國內(nèi)外食品微生物檢測方法大全課件

準(zhǔn)確、可靠的檢驗(yàn)結(jié)果是正確評價(jià)和保證食品安全性的先決條件，也是國際貿(mào)易上公平交易的有力科學(xué)依據(jù)。在食品微生物檢驗(yàn)領(lǐng)域中，檢驗(yàn)規(guī)程規(guī)范化和分析方法標(biāo)準(zhǔn)化是檢驗(yàn)結(jié)果可信性的重要保證。避免“公說公有理，婆說婆有理”；避免“仁者見仁，智者見智”1/4/2023準(zhǔn)確、可靠的檢驗(yàn)結(jié)果是正確評價(jià)和保證食品安全性的先決1內(nèi)容第一部分國內(nèi)外食品微生物標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)體系第二部分微生物檢驗(yàn)快速檢測系統(tǒng)第三部分方法的選擇第四部分微生物檢驗(yàn)方法的編寫第五部分食品微生物檢驗(yàn)方法的驗(yàn)證和確認(rèn)1/4/2023內(nèi)容第一部分國內(nèi)外食品微生物標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)體系122第一部分國內(nèi)外的食品微生物標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)體系一、術(shù)語和定義

1、標(biāo)準(zhǔn)方法：指國際、區(qū)域、國家發(fā)布的經(jīng)過嚴(yán)格確認(rèn)的以及公認(rèn)的方法。標(biāo)準(zhǔn)方法包括參考方法和公定方法。

（1）參考方法：指適用于特殊待驗(yàn)?zāi)繕?biāo)的經(jīng)過國際或國家公認(rèn)的檢驗(yàn)方法。對于食品微生物檢驗(yàn)而言，典型的傳統(tǒng)的參考方法是培養(yǎng)法。

（2）公定方法：指知名的技術(shù)組織或機(jī)構(gòu)（如AOAC）公布的檢測方法。

2、非標(biāo)準(zhǔn)方法：標(biāo)準(zhǔn)方法中未包含的需要確認(rèn)后才能采用的方法。

可替代方法：指用來檢驗(yàn)?zāi)骋惶囟óa(chǎn)品中某種目標(biāo)微生物的與相應(yīng)參考方法等效的方法（ISO16140:2003），如快速檢測試劑盒和自動(dòng)化系統(tǒng)。值得說明的是，并非所有的可替代方法都是標(biāo)準(zhǔn)方法。1/4/2023第一部分國內(nèi)外的食品微生物標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)體系一、術(shù)語和定義可3二、國內(nèi)外食品微生物檢測體系

國內(nèi)主要食品微生物檢測體系

國家標(biāo)準(zhǔn)(GB)

檢驗(yàn)檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)(SN)

衛(wèi)生行標(biāo)(WS)

農(nóng)業(yè)行標(biāo)(NY)國外主要食品微生物檢測體系

國際標(biāo)準(zhǔn)化組織(ISO)

美國食品藥品監(jiān)督局（FDA）(online)

美國官方分析化學(xué)師協(xié)會(huì)(AOAC)

美國農(nóng)業(yè)部（USDA）(online)

加拿大健康署(HPB)(online)

美國公共衛(wèi)生協(xié)會(huì)(APHA)

北歐食品分析委員會(huì)（NMKL）

法國標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(huì)(AFNOR)標(biāo)準(zhǔn)、英國國家標(biāo)準(zhǔn)(BS)、日本國家標(biāo)準(zhǔn)(JIS)、韓國國家標(biāo)準(zhǔn)（KS）等

標(biāo)準(zhǔn)方法非標(biāo)準(zhǔn)方法科學(xué)書籍和期刊公布的方法；實(shí)驗(yàn)室研發(fā)的未出版的方法；部分由設(shè)備制造商指定的方法；擴(kuò)充和修改過的標(biāo)準(zhǔn)方法；企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)；部分協(xié)會(huì)標(biāo)準(zhǔn)；部分地方標(biāo)準(zhǔn)等。食品微生物檢測方法標(biāo)準(zhǔn)方法未包含的方法

1/4/2023二、國內(nèi)外食品微生物檢測體系國內(nèi)主要食品微生物檢測體系4

食品中常規(guī)指示菌和致病菌的關(guān)系好氧菌總數(shù)腸桿菌科大腸菌群糞大腸菌群大腸桿菌沙門氏菌致瀉性大腸桿菌金黃色葡萄球菌糞鏈球菌弧菌科單增李斯特氏菌志賀氏菌芽孢桿菌O157厭氧梭菌彎曲菌1/4/2023食品中常規(guī)指示菌和致病菌的關(guān)系好氧菌總數(shù)腸桿菌科大腸5常規(guī)指示菌和致病菌的“危害分類”VeryfewmicrobesarealwayspathogenicManymicrobesarepotentiallypathogenicMostmicrobesareneverpathogenic如霍亂弧菌、O157、單核細(xì)胞增生李斯特氏菌等如腸球菌、蠟樣芽孢桿菌、白色念珠菌、枯草芽孢桿菌等如乳酸桿菌、雙歧桿菌等1/4/2023常規(guī)指示菌和致病菌的“危害分類”Veryfewmicro6食品微生物檢測方法方法定量方法定性方法直接計(jì)數(shù)方法細(xì)菌總數(shù)*、大腸菌群*、大腸桿菌*、腸球菌*、金黃色葡萄球菌*、蠟樣芽孢桿菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌、單核增生李斯特氏菌、沙門氏菌、彎曲菌屬、腸桿菌科*、副溶血性弧菌、亞硫酸鹽還原梭菌、李斯特氏菌屬、霉菌和酵母菌數(shù)*、嗜冷菌*、乳酸菌、雙歧桿菌等間接計(jì)數(shù)法(MPN法)大腸菌群*、糞大腸菌群*、大腸桿菌*、腸球菌*、金黃色葡萄球菌*、蠟樣芽孢桿菌、單核增生李斯特氏菌、腸桿菌科*、副溶血性弧菌、亞硫酸鹽還原梭菌等致病菌：單核細(xì)胞增生李斯特氏菌、沙門氏菌、空腸彎曲菌、O157、霍亂弧菌、副溶血性弧菌、溶藻弧菌、創(chuàng)傷弧菌、肉毒梭菌、小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌、產(chǎn)毒霉菌等

帶*者通常被列為食品衛(wèi)生指示菌1/4/2023食品微生物檢測方法方法定量方法定性方法直接計(jì)數(shù)方法間接計(jì)7傳統(tǒng)直接計(jì)數(shù)法平板傾注法平板涂布法1/4/2023傳統(tǒng)直接計(jì)數(shù)法平板傾注法平板涂布法12/28/202281/4/202312/28/202291/4/202312/28/202210MPN法適用于污染程度低，含有受到損傷的加工食品，目標(biāo)微生物數(shù)量低，否則，應(yīng)用直接計(jì)數(shù)方法間接計(jì)數(shù)法——最大可能數(shù)量（MPN）1/4/2023MPN法適用于污染程度低，含有受到損傷的加工食品，目標(biāo)微生物11三、區(qū)分幾個(gè)關(guān)系1、國家標(biāo)準(zhǔn)與行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的關(guān)系？

食品微生物檢驗(yàn)的國家標(biāo)準(zhǔn)是GB/T4789，其為基礎(chǔ)標(biāo)準(zhǔn)，行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)方法原則上應(yīng)與其一致，至少不能與國家標(biāo)準(zhǔn)相矛盾。進(jìn)口產(chǎn)品用GB???出口產(chǎn)品用SN??????

2、國家標(biāo)準(zhǔn)與國際標(biāo)準(zhǔn)的關(guān)系？

為了公平貿(mào)易，國家標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)與國際標(biāo)準(zhǔn)接軌。應(yīng)考慮優(yōu)先使用國際標(biāo)準(zhǔn)。現(xiàn)狀。實(shí)例：2004年USDA來青進(jìn)行等效性評估。3、[國內(nèi)]國家標(biāo)準(zhǔn)/行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)與[他國]國家標(biāo)準(zhǔn)/行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的使用？

根據(jù)ISO/IEC17025的規(guī)定，如果進(jìn)口國要求使用他國國家標(biāo)準(zhǔn)/行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，原則上要滿足客戶的要求，否則，需與客戶協(xié)商。即使國內(nèi)國家標(biāo)準(zhǔn)/行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)與他國國家標(biāo)準(zhǔn)/行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)等效或等同，也必須與客戶協(xié)商和溝通，只有做客戶統(tǒng)一的情況下方可使用。1/4/2023三、區(qū)分幾個(gè)關(guān)系1、國家標(biāo)準(zhǔn)與行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的關(guān)系？12/28/212第二部分微生物快速檢測系統(tǒng)1/4/2023第二部分微生物快速檢測系統(tǒng)12/28/202213第一節(jié)主要微生物檢驗(yàn)快速檢測系統(tǒng)

一、以免疫學(xué)為基礎(chǔ)的檢驗(yàn)法1/4/2023第一節(jié)主要微生物檢驗(yàn)快速檢測系統(tǒng)一、以免疫學(xué)為基礎(chǔ)的檢14免疫磁珠檢驗(yàn)法的優(yōu)點(diǎn):特異性好靈敏度高≤1CFU所捕獲的菌是活菌快速、操作步驟簡便可快速處理較大量樣品1/4/2023免疫磁珠檢驗(yàn)法的優(yōu)點(diǎn):12/28/2022151/4/202312/28/202216商業(yè)化免疫磁珠有：沙門氏菌O157:H7單核細(xì)胞增生李斯特氏菌VTECO145

VTECO111VTECO103VTECO26等等SN/T***-****進(jìn)出口食品中產(chǎn)志賀氏毒素大腸桿菌的檢驗(yàn)方法1/4/2023商業(yè)化免疫磁珠有：SN/T***-****進(jìn)出口食品中17

可篩選沙門氏菌、腸出血性大腸桿菌O157、李斯特氏菌、空腸彎曲菌、單核細(xì)胞增生李斯特氏菌、葡萄球菌腸毒素；可免疫濃縮沙門氏菌、免疫濃縮腸出血性大腸桿菌O157Mini-VIDAS自動(dòng)微生物篩選儀1/4/2023可篩選沙門氏菌、腸出血性大腸桿菌O15718二、以分子生物學(xué)為基礎(chǔ)的檢驗(yàn)法DIN10135：1999《沙門氏菌聚合酶連鎖反應(yīng)(PCR)檢驗(yàn)方法》、ISO/TS20863：2005《食品和動(dòng)物飼料微生物學(xué)—聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)檢測食源病原體—熱循環(huán)器的性能試驗(yàn)》、ISO/TS22174:2005《食品和動(dòng)物飼料微生物學(xué)—聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)檢測食源病原體—通用要求和定義》、ISO20837:2006《食品和動(dòng)物飼料微生物學(xué)—聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)檢測食源病原體—定性檢測用樣品的制備》、ISO/TS20838：2006《食品和動(dòng)物飼料微生物學(xué)—聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)檢測食源病原體—定性方法的擴(kuò)增和檢測條件》、HealthCanadaMFLP-72、USAFDABAM第9章和USAAPHA第40章規(guī)定可用PCR檢測食品中的致病弧菌（如霍亂弧菌、副溶血性弧菌、創(chuàng)傷弧菌等）、HealthCanada

MFLP-24和USAFDABAM第24章和USAAPHA第35章規(guī)定可用PCR檢測食品中產(chǎn)志賀氏毒素的致病大腸桿菌和霍亂弧菌。SN/T1632.2：2005《奶粉中阪崎腸桿菌檢驗(yàn)方法第2部分：PCR方法》SN/T1632.3：2005《奶粉中阪崎腸桿菌檢驗(yàn)方法第3部分：熒光PCR方法》PCR檢測食品中霍亂弧菌、副溶血性弧菌、金黃色葡萄球菌、單核細(xì)胞增生李斯特氏菌、產(chǎn)志賀氏毒素大腸桿菌等致病菌的SN均在報(bào)批中，即將發(fā)布。1/4/2023二、以分子生物學(xué)為基礎(chǔ)的檢驗(yàn)法DIN10135：1999《19PCR技術(shù)將是眾多食品微生物快速檢測中被認(rèn)可的一枝獨(dú)秀的快速檢測技術(shù)之一。

但須注意：如何減少培養(yǎng)基成分的干擾？死菌的干擾和風(fēng)險(xiǎn)？等等1/4/2023PCR技術(shù)將是眾多食品微生物快速檢測中被認(rèn)可20基因芯片-DNA點(diǎn)樣儀

基因芯片的基本技術(shù)路線1、采用數(shù)據(jù)庫中各種微生物的全基因組序列資料或部分基因組序列資料，通過生物信息學(xué)方法找出各種微生物的特異序列，每個(gè)檢測目標(biāo)找3-5個(gè)特異序列，每個(gè)序列長度為25-75mer。并設(shè)計(jì)五條陰性序列（這些序列不代表任何一個(gè)待分析的微生物）。2、合成上述特異序列（探針）。探針將不是傳統(tǒng)的cDNA形式，而是oligo寡聚核酸，這樣將大大提高檢測靈敏度。3、利用基因芯片點(diǎn)樣系統(tǒng)將探針點(diǎn)樣到載體上。同一種微生物的特異性探針點(diǎn)樣到芯片的一個(gè)區(qū)域。4、尋找適當(dāng)?shù)姆椒ǎ崛∥⑸锏幕蚪M核酸。5、加入相應(yīng)的引物、熒光染料或用分子信標(biāo)的方法，通過PCR擴(kuò)增特異性片段。6、將帶有熒光染料標(biāo)記的核酸與基因芯片雜交。7、雜交結(jié)果由基因芯片掃描儀進(jìn)行掃描判讀，對于管帽芯片也可用熒光顯微鏡進(jìn)行觀察。8、結(jié)果分析，針對雜交陽性位點(diǎn)，找出對應(yīng)的陽性樣品。

SN/T1543:2005食源性致病菌基因芯片鑒定方法1/4/2023基因芯片-DNA點(diǎn)樣儀21三、生化鑒定系統(tǒng)1/4/2023三、生化鑒定系統(tǒng)12/28/202222BDPHOENIX?全自動(dòng)微生物鑒定系統(tǒng)大腸桿菌（G-）沙門氏菌(G-)志賀氏菌(G-)彎曲桿菌(G-)弧菌(G-)小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌(G-)金黃葡萄球菌(G+)李斯特氏菌(G+)***產(chǎn)氣甲膜梭菌(G+)肉毒梭菌(G+)鏈球菌(G+)炭疽桿菌(G+)雙歧桿菌（G+）乳酸菌（G+）VITEK2COMPACT1/4/2023BDPHOENIX?大腸桿菌（G-）VITEK2COM23四、根據(jù)酶觸反應(yīng)及代謝產(chǎn)物快速檢測細(xì)菌1/4/2023四、根據(jù)酶觸反應(yīng)及代謝產(chǎn)物快速檢測細(xì)菌12/28/2022241/4/202312/28/2022251/4/202312/28/202226五、其他部分自動(dòng)化系統(tǒng)1/4/2023五、其他部分自動(dòng)化系統(tǒng)12/28/202227BIOLOG自動(dòng)微生物鑒定系統(tǒng)BIOLOGOmniLog&OmniLogPlusMicroLog1MicroLog2MicroLog3(MicroStation)OmniLogMicroLog1/4/2023BIOLOG自動(dòng)微生物鑒定系統(tǒng)BIOLOGOmniLog28第二節(jié)微生物快速檢測系統(tǒng)的局限性

大部分快速方法適用于檢測單一微生物，適用于質(zhì)量控制程序中快速篩選大量食品樣品中所存在的特殊病原體或毒素。然而，快速檢驗(yàn)方法所得陽性者，僅僅是可疑，必須用標(biāo)準(zhǔn)參考方法予以證實(shí)，雖然證實(shí)試驗(yàn)需要幾天，但不能予以限制。

快速檢驗(yàn)方法的評估結(jié)果表明，其對于某類食品的性能優(yōu)于其它食品，很大程度上是由于食品成分干擾所致，有些食品成分對于快速方法中所應(yīng)用的技術(shù)是比較麻煩的。例如，每一食品成分可能抑制DNA雜交或Taq聚合酶，但對抗原-抗體相互作用沒有影響，反之亦然。既然方法的靈敏度、特異性和精確性依賴于待驗(yàn)食品，那么進(jìn)行比較研究以確保某一特殊檢驗(yàn)方法能有效分析此類食品是明智的。1/4/2023第二節(jié)微生物快速檢測系統(tǒng)的局限性大部分快29

基于DNA檢驗(yàn)方法的特異性通過短的探針來顯示，因此用特殊探針或引物檢測毒素基因，陽性結(jié)果僅僅表明某細(xì)菌具有該基因序列，以及某細(xì)菌可能是產(chǎn)毒的，不能從客觀上說明該基因得以表達(dá)，并產(chǎn)生毒素，例如在梭菌和葡萄球菌中毒病例中，DNA雜交和PCR僅能檢測到基因的存在，但不能用來檢測預(yù)先形成的毒素是否存在。

隨著某一快速方法更加頻繁的使用，其好處和局限性同時(shí)變得更加明顯。使用者在選擇和徹底評估這些快速方法時(shí)，必須保持謹(jǐn)慎。1/4/2023基于DNA檢驗(yàn)方法的特異性通過短的探針來顯示30FDA認(rèn)可使用的檢測系統(tǒng)和試劑盒

檢測和鑒定食源性病原菌的微量生化復(fù)合試劑盒

微生物自動(dòng)鑒定系統(tǒng)

核酸雜交分析（分子生物學(xué)）方法

免疫學(xué)分析方法

其它商品化快速檢測方法和培養(yǎng)基第三節(jié)微生物快速檢測系統(tǒng)的認(rèn)可一、USDAFDA認(rèn)可情況1/4/2023FDA認(rèn)可使用的檢測系統(tǒng)和試劑盒檢測和鑒定食源性病原菌的311/4/202312/28/2022321/4/202312/28/2022331/4/202312/28/2022341/4/202312/28/2022351/4/202312/28/2022361/4/202312/28/202237二、AOAC、NMKL、AFNOR、

NORDVAL、MICROVAL的認(rèn)可情況AOAC指南美國管理者(USregulators)ISO16140AOAC研究所NMKLNordValMicroValAOAC&OMA非美國管理者，如NATAAFNOR認(rèn)可微生物快速檢測系統(tǒng)的主要知名技術(shù)組織或機(jī)構(gòu)的相互關(guān)系認(rèn)可(agreement)逐步淘汰(phasingout)1/4/2023二、AOAC、NMKL、AFNOR、

NORDVAL、MIC38第三部分方法的選擇1．客戶要求；2．方法的準(zhǔn)確性；3．方法的特異性；4．方法的實(shí)用性；5．方法的穩(wěn)定性；6．方法的靈敏度；7．方法的檢測限和測量限；8．實(shí)驗(yàn)室硬件條件（儀器、設(shè)備、場地設(shè)施、人員資質(zhì)等）；9．商業(yè)快速檢測系統(tǒng)的供應(yīng)保證、價(jià)格、認(rèn)可程度和售后服務(wù)。1/4/2023第三部分方法的選擇1．客戶要求；12/28/202239通常情況下，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)采用滿足客戶（注：對于企業(yè)實(shí)驗(yàn)室，其所在單位為其內(nèi)部客戶）需要并適用于所進(jìn)行的檢測的方法，包括在抽樣的方法。應(yīng)優(yōu)先使用以國際、區(qū)域或國家標(biāo)準(zhǔn)發(fā)布的方法。當(dāng)認(rèn)為客戶提出的方法不合適或已過期時(shí)，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)通知客戶。

當(dāng)客戶未指定所用方法時(shí)，除優(yōu)先使用國際、區(qū)域、國家或知名的技術(shù)組織發(fā)布的標(biāo)準(zhǔn)方法外，還可選擇非標(biāo)準(zhǔn)方法，但必須對所選擇的非標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行嚴(yán)格驗(yàn)證、確認(rèn)和審批，如能滿足實(shí)驗(yàn)室的預(yù)期用途，并經(jīng)客戶同意，也可使用。1/4/2023通常情況下，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)采用滿足客戶（注：對于企業(yè)40第四部分微生物檢驗(yàn)方法的編寫標(biāo)準(zhǔn)方法的一般構(gòu)成和編寫順序：1．資料性技術(shù)要素：封面、目次*、前言、引言；

2．規(guī)范性一般要素：名稱、范圍、規(guī)范性引用文件*；3．規(guī)范性技術(shù)要素：術(shù)語和定義*、符號(hào)和縮略語、食品微生物檢驗(yàn)(原理*、培養(yǎng)基和試劑、設(shè)備和材料、采樣*、制樣、增菌培養(yǎng)、篩選、鑒定和確認(rèn)等)、結(jié)果判定（判定方法和判定標(biāo)準(zhǔn)）、結(jié)果報(bào)告*、規(guī)范性附錄*；

4．資料性補(bǔ)充要素：資料性附錄*、參考文獻(xiàn)*、索引*。上述構(gòu)成要素不是任何一項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)都需要全部包括的，標(biāo)有*者可根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)化對象的特征和制定標(biāo)準(zhǔn)化的目的而取舍。第一節(jié)標(biāo)準(zhǔn)方法的編寫1/4/2023第四部分微生物檢驗(yàn)方法的編寫標(biāo)準(zhǔn)方法的一般構(gòu)成和編寫順序：411/4/202312/28/2022421/4/202312/28/202243第二節(jié)非標(biāo)準(zhǔn)方法的編寫

一般要求以接近國家標(biāo)準(zhǔn)（如GB/T1.1－2000）或行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)推薦方法的格式進(jìn)行編寫。等同、修改采用國際標(biāo)準(zhǔn)或國外先進(jìn)標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，其編寫格式和方法可與被采用的標(biāo)準(zhǔn)一致。力求標(biāo)準(zhǔn)結(jié)構(gòu)嚴(yán)謹(jǐn)、層次分明、主題突出，簡單易懂。

一、非標(biāo)準(zhǔn)方法的編寫原則

1/4/2023第二節(jié)非標(biāo)準(zhǔn)方法的編寫一般要求以接近國家標(biāo)44二、非標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)方法的基本編寫格式（1）封面每項(xiàng)非標(biāo)準(zhǔn)微生物檢驗(yàn)方法應(yīng)該有封面，封面的內(nèi)容有“×××（單位）×××（部門）非標(biāo)準(zhǔn)方法”字樣和非標(biāo)準(zhǔn)方法的標(biāo)志（注：選擇性的）、中文名稱、英文名稱（注：選擇性的）、非標(biāo)準(zhǔn)方法的唯一性編號(hào)、代替非標(biāo)準(zhǔn)編號(hào)（注：選擇性的）、發(fā)布日期、實(shí)施日期、標(biāo)準(zhǔn)的審批部門等（見附錄1示例2）。（2）正文內(nèi)容一般包含下列內(nèi)容，必要時(shí)可增減相關(guān)條目：①目的、范圍；②方法提要或原理:簡述所用方法的主要步驟及采用的基本原理；③設(shè)備和材料：標(biāo)明規(guī)格和型號(hào)；④培養(yǎng)基和試劑：必須符合GB/T4789.28和SN/T1583的規(guī)定；⑤檢驗(yàn)程序：畫出主要的檢驗(yàn)程序框圖；⑥操作步驟：包括試樣制備（含稀釋或按特定條件的制備）、培養(yǎng)（含前增菌培養(yǎng)和增菌培養(yǎng)，分離培養(yǎng)等，可根據(jù)需要取舍和分步描述）、初步鑒定（可根據(jù)需要取舍）、確證鑒定（含進(jìn)一步的生化反應(yīng)和血清學(xué)分型，可根據(jù)需要確定試驗(yàn)內(nèi)容）毒素試驗(yàn)（可根據(jù)需要取舍）、動(dòng)物試驗(yàn)（可根據(jù)需要取舍）；⑦結(jié)果報(bào)告；⑧其它（包括內(nèi)部質(zhì)量保證要點(diǎn)、生物防護(hù)要求；）；⑨附錄（資料性附錄和規(guī)范性附錄）⑩方法來源（如參考文獻(xiàn)、儀器設(shè)備方法等）。1/4/2023二、非標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)方法的基本編寫格式（1）封面12/45三、非標(biāo)準(zhǔn)方法的審批

制訂SOP，實(shí)施需要其它材料？進(jìn)一步規(guī)范方法實(shí)驗(yàn)室將全部材料送至主管部門實(shí)驗(yàn)室提供材料和信息審核全部材料被批準(zhǔn)和備案否實(shí)驗(yàn)室申請認(rèn)可，提交材料是是否需要采取后續(xù)措施（包括能力驗(yàn)證、實(shí)驗(yàn)室內(nèi)試驗(yàn)、實(shí)驗(yàn)室間協(xié)作試驗(yàn)等）？實(shí)驗(yàn)室編寫和確認(rèn)方法實(shí)驗(yàn)室采取所需的措施主管部門組織技術(shù)專家組進(jìn)行材料審查和技術(shù)審核（包括能力驗(yàn)證結(jié)果、性能特征、實(shí)驗(yàn)室內(nèi)試驗(yàn)結(jié)果、實(shí)驗(yàn)室間協(xié)作試驗(yàn)結(jié)果等），決定是否需要現(xiàn)場考查。現(xiàn)場核查實(shí)驗(yàn)室調(diào)研現(xiàn)場核查？否專家組評估所采取措施是否充分合理？是否是是否

非標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)方法的審批程序1/4/2023三、非標(biāo)準(zhǔn)方法的審批制訂SOP，實(shí)施需要其它材料？進(jìn)一步規(guī)46第三節(jié)標(biāo)準(zhǔn)操作程序的編寫標(biāo)準(zhǔn)操作程序（standardoperationpractices，SOP）是用來指導(dǎo)某個(gè)具體過程、事物所形成的技術(shù)性細(xì)節(jié)描述的可操作性文件，國內(nèi)常常稱之為“作業(yè)指導(dǎo)書”，二者沒有本質(zhì)區(qū)別。SOPs的編寫及使用是實(shí)驗(yàn)室成功質(zhì)量體系中的一部分，因?yàn)樗転椴僮魅藛T提供正確完成一項(xiàng)工作的信息，從而保證不同操作人員都能在一定的不確定度范圍內(nèi)得到相同的微生物檢驗(yàn)結(jié)果。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)關(guān)注以下四個(gè)方面SOPs：1．方法類：包括食品微生物檢驗(yàn)方法中不詳細(xì)或不完善部分的補(bǔ)充，期間核查、方法確認(rèn)及比對等；2．設(shè)備類：重要或復(fù)雜設(shè)備的使用、操作規(guī)范（如設(shè)備制造商提供的技術(shù)說明書不夠明細(xì)等）；3．樣品類：取樣、制樣和樣品處置的“實(shí)施細(xì)則”等；4．?dāng)?shù)據(jù)類：定量檢測結(jié)果的表達(dá)、異常數(shù)據(jù)的剔除、測量結(jié)果不確定度的評定等等。SOP是技術(shù)性的文件，并不要求必須制訂。一、定義和分類1/4/2023第三節(jié)標(biāo)準(zhǔn)操作程序的編寫標(biāo)準(zhǔn)操作程序（standardo47二、食品微生物檢驗(yàn)SOP的編寫依據(jù)目前，在國內(nèi)，尚未檢索到關(guān)于食品微生物檢驗(yàn)SOP的編寫導(dǎo)則及相關(guān)要求；在國外，美國環(huán)境保護(hù)署(EPA)(/quality/sops.html)和美國農(nóng)業(yè)部銷售司(AMS)(/science/mpo/)均發(fā)布關(guān)于微生物檢驗(yàn)SOP的編寫導(dǎo)則及相關(guān)要求，前者是后者的藍(lán)本：①EPAQA/G-6《GuidanceforPreparingStandardOperatingProcedures(SOPs)》；②EPASOPADM-02-02《StandardOperatingProcedureforPreparationandReviewofStandardOperatingProcedures(SOPs)》；③USDAMDP-ADMIN-07《PreparationandMaintenanceofStandardOperatingProcedures(SOPs)》。以上文本均可從相應(yīng)網(wǎng)站免費(fèi)下載，同時(shí)EPA和USDAAMS制定了一系列與微生物檢驗(yàn)相關(guān)的SOPs，這些SOPs的編寫結(jié)構(gòu)和格式值得借鑒和參考。1/4/2023二、食品微生物檢驗(yàn)SOP的編寫依據(jù)目前，在國內(nèi)，尚未檢索到關(guān)48

SOP的格式方法一：參照美國農(nóng)業(yè)部農(nóng)業(yè)銷售司(AMS)的微生物數(shù)據(jù)程序/science/mpo/sops.htm

方法二：參照美國環(huán)境保護(hù)署（EPA）的EPAQUALITYSYSTEM

/quality/sops.html作業(yè)指導(dǎo)書與SOP無本質(zhì)區(qū)別1/4/2023SOP的格式作業(yè)指導(dǎo)書與SOP無本質(zhì)區(qū)別12/28/20249三、SOP的基本編寫格式

下面結(jié)合一個(gè)實(shí)例，介紹一下編寫微生物檢驗(yàn)SOP的基本格式和要求：（1）封面①編寫單位：中英文對照。②標(biāo)題：測定對象—測定項(xiàng)目—測定方法名稱(中英文對照)；測定對象：以產(chǎn)品為主，采用最常規(guī)的產(chǎn)品名稱（可參照國際、國家或行業(yè)的產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)）；測定項(xiàng)目：應(yīng)寫明具體被測項(xiàng)目；當(dāng)被測項(xiàng)目為多項(xiàng)時(shí)，應(yīng)一一列出，超過8項(xiàng)時(shí)，可只寫出前3個(gè)項(xiàng)目。③編寫人及時(shí)間：為保證SOP內(nèi)容的全面性和準(zhǔn)確性，由實(shí)驗(yàn)室內(nèi)具有一定資質(zhì)的使用者編寫；④審核人及時(shí)間；⑤批準(zhǔn)人及時(shí)間：批準(zhǔn)人一般為實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)負(fù)責(zé)人；⑥文件編號(hào)：唯一編碼；⑦受控狀態(tài)：是否受控；⑧修訂號(hào)：第×××次修訂；⑨發(fā)放序號(hào)。（2）正文內(nèi)容一般包含下列內(nèi)容，必要時(shí)可增減相關(guān)條目：①目的；②范圍；③方法提要或原理:簡述所用方法的主要步驟及采用的基本原理；④程序提綱：包括培養(yǎng)基和血清、設(shè)備和玻璃器皿、取樣、測試樣品的制備、測試樣品和最初懸浮液、非選擇性前增菌、選擇性增菌、篩選、可疑典型菌落的分離和純化、生化鑒定、血清學(xué)確認(rèn)和血清型、確認(rèn)；⑤安全性；⑥質(zhì)量保證；⑦參考文獻(xiàn)；⑧特殊程序：與④對應(yīng)；⑨結(jié)果表達(dá)和測試報(bào)告；⑩附錄（資料性附錄和規(guī)范性附錄）。1/4/2023三、SOP的基本編寫格式下面結(jié)合一個(gè)實(shí)例，介紹一下編寫微生50SOP實(shí)例USDA：MDP-DATA-01MicrobiologicalDataandResultsReporting

EPA：QC-02-02Air-SurfaceMonitoringofMicrobiologyLaboratories山東CIQ：SOP沙門氏菌的檢測方法1/4/2023SOP實(shí)例USDA：MDP-DATA-01Microb51第五部分食品微生物檢驗(yàn)方法的驗(yàn)證和確認(rèn)

一個(gè)實(shí)驗(yàn)室擬用某一食品微生物檢驗(yàn)方法前，無論是標(biāo)準(zhǔn)方法還是非標(biāo)準(zhǔn)方法，皆應(yīng)對其進(jìn)行嚴(yán)格驗(yàn)證或確認(rèn)。詳見《食品微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理手冊》1/4/2023第五部分食品微生物檢驗(yàn)方法的驗(yàn)證和確認(rèn)一個(gè)52第一節(jié)驗(yàn)證和確認(rèn)導(dǎo)則

在《GB/T19000：2000質(zhì)量管理體系基礎(chǔ)和術(shù)語》中，驗(yàn)證被定義為“通過提供客觀證據(jù)對規(guī)定要求已得到滿足的認(rèn)定”，確認(rèn)被定義為“通過提供客觀證據(jù)對特定的預(yù)期用途或應(yīng)用要求已得到滿足的認(rèn)定”。在ISO/IEC17025中中,確認(rèn)被定義為“通過核查并提供客觀證據(jù)，以證實(shí)某一特定預(yù)期用途的特殊要求得到滿足”。從以上定義可以看出，驗(yàn)證要保證“做得正確”，而確認(rèn)則要保證“做的東西正確”。驗(yàn)證注重“過程”，確認(rèn)注重“結(jié)果”。

一、概念1/4/2023第一節(jié)驗(yàn)證和確認(rèn)導(dǎo)則在《GB/T19000：2053二、微生物檢驗(yàn)方法驗(yàn)證和確認(rèn)的依據(jù)

①美國官方分析化學(xué)家協(xié)會(huì)(AOAC)，執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)為：“AOACInternationalMethodsCommmitteeGuidelinesforValidationofQualitativeandQuantitativeFoodMicrobiologicalOfficialMethodsofAnlysis-2002”；②國際標(biāo)準(zhǔn)化組織(ISO)，執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)為：ISO/TR13843：2000《Waterquality--Guidanceonvalidationofmicrobiologicalmethods》和ISO16140:2003《Microbiologyoffoodandanimalfeedingstuffs--Protocolforthevalidationofalternativemethods》；③NordVal：NV-DOC.D–2005-01-01《Protocolforthevalidationofalternativemicrobiologicalmethods》；④新加坡認(rèn)可委員會(huì)(SAC)：C&BandENV002《MethodValidationofMicrobiologicalMethods》。此外，可參考GB/T18510-2001《煤和焦炭試驗(yàn)可替代方法確認(rèn)準(zhǔn)則》。1/4/2023二、微生物檢驗(yàn)方法驗(yàn)證和確認(rèn)的依據(jù)①美國官方分析化學(xué)家協(xié)54三、驗(yàn)證和確認(rèn)試驗(yàn)技術(shù)用于驗(yàn)證和確認(rèn)食品微生物檢驗(yàn)方法性能的試驗(yàn)技術(shù)包括：①使用參考菌株進(jìn)行核實(shí)；②與其他方法所得的結(jié)果進(jìn)行比較；③實(shí)驗(yàn)室間比對；④對影響結(jié)果的因素作系統(tǒng)性評審；⑤根據(jù)對方法的理論原理和實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)的科學(xué)理解，對所得結(jié)果不確定度進(jìn)行評定。以上驗(yàn)證和確認(rèn)食品微生物檢驗(yàn)方法性能的試驗(yàn)技術(shù)，可概略分為兩大類：實(shí)驗(yàn)室間驗(yàn)證/確認(rèn)試驗(yàn)（協(xié)作試驗(yàn)）和實(shí)驗(yàn)室內(nèi)驗(yàn)證/確認(rèn)試驗(yàn)（單一試驗(yàn)）。

實(shí)驗(yàn)室間驗(yàn)證/確認(rèn)試驗(yàn)是指在若干實(shí)驗(yàn)室內(nèi)由不同操作者進(jìn)行的驗(yàn)證/確認(rèn)試驗(yàn)，而實(shí)驗(yàn)室內(nèi)確認(rèn)試驗(yàn)是僅在特定的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行的驗(yàn)證/確認(rèn)試驗(yàn)。

1/4/2023三、驗(yàn)證和確認(rèn)試驗(yàn)技術(shù)用于驗(yàn)證和確認(rèn)食品微生物檢驗(yàn)方法性能的55四、對試驗(yàn)人員的要求驗(yàn)證和確認(rèn)食品微生物檢驗(yàn)方法的人員,必須符合以下要求：

A掌握方法中試樣處理的原理；

B掌握方法中食品成分對微生物的干擾以及微生物的增菌原理；C掌握方法中目標(biāo)微生物分離、純化、鑒定和確認(rèn)的原理；

D對儀器的構(gòu)造要有基本了解；E對儀器/試劑盒的工作原理有基本了解；

F能熟練使用儀器/試劑盒；G熟悉儀器/試劑盒的維護(hù)和性能確認(rèn)方法；

H熟悉方法所使用的試劑、材料和儀器/試劑盒；I熟練掌握分析步驟的每一個(gè)步驟；

J了解方法的關(guān)鍵所在；K能熟練進(jìn)行分析結(jié)果的計(jì)算；

L掌握方法能獨(dú)立進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，并判斷結(jié)果的準(zhǔn)確性。

1/4/2023四、對試驗(yàn)人員的要求驗(yàn)證和確認(rèn)食品微生物檢驗(yàn)方法的人員,必須56五、對協(xié)作實(shí)驗(yàn)室的要求

如果進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室間驗(yàn)證/確認(rèn)試驗(yàn)（協(xié)作試驗(yàn)），協(xié)作試驗(yàn)室必須符合以下要求：A按ISO/IEC17025認(rèn)可，并且進(jìn)行協(xié)作試驗(yàn)所需技術(shù)在實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可范圍之內(nèi)，必須提供一份實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可證書和認(rèn)可范圍；

B令人滿意地進(jìn)行實(shí)際樣品的分析。C有操作和處理分析物或相關(guān)混合物及適用對象的經(jīng)驗(yàn)；

D不能將試驗(yàn)轉(zhuǎn)包給其他實(shí)驗(yàn)室；E有獨(dú)立的質(zhì)量保證體系和程序文件，應(yīng)能提供一份組織結(jié)構(gòu)圖，應(yīng)能提供一份標(biāo)準(zhǔn)操作程序的提綱提要；

F擁有必需設(shè)備，并進(jìn)行了規(guī)范的維護(hù)和校準(zhǔn)，應(yīng)能提供相關(guān)記錄；G有培訓(xùn)和資格確認(rèn)記錄，應(yīng)能確保食品微生物檢驗(yàn)方法的驗(yàn)證和確認(rèn)人員符合前文要求；

H有內(nèi)部質(zhì)量控制和外部質(zhì)量評估措施，必須提供這些措施的記錄；I有適當(dāng)?shù)牧钊藵M意地記錄和保護(hù)數(shù)據(jù)的系統(tǒng)。1/4/2023五、對協(xié)作實(shí)驗(yàn)室的要求如果進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室間57第二節(jié)食品微生物檢驗(yàn)方法的驗(yàn)證

建議實(shí)驗(yàn)室在以下情況下對檢驗(yàn)方法進(jìn)行嚴(yán)格的驗(yàn)證：

1.擬用經(jīng)過完整確認(rèn)的標(biāo)準(zhǔn)方法以及經(jīng)過嚴(yán)格確認(rèn)的并被審批的非標(biāo)準(zhǔn)方法時(shí)；2.培養(yǎng)基供應(yīng)商、人員、設(shè)備、儀器/試劑盒等發(fā)生變動(dòng)時(shí)。

1/4/2023第二節(jié)食品微生物檢驗(yàn)方法的驗(yàn)證建議實(shí)驗(yàn)室在以58第三節(jié)食品微生物檢驗(yàn)方法的確認(rèn)

實(shí)驗(yàn)室必須對非標(biāo)準(zhǔn)方法、實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)（制定）的方法、超出其預(yù)定范圍使用的標(biāo)準(zhǔn)方法、擴(kuò)充和修改過的標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行嚴(yán)格的完整確認(rèn)，否則不可使用?？筛鶕?jù)AOAC官方食品微生物定量和定性檢驗(yàn)方法確認(rèn)指南-2002、ISO/TR13843-2000、ISO16140:2003、NV-DOC.D–2005-01-01或C&BandENV002的方案進(jìn)行確認(rèn)，其中AOAC官方食品微生物定量和定性檢驗(yàn)方法確認(rèn)指南-2002和ISO16140:2003最常用，這兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)大同小異。1/4/2023第三節(jié)食品微生物檢驗(yàn)方法的確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室必須對59方法之一AOACINTERNATIONALMicrobiologyGuidelines-2002：

AOACINTERNATIONALMETHODSCOMMITTEEGUIDELINESFORVALIDATIONOFQUALITATIVEANDQUANTITATIVEFOODMICROBIOLOGICALOFFICIALMETHODSOFANALYSIS

AOAC國際方法委員會(huì)-2002：關(guān)于官方食品微生物定性和定量分析方法確認(rèn)指南1/4/2023方法之一12/28/202260

方法之二

ISO16140:2003：Microbiologyoffoodandanimalfeedingstuffs--Protocolforthevalidationofalternativemethods食品和動(dòng)物飼料微生物學(xué)——備用方法確認(rèn)規(guī)范

ISO/TR13843：2000Waterquality--Guidanceonvalidationofmicrobiologicalmethods水質(zhì)——微生物方法的確認(rèn)指南1/4/202312/28/202261方法之三1/4/2023方法之三12/28/202262謝謝Thankyou1/4/2023謝謝Thankyou12/28/202263

準(zhǔn)確、可靠的檢驗(yàn)結(jié)果是正確評價(jià)和保證食品安全性的先決條件，也是國際貿(mào)易上公平交易的有力科學(xué)依據(jù)。在食品微生物檢驗(yàn)領(lǐng)域中，檢驗(yàn)規(guī)程規(guī)范化和分析方法標(biāo)準(zhǔn)化是檢驗(yàn)結(jié)果可信性的重要保證。避免“公說公有理，婆說婆有理”；避免“仁者見仁，智者見智”1/4/2023準(zhǔn)確、可靠的檢驗(yàn)結(jié)果是正確評價(jià)和保證食品安全性的先決64內(nèi)容第一部分國內(nèi)外食品微生物標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)體系第二部分微生物檢驗(yàn)快速檢測系統(tǒng)第三部分方法的選擇第四部分微生物檢驗(yàn)方法的編寫第五部分食品微生物檢驗(yàn)方法的驗(yàn)證和確認(rèn)1/4/2023內(nèi)容第一部分國內(nèi)外食品微生物標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)體系1265第一部分國內(nèi)外的食品微生物標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)體系一、術(shù)語和定義

1、標(biāo)準(zhǔn)方法：指國際、區(qū)域、國家發(fā)布的經(jīng)過嚴(yán)格確認(rèn)的以及公認(rèn)的方法。標(biāo)準(zhǔn)方法包括參考方法和公定方法。

（1）參考方法：指適用于特殊待驗(yàn)?zāi)繕?biāo)的經(jīng)過國際或國家公認(rèn)的檢驗(yàn)方法。對于食品微生物檢驗(yàn)而言，典型的傳統(tǒng)的參考方法是培養(yǎng)法。

（2）公定方法：指知名的技術(shù)組織或機(jī)構(gòu)（如AOAC）公布的檢測方法。

2、非標(biāo)準(zhǔn)方法：標(biāo)準(zhǔn)方法中未包含的需要確認(rèn)后才能采用的方法。

可替代方法：指用來檢驗(yàn)?zāi)骋惶囟óa(chǎn)品中某種目標(biāo)微生物的與相應(yīng)參考方法等效的方法（ISO16140:2003），如快速檢測試劑盒和自動(dòng)化系統(tǒng)。值得說明的是，并非所有的可替代方法都是標(biāo)準(zhǔn)方法。1/4/2023第一部分國內(nèi)外的食品微生物標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)體系一、術(shù)語和定義可66二、國內(nèi)外食品微生物檢測體系

國內(nèi)主要食品微生物檢測體系

國家標(biāo)準(zhǔn)(GB)

檢驗(yàn)檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)(SN)

衛(wèi)生行標(biāo)(WS)

農(nóng)業(yè)行標(biāo)(NY)國外主要食品微生物檢測體系

國際標(biāo)準(zhǔn)化組織(ISO)

美國食品藥品監(jiān)督局（FDA）(online)

美國官方分析化學(xué)師協(xié)會(huì)(AOAC)

美國農(nóng)業(yè)部（USDA）(online)

加拿大健康署(HPB)(online)

美國公共衛(wèi)生協(xié)會(huì)(APHA)

北歐食品分析委員會(huì)（NMKL）

法國標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(huì)(AFNOR)標(biāo)準(zhǔn)、英國國家標(biāo)準(zhǔn)(BS)、日本國家標(biāo)準(zhǔn)(JIS)、韓國國家標(biāo)準(zhǔn)（KS）等

標(biāo)準(zhǔn)方法非標(biāo)準(zhǔn)方法科學(xué)書籍和期刊公布的方法；實(shí)驗(yàn)室研發(fā)的未出版的方法；部分由設(shè)備制造商指定的方法；擴(kuò)充和修改過的標(biāo)準(zhǔn)方法；企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)；部分協(xié)會(huì)標(biāo)準(zhǔn)；部分地方標(biāo)準(zhǔn)等。食品微生物檢測方法標(biāo)準(zhǔn)方法未包含的方法

1/4/2023二、國內(nèi)外食品微生物檢測體系國內(nèi)主要食品微生物檢測體系67

食品中常規(guī)指示菌和致病菌的關(guān)系好氧菌總數(shù)腸桿菌科大腸菌群糞大腸菌群大腸桿菌沙門氏菌致瀉性大腸桿菌金黃色葡萄球菌糞鏈球菌弧菌科單增李斯特氏菌志賀氏菌芽孢桿菌O157厭氧梭菌彎曲菌1/4/2023食品中常規(guī)指示菌和致病菌的關(guān)系好氧菌總數(shù)腸桿菌科大腸68常規(guī)指示菌和致病菌的“危害分類”VeryfewmicrobesarealwayspathogenicManymicrobesarepotentiallypathogenicMostmicrobesareneverpathogenic如霍亂弧菌、O157、單核細(xì)胞增生李斯特氏菌等如腸球菌、蠟樣芽孢桿菌、白色念珠菌、枯草芽孢桿菌等如乳酸桿菌、雙歧桿菌等1/4/2023常規(guī)指示菌和致病菌的“危害分類”Veryfewmicro69食品微生物檢測方法方法定量方法定性方法直接計(jì)數(shù)方法細(xì)菌總數(shù)*、大腸菌群*、大腸桿菌*、腸球菌*、金黃色葡萄球菌*、蠟樣芽孢桿菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌、單核增生李斯特氏菌、沙門氏菌、彎曲菌屬、腸桿菌科*、副溶血性弧菌、亞硫酸鹽還原梭菌、李斯特氏菌屬、霉菌和酵母菌數(shù)*、嗜冷菌*、乳酸菌、雙歧桿菌等間接計(jì)數(shù)法(MPN法)大腸菌群*、糞大腸菌群*、大腸桿菌*、腸球菌*、金黃色葡萄球菌*、蠟樣芽孢桿菌、單核增生李斯特氏菌、腸桿菌科*、副溶血性弧菌、亞硫酸鹽還原梭菌等致病菌：單核細(xì)胞增生李斯特氏菌、沙門氏菌、空腸彎曲菌、O157、霍亂弧菌、副溶血性弧菌、溶藻弧菌、創(chuàng)傷弧菌、肉毒梭菌、小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌、產(chǎn)毒霉菌等

帶*者通常被列為食品衛(wèi)生指示菌1/4/2023食品微生物檢測方法方法定量方法定性方法直接計(jì)數(shù)方法間接計(jì)70傳統(tǒng)直接計(jì)數(shù)法平板傾注法平板涂布法1/4/2023傳統(tǒng)直接計(jì)數(shù)法平板傾注法平板涂布法12/28/2022711/4/202312/28/2022721/4/202312/28/202273MPN法適用于污染程度低，含有受到損傷的加工食品，目標(biāo)微生物數(shù)量低，否則，應(yīng)用直接計(jì)數(shù)方法間接計(jì)數(shù)法——最大可能數(shù)量（MPN）1/4/2023MPN法適用于污染程度低，含有受到損傷的加工食品，目標(biāo)微生物74三、區(qū)分幾個(gè)關(guān)系1、國家標(biāo)準(zhǔn)與行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的關(guān)系？

食品微生物檢驗(yàn)的國家標(biāo)準(zhǔn)是GB/T4789，其為基礎(chǔ)標(biāo)準(zhǔn)，行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)方法原則上應(yīng)與其一致，至少不能與國家標(biāo)準(zhǔn)相矛盾。進(jìn)口產(chǎn)品用GB???出口產(chǎn)品用SN??????

2、國家標(biāo)準(zhǔn)與國際標(biāo)準(zhǔn)的關(guān)系？

為了公平貿(mào)易，國家標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)與國際標(biāo)準(zhǔn)接軌。應(yīng)考慮優(yōu)先使用國際標(biāo)準(zhǔn)。現(xiàn)狀。實(shí)例：2004年USDA來青進(jìn)行等效性評估。3、[國內(nèi)]國家標(biāo)準(zhǔn)/行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)與[他國]國家標(biāo)準(zhǔn)/行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的使用？

根據(jù)ISO/IEC17025的規(guī)定，如果進(jìn)口國要求使用他國國家標(biāo)準(zhǔn)/行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，原則上要滿足客戶的要求，否則，需與客戶協(xié)商。即使國內(nèi)國家標(biāo)準(zhǔn)/行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)與他國國家標(biāo)準(zhǔn)/行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)等效或等同，也必須與客戶協(xié)商和溝通，只有做客戶統(tǒng)一的情況下方可使用。1/4/2023三、區(qū)分幾個(gè)關(guān)系1、國家標(biāo)準(zhǔn)與行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的關(guān)系？12/28/275第二部分微生物快速檢測系統(tǒng)1/4/2023第二部分微生物快速檢測系統(tǒng)12/28/202276第一節(jié)主要微生物檢驗(yàn)快速檢測系統(tǒng)

一、以免疫學(xué)為基礎(chǔ)的檢驗(yàn)法1/4/2023第一節(jié)主要微生物檢驗(yàn)快速檢測系統(tǒng)一、以免疫學(xué)為基礎(chǔ)的檢77免疫磁珠檢驗(yàn)法的優(yōu)點(diǎn):特異性好靈敏度高≤1CFU所捕獲的菌是活菌快速、操作步驟簡便可快速處理較大量樣品1/4/2023免疫磁珠檢驗(yàn)法的優(yōu)點(diǎn):12/28/2022781/4/202312/28/202279商業(yè)化免疫磁珠有：沙門氏菌O157:H7單核細(xì)胞增生李斯特氏菌VTECO145

VTECO111VTECO103VTECO26等等SN/T***-****進(jìn)出口食品中產(chǎn)志賀氏毒素大腸桿菌的檢驗(yàn)方法1/4/2023商業(yè)化免疫磁珠有：SN/T***-****進(jìn)出口食品中80

可篩選沙門氏菌、腸出血性大腸桿菌O157、李斯特氏菌、空腸彎曲菌、單核細(xì)胞增生李斯特氏菌、葡萄球菌腸毒素；可免疫濃縮沙門氏菌、免疫濃縮腸出血性大腸桿菌O157Mini-VIDAS自動(dòng)微生物篩選儀1/4/2023可篩選沙門氏菌、腸出血性大腸桿菌O15781二、以分子生物學(xué)為基礎(chǔ)的檢驗(yàn)法DIN10135：1999《沙門氏菌聚合酶連鎖反應(yīng)(PCR)檢驗(yàn)方法》、ISO/TS20863：2005《食品和動(dòng)物飼料微生物學(xué)—聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)檢測食源病原體—熱循環(huán)器的性能試驗(yàn)》、ISO/TS22174:2005《食品和動(dòng)物飼料微生物學(xué)—聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)檢測食源病原體—通用要求和定義》、ISO20837:2006《食品和動(dòng)物飼料微生物學(xué)—聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)檢測食源病原體—定性檢測用樣品的制備》、ISO/TS20838：2006《食品和動(dòng)物飼料微生物學(xué)—聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)檢測食源病原體—定性方法的擴(kuò)增和檢測條件》、HealthCanadaMFLP-72、USAFDABAM第9章和USAAPHA第40章規(guī)定可用PCR檢測食品中的致病弧菌（如霍亂弧菌、副溶血性弧菌、創(chuàng)傷弧菌等）、HealthCanada

MFLP-24和USAFDABAM第24章和USAAPHA第35章規(guī)定可用PCR檢測食品中產(chǎn)志賀氏毒素的致病大腸桿菌和霍亂弧菌。SN/T1632.2：2005《奶粉中阪崎腸桿菌檢驗(yàn)方法第2部分：PCR方法》SN/T1632.3：2005《奶粉中阪崎腸桿菌檢驗(yàn)方法第3部分：熒光PCR方法》PCR檢測食品中霍亂弧菌、副溶血性弧菌、金黃色葡萄球菌、單核細(xì)胞增生李斯特氏菌、產(chǎn)志賀氏毒素大腸桿菌等致病菌的SN均在報(bào)批中，即將發(fā)布。1/4/2023二、以分子生物學(xué)為基礎(chǔ)的檢驗(yàn)法DIN10135：1999《82PCR技術(shù)將是眾多食品微生物快速檢測中被認(rèn)可的一枝獨(dú)秀的快速檢測技術(shù)之一。

但須注意：如何減少培養(yǎng)基成分的干擾？死菌的干擾和風(fēng)險(xiǎn)？等等1/4/2023PCR技術(shù)將是眾多食品微生物快速檢測中被認(rèn)可83基因芯片-DNA點(diǎn)樣儀

基因芯片的基本技術(shù)路線1、采用數(shù)據(jù)庫中各種微生物的全基因組序列資料或部分基因組序列資料，通過生物信息學(xué)方法找出各種微生物的特異序列，每個(gè)檢測目標(biāo)找3-5個(gè)特異序列，每個(gè)序列長度為25-75mer。并設(shè)計(jì)五條陰性序列（這些序列不代表任何一個(gè)待分析的微生物）。2、合成上述特異序列（探針）。探針將不是傳統(tǒng)的cDNA形式，而是oligo寡聚核酸，這樣將大大提高檢測靈敏度。3、利用基因芯片點(diǎn)樣系統(tǒng)將探針點(diǎn)樣到載體上。同一種微生物的特異性探針點(diǎn)樣到芯片的一個(gè)區(qū)域。4、尋找適當(dāng)?shù)姆椒ǎ崛∥⑸锏幕蚪M核酸。5、加入相應(yīng)的引物、熒光染料或用分子信標(biāo)的方法，通過PCR擴(kuò)增特異性片段。6、將帶有熒光染料標(biāo)記的核酸與基因芯片雜交。7、雜交結(jié)果由基因芯片掃描儀進(jìn)行掃描判讀，對于管帽芯片也可用熒光顯微鏡進(jìn)行觀察。8、結(jié)果分析，針對雜交陽性位點(diǎn)，找出對應(yīng)的陽性樣品。

SN/T1543:2005食源性致病菌基因芯片鑒定方法1/4/2023基因芯片-DNA點(diǎn)樣儀84三、生化鑒定系統(tǒng)1/4/2023三、生化鑒定系統(tǒng)12/28/202285BDPHOENIX?全自動(dòng)微生物鑒定系統(tǒng)大腸桿菌（G-）沙門氏菌(G-)志賀氏菌(G-)彎曲桿菌(G-)弧菌(G-)小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌(G-)金黃葡萄球菌(G+)李斯特氏菌(G+)***產(chǎn)氣甲膜梭菌(G+)肉毒梭菌(G+)鏈球菌(G+)炭疽桿菌(G+)雙歧桿菌（G+）乳酸菌（G+）VITEK2COMPACT1/4/2023BDPHOENIX?大腸桿菌（G-）VITEK2COM86四、根據(jù)酶觸反應(yīng)及代謝產(chǎn)物快速檢測細(xì)菌1/4/2023四、根據(jù)酶觸反應(yīng)及代謝產(chǎn)物快速檢測細(xì)菌12/28/2022871/4/202312/28/2022881/4/202312/28/202289五、其他部分自動(dòng)化系統(tǒng)1/4/2023五、其他部分自動(dòng)化系統(tǒng)12/28/202290BIOLOG自動(dòng)微生物鑒定系統(tǒng)BIOLOGOmniLog&OmniLogPlusMicroLog1MicroLog2MicroLog3(MicroStation)OmniLogMicroLog1/4/2023BIOLOG自動(dòng)微生物鑒定系統(tǒng)BIOLOGOmniLog91第二節(jié)微生物快速檢測系統(tǒng)的局限性

大部分快速方法適用于檢測單一微生物，適用于質(zhì)量控制程序中快速篩選大量食品樣品中所存在的特殊病原體或毒素。然而，快速檢驗(yàn)方法所得陽性者，僅僅是可疑，必須用標(biāo)準(zhǔn)參考方法予以證實(shí)，雖然證實(shí)試驗(yàn)需要幾天，但不能予以限制。

快速檢驗(yàn)方法的評估結(jié)果表明，其對于某類食品的性能優(yōu)于其它食品，很大程度上是由于食品成分干擾所致，有些食品成分對于快速方法中所應(yīng)用的技術(shù)是比較麻煩的。例如，每一食品成分可能抑制DNA雜交或Taq聚合酶，但對抗原-抗體相互作用沒有影響，反之亦然。既然方法的靈敏度、特異性和精確性依賴于待驗(yàn)食品，那么進(jìn)行比較研究以確保某一特殊檢驗(yàn)方法能有效分析此類食品是明智的。1/4/2023第二節(jié)微生物快速檢測系統(tǒng)的局限性大部分快92

基于DNA檢驗(yàn)方法的特異性通過短的探針來顯示，因此用特殊探針或引物檢測毒素基因，陽性結(jié)果僅僅表明某細(xì)菌具有該基因序列，以及某細(xì)菌可能是產(chǎn)毒的，不能從客觀上說明該基因得以表達(dá)，并產(chǎn)生毒素，例如在梭菌和葡萄球菌中毒病例中，DNA雜交和PCR僅能檢測到基因的存在，但不能用來檢測預(yù)先形成的毒素是否存在。

隨著某一快速方法更加頻繁的使用，其好處和局限性同時(shí)變得更加明顯。使用者在選擇和徹底評估這些快速方法時(shí)，必須保持謹(jǐn)慎。1/4/2023基于DNA檢驗(yàn)方法的特異性通過短的探針來顯示93FDA認(rèn)可使用的檢測系統(tǒng)和試劑盒

檢測和鑒定食源性病原菌的微量生化復(fù)合試劑盒

微生物自動(dòng)鑒定系統(tǒng)

核酸雜交分析（分子生物學(xué)）方法

免疫學(xué)分析方法

其它商品化快速檢測方法和培養(yǎng)基第三節(jié)微生物快速檢測系統(tǒng)的認(rèn)可一、USDAFDA認(rèn)可情況1/4/2023FDA認(rèn)可使用的檢測系統(tǒng)和試劑盒檢測和鑒定食源性病原菌的941/4/202312/28/2022951/4/202312/28/2022961/4/202312/28/2022971/4/202312/28/2022981/4/202312/28/2022991/4/202312/28/2022100二、AOAC、NMKL、AFNOR、

NORDVAL、MICROVAL的認(rèn)可情況AOAC指南美國管理者(USregulators)ISO16140AOAC研究所NMKLNordValMicroValAOAC&OMA非美國管理者，如NATAAFNOR認(rèn)可微生物快速檢測系統(tǒng)的主要知名技術(shù)組織或機(jī)構(gòu)的相互關(guān)系認(rèn)可(agreement)逐步淘汰(phasingout)1/4/2023二、AOAC、NMKL、AFNOR、

NORDVAL、MIC101第三部分方法的選擇1．客戶要求；2．方法的準(zhǔn)確性；3．方法的特異性；4．方法的實(shí)用性；5．方法的穩(wěn)定性；6．方法的靈敏度；7．方法的檢測限和測量限；8．實(shí)驗(yàn)室硬件條件（儀器、設(shè)備、場地設(shè)施、人員資質(zhì)等）；9．商業(yè)快速檢測系統(tǒng)的供應(yīng)保證、價(jià)格、認(rèn)可程度和售后服務(wù)。1/4/2023第三部分方法的選擇1．客戶要求；12/28/2022102通常情況下，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)采用滿足客戶（注：對于企業(yè)實(shí)驗(yàn)室，其所在單位為其內(nèi)部客戶）需要并適用于所進(jìn)行的檢測的方法，包括在抽樣的方法。應(yīng)優(yōu)先使用以國際、區(qū)域或國家標(biāo)準(zhǔn)發(fā)布的方法。當(dāng)認(rèn)為客戶提出的方法不合適或已過期時(shí)，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)通知客戶。

當(dāng)客戶未指定所用方法時(shí)，除優(yōu)先使用國際、區(qū)域、國家或知名的技術(shù)組織發(fā)布的標(biāo)準(zhǔn)方法外，還可選擇非標(biāo)準(zhǔn)方法，但必須對所選擇的非標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行嚴(yán)格驗(yàn)證、確認(rèn)和審批，如能滿足實(shí)驗(yàn)室的預(yù)期用途，并經(jīng)客戶同意，也可使用。1/4/2023通常情況下，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)采用滿足客戶（注：對于企業(yè)103第四部分微生物檢驗(yàn)方法的編寫標(biāo)準(zhǔn)方法的一般構(gòu)成和編寫順序：1．資料性技術(shù)要素：封面、目次*、前言、引言；

2．規(guī)范性一般要素：名稱、范圍、規(guī)范性引用文件*；3．規(guī)范性技術(shù)要素：術(shù)語和定義*、符號(hào)和縮略語、食品微生物檢驗(yàn)(原理*、培養(yǎng)基和試劑、設(shè)備和材料、采樣*、制樣、增菌培養(yǎng)、篩選、鑒定和確認(rèn)等)、結(jié)果判定（判定方法和判定標(biāo)準(zhǔn)）、結(jié)果報(bào)告*、規(guī)范性附錄*；

4．資料性補(bǔ)充要素：資料性附錄*、參考文獻(xiàn)*、索引*。上述構(gòu)成要素不是任何一項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)都需要全部包括的，標(biāo)有*者可根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)化對象的特征和制定標(biāo)準(zhǔn)化的目的而取舍。第一節(jié)標(biāo)準(zhǔn)方法的編寫1/4/2023第四部分微生物檢驗(yàn)方法的編寫標(biāo)準(zhǔn)方法的一般構(gòu)成和編寫順序：1041/4/202312/28/20221051/4/202312/28/2022106第二節(jié)非標(biāo)準(zhǔn)方法的編寫

一般要求以接近國家標(biāo)準(zhǔn)（如GB/T1.1－2000）或行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)推薦方法的格式進(jìn)行編寫。等同、修改采用國際標(biāo)準(zhǔn)或國外先進(jìn)標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，其編寫格式和方法可與被采用的標(biāo)準(zhǔn)一致。力求標(biāo)準(zhǔn)結(jié)構(gòu)嚴(yán)謹(jǐn)、層次分明、主題突出，簡單易懂。

一、非標(biāo)準(zhǔn)方法的編寫原則

1/4/2023第二節(jié)非標(biāo)準(zhǔn)方法的編寫一般要求以接近國家標(biāo)107二、非標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)方法的基本編寫格式（1）封面每項(xiàng)非標(biāo)準(zhǔn)微生物檢驗(yàn)方法應(yīng)該有封面，封面的內(nèi)容有“×××（單位）×××（部門）非標(biāo)準(zhǔn)方法”字樣和非標(biāo)準(zhǔn)方法的標(biāo)志（注：選擇性的）、中文名稱、英文名稱（注：選擇性的）、非標(biāo)準(zhǔn)方法的唯一性編號(hào)、代替非標(biāo)準(zhǔn)編號(hào)（注：選擇性的）、發(fā)布日期、實(shí)施日期、標(biāo)準(zhǔn)的審批部門等（見附錄1示例2）。（2）正文內(nèi)容一般包含下列內(nèi)容，必要時(shí)可增減相關(guān)條目：①目的、范圍；②方法提要或原理:簡述所用方法的主要步驟及采用的基本原理；③設(shè)備和材料：標(biāo)明規(guī)格和型號(hào)；④培養(yǎng)基和試劑：必須符合GB/T4789.28和SN/T1583的規(guī)定；⑤檢驗(yàn)程序：畫出主要的檢驗(yàn)程序框圖；⑥操作步驟：包括試樣制備（含稀釋或按特定條件的制備）、培養(yǎng)（含前增菌培養(yǎng)和增菌培養(yǎng)，分離培養(yǎng)等，可根據(jù)需要取舍和分步描述）、初步鑒定（可根據(jù)需要取舍）、確證鑒定（含進(jìn)一步的生化反應(yīng)和血清學(xué)分型，可根據(jù)需要確定試驗(yàn)內(nèi)容）毒素試驗(yàn)（可根據(jù)需要取舍）、動(dòng)物試驗(yàn)（可根據(jù)需要取舍）；⑦結(jié)果報(bào)告；⑧其它（包括內(nèi)部質(zhì)量保證要點(diǎn)、生物防護(hù)要求；）；⑨附錄（資料性附錄和規(guī)范性附錄）⑩方法來源（如參考文獻(xiàn)、儀器設(shè)備方法等）。1/4/2023二、非標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)方法的基本編寫格式（1）封面12/108三、非標(biāo)準(zhǔn)方法的審批

制訂SOP，實(shí)施需要其它材料？進(jìn)一步規(guī)范方法實(shí)驗(yàn)室將全部材料送至主管部門實(shí)驗(yàn)室提供材料和信息審核全部材料被批準(zhǔn)和備案否實(shí)驗(yàn)室申請認(rèn)可，提交材料是是否需要采取后續(xù)措施（包括能力驗(yàn)證、實(shí)驗(yàn)室內(nèi)試驗(yàn)、實(shí)驗(yàn)室間協(xié)作試驗(yàn)等）？實(shí)驗(yàn)室編寫和確認(rèn)方法實(shí)驗(yàn)室采取所需的措施主管部門組織技術(shù)專家組進(jìn)行材料審查和技術(shù)審核（包括能力驗(yàn)證結(jié)果、性能特征、實(shí)驗(yàn)室內(nèi)試驗(yàn)結(jié)果、實(shí)驗(yàn)室間協(xié)作試驗(yàn)結(jié)果等），決定是否需要現(xiàn)場考查?，F(xiàn)場核查實(shí)驗(yàn)室調(diào)研現(xiàn)場核查？否專家組評估所采取措施是否充分合理？是否是是否

非標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)方法的審批程序1/4/2023三、非標(biāo)準(zhǔn)方法的審批制訂SOP，實(shí)施需要其它材料？進(jìn)一步規(guī)109第三節(jié)標(biāo)準(zhǔn)操作程序的編寫標(biāo)準(zhǔn)操作程序（standardoperationpractices，SOP）是用來指導(dǎo)某個(gè)具體過程、事物所形成的技術(shù)性細(xì)節(jié)描述的可操作性文件，國內(nèi)常常稱之為“作業(yè)指導(dǎo)書”，二者沒有本質(zhì)區(qū)別。SOPs的編寫及使用是實(shí)驗(yàn)室成功質(zhì)量體系中的一部分，因?yàn)樗転椴僮魅藛T提供正確完成一項(xiàng)工作的信息，從而保證不同操作人員都能在一定的不確定度范圍內(nèi)得到相同的微生物檢驗(yàn)結(jié)果。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)關(guān)注以下四個(gè)方面SOPs：1．方法類：包括食品微生物檢驗(yàn)方法中不詳細(xì)或不完善部分的補(bǔ)充，期間核查、方法確認(rèn)及比對等；2．設(shè)備類：重要或復(fù)雜設(shè)備的使用、操作規(guī)范（如設(shè)備制造商提供的技術(shù)說明書不夠明細(xì)等）；3．樣品類：取樣、制樣和樣品處置的“實(shí)施細(xì)則”等；4．?dāng)?shù)據(jù)類：定量檢測結(jié)果的表達(dá)、異常數(shù)據(jù)的剔除、測量結(jié)果不確定度的評定等等。SOP是技術(shù)性的文件，并不要求必須制訂。一、定義和分類1/4/2023第三節(jié)標(biāo)準(zhǔn)操作程序的編寫標(biāo)準(zhǔn)操作程序（standardo110二、食品微生物檢驗(yàn)SOP的編寫依據(jù)目前，在國內(nèi)，尚未檢索到關(guān)于食品微生物檢驗(yàn)SOP的編寫導(dǎo)則及相關(guān)要求；在國外，美國環(huán)境保護(hù)署(EPA)(/quality/sops.html)和美國農(nóng)業(yè)部銷售司(AMS)(/science/mpo/)均發(fā)布關(guān)于微生物檢驗(yàn)SOP的編寫導(dǎo)則及相關(guān)要求，前者是后者的藍(lán)本：①EPAQA/G-6《GuidanceforPreparingStandardOperatingProcedures(SOPs)》；②EPASOPADM-02-02《StandardOperatingProcedureforPreparationandReviewofStandardOperatingProcedures(SOPs)》；③USDAMDP-ADMIN-07《PreparationandMaintenanceofStandardOperatingProcedures(SOPs)》。以上文本均可從相應(yīng)網(wǎng)站免費(fèi)下載，同時(shí)EPA和USDAAMS制定了一系列與微生物檢驗(yàn)相關(guān)的SOPs，這些SOPs的編寫結(jié)構(gòu)和格式值得借鑒和參考。1/4/2023二、食品微生物檢驗(yàn)SOP的編寫依據(jù)目前，在國內(nèi)，尚未檢索到關(guān)111

SOP的格式方法一：參照美國農(nóng)業(yè)部農(nóng)業(yè)銷售司(AMS)的微生物數(shù)據(jù)程序/science/mpo/sops.htm

方法二：參照美國環(huán)境保護(hù)署（EPA）的EPAQUALITYSYSTEM

/quality/sops.html作業(yè)指導(dǎo)書與SOP無本質(zhì)區(qū)別1/4/2023SOP的格式作業(yè)指導(dǎo)書與SOP無本質(zhì)區(qū)別12/28/202112三、SOP的基本編寫格式

下面結(jié)合一個(gè)實(shí)例，介紹一下編寫微生物檢驗(yàn)SOP的基本格式和要求：（1）封面①編寫單位：中英文對照。②標(biāo)題：測定對象—測定項(xiàng)目—測定方法名稱(中英文對照)；測定對象：以產(chǎn)品為主，采用最常規(guī)的產(chǎn)品名稱（可參照國際、國家或行業(yè)的產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)）；測定項(xiàng)目：應(yīng)寫明具體被測項(xiàng)目；當(dāng)被測項(xiàng)目為多項(xiàng)時(shí)，應(yīng)一一列出，超過8項(xiàng)時(shí)，可只寫出前3個(gè)項(xiàng)目。③編寫人及時(shí)間：為保證SOP內(nèi)容的全面性和準(zhǔn)確性，由實(shí)驗(yàn)室內(nèi)具有一定資質(zhì)的使用者編寫；④審核人及時(shí)間；⑤批準(zhǔn)人及時(shí)間：批準(zhǔn)人一般為實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)負(fù)責(zé)人；⑥文件編號(hào)：唯一編碼；⑦受控狀態(tài)：是否受控；⑧修訂號(hào)：第×××次修訂；⑨發(fā)放序號(hào)。（2）正文內(nèi)容一般包含下列內(nèi)容，必要時(shí)可增減相關(guān)條目：①目的；②范圍；③方法提要或原理:簡述所用方法的主要步驟及采用的基本原理；④程序提綱：包括培養(yǎng)基和血清、設(shè)備和玻璃器皿、取樣、測試樣品的制備、測試樣品和最初懸浮液、非選擇性前增菌、選擇性增菌、篩選、可疑典型菌落的分離和純化、生化鑒定、血清學(xué)確認(rèn)和血清型、確認(rèn)；⑤安全性；⑥質(zhì)量保證；⑦參考文獻(xiàn)；⑧特殊程序：與④對應(yīng)；⑨結(jié)果表達(dá)和測試報(bào)告；⑩附錄（資料性附錄和規(guī)范性附錄）。1/4/2023三、SOP的基本編寫格式下面結(jié)合一個(gè)實(shí)例，介紹一下編寫微生113SOP實(shí)例USDA：MDP-DATA-01MicrobiologicalDataandResultsReporting

EPA：QC-02-02Air-SurfaceMonitoringofMicrobiologyLaboratories山東CIQ：SOP沙門氏菌的檢測方法1/4/2023SOP實(shí)例USDA：MDP-DATA-01Microb114第五部分食品微生物檢驗(yàn)方法的驗(yàn)證和確認(rèn)

一個(gè)實(shí)驗(yàn)室擬用某一食品微生物檢驗(yàn)方法前，無論是標(biāo)準(zhǔn)方法還是非標(biāo)準(zhǔn)方法，皆應(yīng)對其進(jìn)行嚴(yán)格驗(yàn)證或確認(rèn)。詳見《食品微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理手冊》1/4/2023第五部分食品微生物檢驗(yàn)方法的驗(yàn)證和確認(rèn)一個(gè)115第一節(jié)驗(yàn)證和確認(rèn)導(dǎo)則

在《GB/T19000：2000質(zhì)量管理體系基礎(chǔ)和術(shù)語》中，驗(yàn)證被定義為“通過提供客觀證據(jù)對規(guī)定要求已得到滿足的認(rèn)定”，確認(rèn)被定義為“通過提供客觀證據(jù)對特定的預(yù)期用途或應(yīng)用要求已得到滿足的認(rèn)定”。在ISO/IEC17025中中,確認(rèn)被定義為“通過核查并提供客觀證據(jù)，以證實(shí)某一特定預(yù)期用途的特殊要求得到滿足”。從以上定義可以看出，驗(yàn)證要保證“做得正確”，而確認(rèn)則要保證“做的東西正確”。驗(yàn)證注重“過程”，確認(rèn)注重“結(jié)果”。

一、概念1/4/2023第一節(jié)驗(yàn)證和確認(rèn)導(dǎo)則在《GB/T19000：20116二、微生物檢驗(yàn)方法驗(yàn)證和確認(rèn)的依據(jù)

①美國官方分析化學(xué)家協(xié)會(huì)(AOAC)，執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)為：“AOACInternationalMethodsCommmitteeGuidelinesforValidationofQualitativeandQuantitativeFoodMicrobiologicalOfficialMethodsofAnlysis-2002”；②國際標(biāo)準(zhǔn)化組織(ISO)，執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)為：ISO/TR13843：2000《Waterquality--Guidanceonvalidationofmicrobiologicalmethods》和ISO