穩(wěn)定性。靈敏度、特異性37評價金標(biāo)稀釋液的參數(shù)金子釋放程度及速度。37結(jié)合物釋放墊的原理什么是結(jié)合物釋放墊?孔徑開放快速層析低蛋白結(jié)合力理想的親水性傳統(tǒng)材料是包被PVA的玻纖38結(jié)合物釋放墊的原理什么是結(jié)合物釋放墊?38典型結(jié)合物釋放墊材料的構(gòu)意圖玻纖高分子PVA外殼39典型結(jié)合物釋放墊材料的構(gòu)意圖玻纖高分子PVA外殼39側(cè)向?qū)游鲋薪Y(jié)合物釋放墊的原理做什么用(理論上)？讓結(jié)合物完好無損的干燥加樣后讓結(jié)合物快速釋放實際應(yīng)用中側(cè)向?qū)游鲋薪Y(jié)合物釋放墊可能遇到的問題比其它任何組分都多40側(cè)向?qū)游鲋薪Y(jié)合物釋放墊的原理做什么用(理論上)？40標(biāo)準(zhǔn)結(jié)合物釋放墊的性能45秒內(nèi)釋放出約70%的結(jié)合物但是墊上保留的結(jié)合物降低了靈敏度，因為:較少的結(jié)合物到達(dá)捕獲線較少的抗原到達(dá)捕獲線在側(cè)向?qū)游鱿到y(tǒng)中靈敏度要好線條CV值一般在15-20%41標(biāo)準(zhǔn)結(jié)合物釋放墊的性能45秒內(nèi)釋放出約70%的結(jié)合物41儲存于20oC時結(jié)合物釋放率42儲存于20oC時結(jié)合物釋放率42金墊處理液作用：增加親水性,促進(jìn)復(fù)溶,保持穩(wěn)定性基本成分：1）緩沖系統(tǒng)：磷酸，碳酸，硼酸，Tris,生物緩沖液等。2）表面活性劑：Tween-20，Tritonx-100等。3）大分子物質(zhì)：PEG4000，PEG20000，PVP，PVA4）惰性蛋白：BSA、OVA、Casein。5）小分子保護(hù)物質(zhì)：糖類物質(zhì)，如蔗糖，海藻糖等。

43金墊處理液作用：增加親水性,促進(jìn)復(fù)溶,保持穩(wěn)定性43結(jié)合物釋放常見問題釋放不充分釋放慢釋放墊再次濕潤困難44結(jié)合物釋放常見問題釋放不充分44釋放不充分結(jié)合物綁定到釋放墊上了用聚合物和表面活性劑封閉釋放墊在儲存過程中，結(jié)合物發(fā)生聚集控制封閉劑的用量控制溶液的離子強(qiáng)度45釋放不充分結(jié)合物綁定到釋放墊上了45釋放慢您的釋放墊是怎樣封閉的?是否加了親水試劑？是否用了大量的蛋白?是否用了大量的糖?試紙條各組分之間接觸緊密么?46釋放慢您的釋放墊是怎樣封閉的?46釋放墊再次濕潤困難您使用的是哪一種釋放墊?是親水的么?您是怎樣封閉釋放墊的?47釋放墊再次濕潤困難您使用的是哪一種釋放墊?47三、和樣品墊相關(guān)的配方和原理作用：改變樣本PH,調(diào)節(jié)爬速,控制金標(biāo)釋放，抑制非特異性吸附,降低背景基本成分：1）緩沖系統(tǒng)：磷酸，碳酸，硼酸，Tris,生物緩沖液等。2）表面活性劑：Tween-20，Tritonx-100等。3）大分子聚合物質(zhì)：PEG4000，PEG20000，PVP，PVA4）惰性蛋白：BSA、OVA、Casein。5）生物物質(zhì)：鼠IGg，抗紅細(xì)胞抗體等。48三、和樣品墊相關(guān)的配方和原理作用：改變樣本PH,調(diào)節(jié)爬速,血清類樣品墊注意爬速，背景，靈敏度的達(dá)到和假陽的消除。全血類樣品墊1）必須能夠去除紅細(xì)胞！2）還需具備下列功能不能造成溶血不能干擾樣品分離必須快速高效必須能夠分離一定范圍內(nèi)的不同血樣量靈敏度的達(dá)到和假陽的消除49血清類樣品墊49尿液類樣品墊注意交叉反應(yīng)的消除。50尿液類樣品墊50影響抗原抗體反應(yīng)的外部因素電解質(zhì)抗原與抗體發(fā)生結(jié)合后，由親水膠體變?yōu)槭杷z體的過程中須有電解質(zhì)參與才能進(jìn)一步使抗原抗體復(fù)合物表面失去電荷，水化層破壞，復(fù)合物相互靠攏聚集，形成大塊的凝集或沉淀。若無電解質(zhì)參加，則不出現(xiàn)可見反應(yīng)。為了促使沉淀物或凝集物的形成，常用O.85％氯化鈉或各種緩沖液作抗原及抗體的稀釋液及反應(yīng)液。但電解質(zhì)的濃度不宜過高，否則會出現(xiàn)鹽析現(xiàn)象。51影響抗原抗體反應(yīng)的外部因素電解質(zhì)51酸堿度蛋白質(zhì)具有兩性電離性質(zhì)，因此每種蛋白質(zhì)都有固定的等電點?？乖贵w反應(yīng)必須在合適的pH環(huán)境中進(jìn)行，pH過高或過低都將影響抗原與抗體的理化性質(zhì)?？乖贵w反應(yīng)一般在pH為6～9進(jìn)行。52酸堿度52溫度抗原抗體反應(yīng)必須在合適的溫度中進(jìn)行，一般以15～40℃為宜，最適反應(yīng)溫度為37℃。某些特殊的抗原抗體反應(yīng)，對溫度有一些特殊的要求，例如冷凝集素在4℃左右與紅細(xì)胞結(jié)合最好，20℃以上反而解離。53溫度53反應(yīng)時間反應(yīng)時間越長，抗原抗體反應(yīng)越充分，顯色也越深。所有調(diào)整輔料的思路都可從抗原抗體反應(yīng)的影響因素和輔料的成分性質(zhì)進(jìn)行考慮和設(shè)計。54反應(yīng)時間54四、相關(guān)問題假陽問題假陰問題穩(wěn)定性問題上樣問題55四、相關(guān)問題假陽問題55（一）假陽問題未標(biāo)記上的金顆粒（裸金）電荷作用疏水作用硫醇類物質(zhì)的存在（S-H鍵起作用）抗原抗體作用（內(nèi)源性物質(zhì)）抗凝劑和防腐劑的影響其他原因56（一）假陽問題未標(biāo)記上的金顆粒（裸金）56未標(biāo)記上的金顆粒（裸金）裸金聚集，周圍具有大量的負(fù)電荷，當(dāng)樣本爬過金墊，裸金隨著向上跑，在T線位置只要碰到帶有正電荷的蛋白，即發(fā)生反應(yīng)，形成假陽線條。解決方法：檢查標(biāo)記過程，BSA封閉57未標(biāo)記上的金顆粒（裸金）裸金聚集，周圍具有大量的負(fù)電荷，當(dāng)樣電荷作用

膠體金顆粒帶有負(fù)電荷，當(dāng)遇上帶有正電荷的蛋白，易發(fā)生非特異性結(jié)合反應(yīng)，導(dǎo)致假陽。反應(yīng)環(huán)境為酸性時，已發(fā)生此類結(jié)合。解決方法：改變pH和鹽度58電荷作用

膠體金顆粒帶有負(fù)電荷，當(dāng)遇上帶有正電荷的蛋白，易發(fā)疏水作用抗原抗體結(jié)合以及和膠體金結(jié)合都需要用到疏水作用力，當(dāng)反應(yīng)環(huán)境中存在疏水物質(zhì)時，易和膠體金或抗原抗體通過疏水作用力結(jié)合，產(chǎn)生假陽結(jié)果，如標(biāo)本里的一些脂肪，細(xì)胞碎片，細(xì)菌等等。解決方法：用表面活性劑或親水聚合物進(jìn)行處理。59疏水作用抗原抗體結(jié)合以及和膠體金結(jié)合都需要用到疏水作用力，當(dāng)抗原抗體作用此類作用是指標(biāo)本里面含有能和標(biāo)記材料/包被材料發(fā)生免疫反應(yīng)的非目標(biāo)物的其他物質(zhì)導(dǎo)致的假陽結(jié)果。常見的有毒品的交叉反應(yīng)，如KET試劑檢測美沙酮標(biāo)本，呈現(xiàn)陽性反應(yīng)，就是美沙酮和KET材料發(fā)生了交叉反應(yīng)；又有SG試劑中的抗鼠抗體反應(yīng)等等。解決方法：在樣品墊或金子墊或硝酸纖維素膜上加入相應(yīng)的抗體，將這類物質(zhì)在T線前消除掉。60抗原抗體作用此類作用是指標(biāo)本里面含有能和標(biāo)記材料/包被材料發(fā)在血清檢測中的具體非特異性反應(yīng)物質(zhì)大約40%的人血清標(biāo)本中含有非特異干擾物質(zhì)，可以不同程度影響檢測結(jié)果。常見的干擾物質(zhì)有：類風(fēng)濕因子、補體、嗜異性抗體、嗜靶抗原自身抗體、醫(yī)源性誘導(dǎo)的抗鼠Ig(s)抗體、交叉反應(yīng)物質(zhì)和其他物質(zhì)等。61在血清檢測中的具體非特異性反應(yīng)物質(zhì)大約40%的人血清標(biāo)本中含類風(fēng)濕因子

人血清中IgM、IgG型類風(fēng)濕因子(RF)可以與ELISA系統(tǒng)中的捕獲抗體及酶標(biāo)記二抗的FC段直接結(jié)合，從而導(dǎo)致假陽性。解決該情況的辦法是：(1)用F(ab)2替代完整的IgG；(2)標(biāo)本用預(yù)先熱變性(63℃，10min)IgG的固相吸附劑處理(將熱變性IgG加入到標(biāo)本稀釋液中同樣有效)；(3)檢測抗原時，可以用2-巰基乙醇等加入到標(biāo)本稀釋液中，使RF降解。62類風(fēng)濕因子

62補體

如果在包被和標(biāo)記過程中，使用的抗體的FC段的補體Clq分子結(jié)合位點被暴露出來，從而易使Clq可以將補體和抗體二者連接起來，造成假陽性現(xiàn)象。解決的方法是：(1)用EDTA稀釋標(biāo)本；(2)用53℃、10min加熱血清使Clq滅活。63補體

63嗜異性抗體人類血清中含有能與嚙齒類動物(如鼠等)Ig(s)結(jié)合的天然嗜異性抗體，易和包被和標(biāo)記的抗體產(chǎn)生反應(yīng)，能造成假陽性。解決的辦法是：可在標(biāo)本稀釋液中加入過量的動物Ig(s)，但加入量不足或亞類不同時無效。64嗜異性抗體64醫(yī)源性誘導(dǎo)的抗鼠Ig(s)抗體（嗜異性抗體的一種）臨床開展的用鼠源性CD3等克隆抗體治療，用放射性同位素標(biāo)記鼠源性抗體的影像診斷及靶向治療等新技術(shù)，均有可能使些病人體內(nèi)產(chǎn)生抗鼠抗體；另外，被鼠等嚙齒類動物咬傷的病人體內(nèi)也可以產(chǎn)生抗鼠Ig(s)抗體。解決的方法是：測定抗原時，在標(biāo)本中加入足量的正常鼠Ig(s)，從而克服由于上述原因造成的假陽性。65醫(yī)源性誘導(dǎo)的抗鼠Ig(s)抗體（嗜異性抗體的一種）65例子：Sg采用了雙抗體夾心的方法進(jìn)行檢測，包被材料和標(biāo)記材料都是單克隆抗體，屬于鼠IGg類別，由于人體經(jīng)常和動物打交道，體內(nèi)易產(chǎn)生嗜異性抗體，如抗鼠抗體，抗?？贵w等等，這類嗜異性抗體極易導(dǎo)致假陽反應(yīng)的產(chǎn)生。66例子：Sg采用了雙抗體夾心的方法進(jìn)行檢測，包被材料和標(biāo)記材料為了消除嗜異性抗體的影響，可通過在樣品墊中加入正常的動物血清或純化的鼠IGg，又或者在膜上噴有鼠IGgA線，金子中加有正常的動物血清或純化的鼠IGg等等方式將嗜異性抗體排斥在T線前，消除這方面的假陽。67為了消除嗜異性抗體的影響，可通過在樣品墊中加入正常的動物血清嗜靶抗原的自身抗體抗甲狀腺球蛋白、抗胰島素等嗜靶抗原的自身抗體，有時能與靶抗原結(jié)合形成復(fù)合物，在ELISA方法中均可干擾抗原抗體測定結(jié)果。解決的辦法是：測定前需用理化方法將其解離后再測定。68嗜靶抗原的自身抗體68交叉反應(yīng)物質(zhì)類地高辛、類AFP樣物質(zhì)等，是與靶抗原有交叉反應(yīng)的物質(zhì)。在用多抗測定抗原時對測定結(jié)果影響不大，但在用單克隆抗體測定抗原時，如果交叉抗原測定簇正好是所用單克隆抗體相對的靶決定簇時，也會出現(xiàn)假陽性結(jié)果。69交叉反應(yīng)物質(zhì)69抗凝劑和防腐劑的影響抗凝劑(如肝素、EDTA、枸櫞酸鈉)，防腐劑(如NaN3)因為對離子和蛋白活性的影響，有時會導(dǎo)致假陽的產(chǎn)生。70抗凝劑和防腐劑的影響抗凝劑(如肝素、EDTA、枸櫞酸鈉)，防其他因素血清脂質(zhì)過高、膽紅素、血紅蛋白及血液粘度過高等，均對膠體金測定結(jié)果有干擾作用。解決方法：表面活性劑及聚合物的使用，降低粘度，保證正常爬速。71其他因素血清脂質(zhì)過高、膽紅素、血紅蛋白及血液粘度過高等，均對（二）假陰問題72（二）假陰問題72以上原因主要強(qiáng)調(diào)了膜和金子的影響，在膠體金反應(yīng)體系中，靜電作用力，疏水作用力，共價鍵起了關(guān)鍵的作用，假陰的產(chǎn)生，在體系里的每一個配方優(yōu)化中，需要充分考慮這幾個作用力，同時以和假陽相反的思路進(jìn)行實驗設(shè)計。73以上原因主要強(qiáng)調(diào)了膜和金子的影響，在膠體金反應(yīng)體系中，靜電作提高靈敏度的一些方向

a.提高生物材料的俘獲能力

b.標(biāo)大的膠體金顆粒

c.減少或者改變封閉方法

e.降低層析速度

①選用小孔徑的膜②減少封閉試劑

d.減慢金子的釋放速度

f.選用親和力比較強(qiáng)的抗體或者抗原

g.加入提高反應(yīng)能力的試劑：PEG等

I.減少或改變表面活性劑74提高靈敏度的一些方向a.提高生物材料的俘獲能力

b.標(biāo)大穩(wěn)定性問題產(chǎn)品的穩(wěn)定性和配方、生產(chǎn)過程的溫濕度控制，物料穩(wěn)定性都有關(guān)系。產(chǎn)品穩(wěn)定性試驗和有效期的轉(zhuǎn)化

3年2年1年70℃3~4個星期2個星期1個星期60℃2個月1個月2個星期50℃6個月2~4個月1個月40℃1年5~7個月2~3個月75穩(wěn)定性問題產(chǎn)品的穩(wěn)定性和配方、生產(chǎn)過程的溫濕度控制，物料穩(wěn)定膠體金生產(chǎn)工藝配方原則76膠體金生產(chǎn)工藝配方原則1內(nèi)容一、和膜相關(guān)的配方和原理二、和金子墊相關(guān)的配方和原理三、和樣品墊相關(guān)的配方和原理四、相關(guān)問題77內(nèi)容一、和膜相關(guān)的配方和原理2一、和膜相關(guān)的配方和原理電鏡下的NC膜78一、和膜相關(guān)的配方和原理電鏡下的NC膜3硝酸纖維膜生產(chǎn)工藝圖79硝酸纖維膜生產(chǎn)工藝圖4孔徑定義的問題80孔徑定義的問題5孔徑對側(cè)向?qū)游鏊俣鹊挠绊?1孔徑對側(cè)向?qū)游鏊俣鹊挠绊?不同種類膜的IgG結(jié)合能力82不同種類膜的IgG結(jié)合能力7不同種類膜的BSA結(jié)合能力83不同種類膜的BSA結(jié)合能力8為什么蛋白會結(jié)合到膜上?結(jié)合力是什么?靜電疏水力這兩種結(jié)合力的效應(yīng)是什么?使蛋白從溶液中分離出來長久結(jié)合作用84為什么蛋白會結(jié)合到膜上?結(jié)合力是什么?9靜電作用力靜電作用力是正負(fù)電荷相互吸引產(chǎn)生的作用力疏水作用力疏水作用力又稱為疏水鍵。它是由側(cè)鏈的疏水基團(tuán)相互接近.而形成的一種作用力。對維持分子的三、四級結(jié)構(gòu)起著重要的作用。每一個蛋白質(zhì)都具有疏水基團(tuán)和親水基團(tuán)。85靜電作用力10蛋白質(zhì)疏水性狀和親水性狀當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)溶解在溶劑中時，蛋白質(zhì)處于非常穩(wěn)定的狀態(tài)，此時蛋白質(zhì)的親水基團(tuán)展開在外，疏水基團(tuán)收縮在內(nèi)，親水基團(tuán)和水分子接觸，保證了溶解性的狀態(tài)；當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)沉淀出來時，疏水基團(tuán)展開，親水基團(tuán)收縮，此時為疏水狀態(tài)，也呈現(xiàn)不穩(wěn)定的固體狀態(tài)，疏水基團(tuán)和其他固體物的疏水基團(tuán)通過疏水作用力結(jié)合，達(dá)到固定的目的。86蛋白質(zhì)疏水性狀和親水性狀11蛋白結(jié)合到固相材料上蛋白結(jié)合到固相材料上是一個多步驟過程取決于蛋白溶液擴(kuò)散到固相表面蛋白從溶液中分離出來蛋白吸附到固相上蛋白重排到最低能態(tài)87蛋白結(jié)合到固相材料上蛋白結(jié)合到固相材料上是一個多步驟過程12吸附過程溶液中的蛋白蛋白轉(zhuǎn)移到表面區(qū)域吸附蛋白在表面重排88吸附過程溶液中的蛋白蛋白轉(zhuǎn)移到表面區(qū)域吸附蛋白在表面重排13多位點結(jié)合只有1個位點的結(jié)合是可逆的多位點結(jié)合使得蛋白穩(wěn)定在固相表面，即使其中的每個單位點都是可逆的89多位點結(jié)合只有1個位點的結(jié)合是可逆的多位點結(jié)合使得蛋白穩(wěn)定在影響蛋白結(jié)合的因素蛋白緩沖液使用的膜蛋白自身應(yīng)用體系90影響蛋白結(jié)合的因素15蛋白緩沖液沒有通用的緩沖液，不同的系統(tǒng)必須分別優(yōu)化。作用：提供適合的PH,改善親水性,增溶性,提高穩(wěn)定性定律:

“蛋白在緩沖液中越不穩(wěn)定，蛋白結(jié)合力越強(qiáng)”91蛋白緩沖液沒有通用的緩沖液，不同的系統(tǒng)必須分別優(yōu)化。16緩沖液的優(yōu)化離子強(qiáng)度對于蛋白從溶液中脫離出來很重要，少量的離子強(qiáng)度，蛋白難以從溶液中脫離沉淀出來，過量的的離子強(qiáng)度，溶液配制中就已會出現(xiàn)沉淀。pH蛋白在等電點最不穩(wěn)定沉淀劑通常用醇降低蛋白的穩(wěn)定性，也可潤濕膜，減少膜帶有的靜電，利于結(jié)合包被。鹽通常不會影響對某些蛋白，兩性離子的鹽類有助于蛋白結(jié)合減少信號強(qiáng)度，消假陽92緩沖液的優(yōu)化離子強(qiáng)度17糖：對包被蛋白的穩(wěn)定性有重要作用，減緩老化速度，也可以增加親水力。惰性蛋白：對消除假陽有重要作用表面活性劑：增加親水力，也可增色。9318緩沖液的基本成分各種緩沖系:Tris-HCl,PB,CB等鹽類：NaCl糖：蔗糖，海藻糖等表面活性劑：Tween20，Tritonx-100等惰性蛋白：Casein等防腐劑：疊氮鈉，卡松等94緩沖液的基本成分各種緩沖系:Tris-HCl,PB,推薦的起始緩沖液10mMPhosphatepH7.03%Ethanol95推薦的起始緩沖液10mMPhosphate20能夠生產(chǎn)出大顆粒膠體金一、和膜相關(guān)的配方和原理定律:抗甲狀腺球蛋白、抗胰島素等嗜靶抗原的自身抗體，有時能與靶抗原結(jié)合形成復(fù)合物，在ELISA方法中均可干擾抗原抗體測定結(jié)果。抗原抗體反應(yīng)一般在pH為6～9進(jìn)行。您的釋放墊是怎樣封閉的?解決方法：在樣品墊或金子墊或硝酸纖維素膜上加入相應(yīng)的抗體，將這類物質(zhì)在T線前消除掉。各種緩沖系:Tris-HCl,PB,CB等每一個蛋白質(zhì)都具有疏水基團(tuán)和親水基團(tuán)。3）大分子物質(zhì)：PEG4000，PEG20000，PVP，PVA您的釋放墊是怎樣封閉的?裸金聚集，周圍具有大量的負(fù)電荷，當(dāng)樣本爬過金墊，裸金隨著向上跑，在T線位置只要碰到帶有正電荷的蛋白，即發(fā)生反應(yīng)，形成假陽線條。減少或者改變封閉方法

e.抗原抗體反應(yīng)必須在合適的pH環(huán)境中進(jìn)行，pH過高或過低都將影響抗原與抗體的理化性質(zhì)。為了消除嗜異性抗體的影響，可通過在樣品墊中加入正常的動物血清或純化的鼠IGg，又或者在膜上噴有鼠IGgA線，金子中加有正常的動物血清或純化的鼠IGg等等方式將嗜異性抗體排斥在T線前，消除這方面的假陽。對于蛋白從溶液中脫離出來很重要，少量的離子強(qiáng)度，蛋白難以從溶液中脫離沉淀出來，過量的的離子強(qiáng)度，溶液配制中就已會出現(xiàn)沉淀。反應(yīng)環(huán)境為酸性時，已發(fā)生此類結(jié)合。只有1個位點的結(jié)合是可逆的比較容易控制顆粒大小，CV也比較小側(cè)向?qū)游鲋薪Y(jié)合物釋放墊的原理而形成的一種作用力。每一個蛋白質(zhì)都具有疏水基團(tuán)和親水基團(tuán)。防腐劑：疊氮鈉，卡松等一、和膜相關(guān)的配方和原理蛋白質(zhì)具有兩性電離性質(zhì)，因此每種蛋白質(zhì)都有固定的等電點。但電解質(zhì)的濃度不宜過高，否則會出現(xiàn)鹽析現(xiàn)象。5）小分子保護(hù)物質(zhì)：糖類物質(zhì)，如蔗糖，海藻糖等。HAuCL4+e-Au05）小分子保護(hù)物質(zhì)：糖類物質(zhì)，如蔗糖，海藻糖等。三、和樣品墊相關(guān)的配方和原理“潛水艇”效應(yīng)表面活性劑處理過的膜在使用時的常見問題因為使用的表面活性劑是水溶性的噴膜時這些表面活性劑被“沖走”了96能夠生產(chǎn)出大顆粒膠體金“潛水艇”效應(yīng)表面活性劑處理過的膜在反應(yīng)動力學(xué)流速增加,反應(yīng)速率減低流速增加,檢測時間縮短流速增加,靈敏度降低流速增加,試劑用量增加流速增加,背景降低距離增加,流速降低孔徑增加,蛋白結(jié)合量減少97反應(yīng)動力學(xué)流速增加,反應(yīng)速率減低22二、和金子墊相關(guān)的配方和原理

和金子墊相關(guān)的工藝和配方有：1）標(biāo)記工藝；2）金標(biāo)稀釋液3）金墊處理液98二、和金子墊相關(guān)的配方和原理

和金子墊相關(guān)的工藝和配方有：2標(biāo)記工藝膠體金：一般指金的水溶液，又稱金溶膠。---金以微小的粒子分散在水中所形成的金溶膠。其中分散的金顆粒直徑一般在1~100nm之間，為負(fù)電荷分布。99標(biāo)記工藝膠體金：一般指金的水溶液，又稱金溶膠。24高質(zhì)量結(jié)合物單個分散的顆粒圓形顆粒很少聚集這樣得到的膠體穩(wěn)定性和重復(fù)性好Clusterfree,highqualitygoldreagentClustered,poorqualitygoldreagent100高質(zhì)量結(jié)合物單個分散的顆粒Clusterfree,hi膠體金的生產(chǎn)膠體金的形成是還原HAuCl4.HAuCL4+e-Au0還原劑越強(qiáng)，得到的金顆粒越小生產(chǎn)40nm診斷用金顆粒一般用檸檬酸三鈉101膠體金的生產(chǎn)膠體金的形成是還原HAuCl4.26膠體金顆粒的形成102膠體金顆粒的形成27膠體金的生產(chǎn)2種重要步驟直接形成分步形成大多數(shù)人用分步形成比較容易控制顆粒大小，CV也比較小能夠生產(chǎn)出大顆粒膠體金103膠體金的生產(chǎn)2種重要步驟28顆粒大小對膠體的影響104顆粒大小對膠體的影響29蛋白標(biāo)記原理蛋白質(zhì)在等電點或稍偏堿的情況下，依靠靜電引力或疏水力或共價鍵，被牢固地吸附于膠體金顆粒表。由于蛋白質(zhì)分子牢固地結(jié)合在金顆粒表面，形成一個蛋白層，從而阻止了膠體金顆粒的相互接觸，使該膠聯(lián)溶液較為穩(wěn)定。105蛋白標(biāo)記原理蛋白質(zhì)在等電點或稍偏堿的情況下，依靠靜電引力或疏要點蛋白的預(yù)處理使用低濃度和正確的pH值，確保最小的聚集合適的蛋白量（可通過鹽滴定進(jìn)行評價）攪拌速度、容器的潔凈程度、離心的速度106要點蛋白的預(yù)處理31鹽滴定鹽滴定不能衡量蛋白單層的形成鹽滴定只能代表鹽溶液中多少量的蛋白可以使膠體金穩(wěn)定pH和時間都會有影響107鹽滴定鹽滴定不能衡量蛋白單層的形成32蛋白邦定作用力電荷作用力（靜電作用力）疏水力共價鍵108蛋白邦定作用力3310934金標(biāo)稀釋液合適的離子種類和強(qiáng)度，0.2M左右，常用有磷酸鹽等。大分子物質(zhì)作為膠體金干燥后均勻散布的骨架，常用大分子物質(zhì)如PEG4000，PEG20000，PVP。小分子物質(zhì)對蛋白活性保護(hù)，

蛋白儲存常用的甘油、蔗糖、海藻糖、各類低聚糖等，對產(chǎn)品的儲存穩(wěn)定性有幫助。

110金標(biāo)稀釋液合適的離子種類和強(qiáng)度，0.2M左右，常用有磷酸鹽等惰性蛋白，它是保護(hù)目的蛋白的活性，也維持膠體金的膠體穩(wěn)定，它們是消除非特異性的封閉物質(zhì)，也起著有分散膠體金顆粒的骨架作用。常用有BSA、OVA、Casein。表面活性劑，具有增加親水性，促進(jìn)結(jié)合等作用。常用的有Tween-20，Tritonx-100。

111惰性蛋白，它是保護(hù)目的蛋白的活性，也維持膠體金的膠體穩(wěn)定，它評價金標(biāo)稀釋液的參數(shù)金子釋放程度及速度。金標(biāo)液穩(wěn)定性。靈敏度、特異性112評價金標(biāo)稀釋液的參數(shù)金子釋放程度及速度。37結(jié)合物釋放墊的原理什么是結(jié)合物釋放墊?孔徑開放快速層析低蛋白結(jié)合力理想的親水性傳統(tǒng)材料是包被PVA的玻纖113結(jié)合物釋放墊的原理什么是結(jié)合物釋放墊?38典型結(jié)合物釋放墊材料的構(gòu)意圖玻纖高分子PVA外殼114典型結(jié)合物釋放墊材料的構(gòu)意圖玻纖高分子PVA外殼39側(cè)向?qū)游鲋薪Y(jié)合物釋放墊的原理做什么用(理論上)？讓結(jié)合物完好無損的干燥加樣后讓結(jié)合物快速釋放實際應(yīng)用中側(cè)向?qū)游鲋薪Y(jié)合物釋放墊可能遇到的問題比其它任何組分都多115側(cè)向?qū)游鲋薪Y(jié)合物釋放墊的原理做什么用(理論上)？40標(biāo)準(zhǔn)結(jié)合物釋放墊的性能45秒內(nèi)釋放出約70%的結(jié)合物但是墊上保留的結(jié)合物降低了靈敏度，因為:較少的結(jié)合物到達(dá)捕獲線較少的抗原到達(dá)捕獲線在側(cè)向?qū)游鱿到y(tǒng)中靈敏度要好線條CV值一般在15-20%116標(biāo)準(zhǔn)結(jié)合物釋放墊的性能45秒內(nèi)釋放出約70%的結(jié)合物41儲存于20oC時結(jié)合物釋放率117儲存于20oC時結(jié)合物釋放率42金墊處理液作用：增加親水性,促進(jìn)復(fù)溶,保持穩(wěn)定性基本成分：1）緩沖系統(tǒng)：磷酸，碳酸，硼酸，Tris,生物緩沖液等。2）表面活性劑：Tween-20，Tritonx-100等。3）大分子物質(zhì)：PEG4000，PEG20000，PVP，PVA4）惰性蛋白：BSA、OVA、Casein。5）小分子保護(hù)物質(zhì)：糖類物質(zhì)，如蔗糖，海藻糖等。

118金墊處理液作用：增加親水性,促進(jìn)復(fù)溶,保持穩(wěn)定性43結(jié)合物釋放常見問題釋放不充分釋放慢釋放墊再次濕潤困難119結(jié)合物釋放常見問題釋放不充分44釋放不充分結(jié)合物綁定到釋放墊上了用聚合物和表面活性劑封閉釋放墊在儲存過程中，結(jié)合物發(fā)生聚集控制封閉劑的用量控制溶液的離子強(qiáng)度120釋放不充分結(jié)合物綁定到釋放墊上了45釋放慢您的釋放墊是怎樣封閉的?是否加了親水試劑？是否用了大量的蛋白?是否用了大量的糖?試紙條各組分之間接觸緊密么?121釋放慢您的釋放墊是怎樣封閉的?46釋放墊再次濕潤困難您使用的是哪一種釋放墊?是親水的么?您是怎樣封閉釋放墊的?122釋放墊再次濕潤困難您使用的是哪一種釋放墊?47三、和樣品墊相關(guān)的配方和原理作用：改變樣本PH,調(diào)節(jié)爬速,控制金標(biāo)釋放，抑制非特異性吸附,降低背景基本成分：1）緩沖系統(tǒng)：磷酸，碳酸，硼酸，Tris,生物緩沖液等。2）表面活性劑：Tween-20，Tritonx-100等。3）大分子聚合物質(zhì)：PEG4000，PEG20000，PVP，PVA4）惰性蛋白：BSA、OVA、Casein。5）生物物質(zhì)：鼠IGg，抗紅細(xì)胞抗體等。123三、和樣品墊相關(guān)的配方和原理作用：改變樣本PH,調(diào)節(jié)爬速,血清類樣品墊注意爬速，背景，靈敏度的達(dá)到和假陽的消除。全血類樣品墊1）必須能夠去除紅細(xì)胞！2）還需具備下列功能不能造成溶血不能干擾樣品分離必須快速高效必須能夠分離一定范圍內(nèi)的不同血樣量靈敏度的達(dá)到和假陽的消除124血清類樣品墊49尿液類樣品墊注意交叉反應(yīng)的消除。125尿液類樣品墊50影響抗原抗體反應(yīng)的外部因素電解質(zhì)抗原與抗體發(fā)生結(jié)合后，由親水膠體變?yōu)槭杷z體的過程中須有電解質(zhì)參與才能進(jìn)一步使抗原抗體復(fù)合物表面失去電荷，水化層破壞，復(fù)合物相互靠攏聚集，形成大塊的凝集或沉淀。若無電解質(zhì)參加，則不出現(xiàn)可見反應(yīng)。為了促使沉淀物或凝集物的形成，常用O.85％氯化鈉或各種緩沖液作抗原及抗體的稀釋液及反應(yīng)液。但電解質(zhì)的濃度不宜過高，否則會出現(xiàn)鹽析現(xiàn)象。126影響抗原抗體反應(yīng)的外部因素電解質(zhì)51酸堿度蛋白質(zhì)具有兩性電離性質(zhì)，因此每種蛋白質(zhì)都有固定的等電點?？乖贵w反應(yīng)必須在合適的pH環(huán)境中進(jìn)行，pH過高或過低都將影響抗原與抗體的理化性質(zhì)?？乖贵w反應(yīng)一般在pH為6～9進(jìn)行。127酸堿度52溫度抗原抗體反應(yīng)必須在合適的溫度中進(jìn)行，一般以15～40℃為宜，最適反應(yīng)溫度為37℃。某些特殊的抗原抗體反應(yīng)，對溫度有一些特殊的要求，例如冷凝集素在4℃左右與紅細(xì)胞結(jié)合最好，20℃以上反而解離。128溫度53反應(yīng)時間反應(yīng)時間越長，抗原抗體反應(yīng)越充分，顯色也越深。所有調(diào)整輔料的思路都可從抗原抗體反應(yīng)的影響因素和輔料的成分性質(zhì)進(jìn)行考慮和設(shè)計。129反應(yīng)時間54四、相關(guān)問題假陽問題假陰問題穩(wěn)定性問題上樣問題130四、相關(guān)問題假陽問題55（一）假陽問題未標(biāo)記上的金顆粒（裸金）電荷作用疏水作用硫醇類物質(zhì)的存在（S-H鍵起作用）抗原抗體作用（內(nèi)源性物質(zhì)）抗凝劑和防腐劑的影響其他原因131（一）假陽問題未標(biāo)記上的金顆粒（裸金）56未標(biāo)記上的金顆粒（裸金）裸金聚集，周圍具有大量的負(fù)電荷，當(dāng)樣本爬過金墊，裸金隨著向上跑，在T線位置只要碰到帶有正電荷的蛋白，即發(fā)生反應(yīng)，形成假陽線條。解決方法：檢查標(biāo)記過程，BSA封閉132未標(biāo)記上的金顆粒（裸金）裸金聚集，周圍具有大量的負(fù)電荷，當(dāng)樣電荷作用

膠體金顆粒帶有負(fù)電荷，當(dāng)遇上帶有正電荷的蛋白，易發(fā)生非特異性結(jié)合反應(yīng)，導(dǎo)致假陽。反應(yīng)環(huán)境為酸性時，已發(fā)生此類結(jié)合。解決方法：改變pH和鹽度133電荷作用

膠體金顆粒帶有負(fù)電荷，當(dāng)遇上帶有正電荷的蛋白，易發(fā)疏水作用抗原抗體結(jié)合以及和膠體金結(jié)合都需要用到疏水作用力，當(dāng)反應(yīng)環(huán)境中存在疏水物質(zhì)時，易和膠體金或抗原抗體通過疏水作用力結(jié)合，產(chǎn)生假陽結(jié)果，如標(biāo)本里的一些脂肪，細(xì)胞碎片，細(xì)菌等等。解決方法：用表面活性劑或親水聚合物進(jìn)行處理。134疏水作用抗原抗體結(jié)合以及和膠體金結(jié)合都需要用到疏水作用力，當(dāng)抗原抗體作用此類作用是指標(biāo)本里面含有能和標(biāo)記材料/包被材料發(fā)生免疫反應(yīng)的非目標(biāo)物的其他物質(zhì)導(dǎo)致的假陽結(jié)果。常見的有毒品的交叉反應(yīng)，如KET試劑檢測美沙酮標(biāo)本，呈現(xiàn)陽性反應(yīng)，就是美沙酮和KET材料發(fā)生了交叉反應(yīng)；又有SG試劑中的抗鼠抗體反應(yīng)等等。解決方法：在樣品墊或金子墊或硝酸纖維素膜上加入相應(yīng)的抗體，將這類物質(zhì)在T線前消除掉。135抗原抗體作用此類作用是指標(biāo)本里面含有能和標(biāo)記材料/包被材料發(fā)在血清檢測中的具體非特異性反應(yīng)物質(zhì)大約40%的人血清標(biāo)本中含有非特異干擾物質(zhì)，可以不同程度影響檢測結(jié)果。常見的干擾物質(zhì)有：類風(fēng)濕因子、補體、嗜異性抗體、嗜靶抗原自身抗體、醫(yī)源性誘導(dǎo)的抗鼠Ig(s)抗體、交叉反應(yīng)物質(zhì)和其他物質(zhì)等。136在血清檢測中的具體非特異性反應(yīng)物質(zhì)大約40%的人血清標(biāo)本中含類風(fēng)濕因子

人血清中IgM、IgG型類風(fēng)濕因子(RF)可以與ELISA系統(tǒng)中的捕獲抗體及酶標(biāo)記二抗的FC段直接結(jié)合，從而導(dǎo)致假陽性。解決該情況的辦法是：(1)用F(ab)2替代完整的IgG；(2)標(biāo)本用預(yù)先熱變性(63℃，10min)IgG的固相吸附劑處理(將熱變性IgG加入到標(biāo)本稀釋液中同樣有效)；(3)檢測抗原時，可以用2-巰基乙醇等加入到標(biāo)本稀釋