免疫原與抗血清制備技術(shù)

免疫原和抗血清制備技術(shù)第一節(jié)免疫原的制備第二節(jié)免疫血清的制備第三節(jié)抗體的純化和鑒定第一節(jié)免疫原的制備一、細(xì)胞性抗原的制備二、可溶性抗原制備及鑒定三、半抗原免疫原的制備四、佐劑

綿羊紅細(xì)胞的制備流程圖搖動(dòng)15-20min

4℃可保存3周取適量NS洗滌3次2000r/min10minNS稀釋至2～5%

細(xì)菌細(xì)胞抗原的制備流程圖液體培養(yǎng)或斜面培養(yǎng)37℃24h100℃水浴2～2.5h殺菌無(wú)菌試驗(yàn)NS稀釋成8～10億/mlO菌體抗原返回來(lái)源:組織和細(xì)胞，其成分比較復(fù)雜。1.組織和細(xì)胞成分混合抗原制備2.蛋白質(zhì)抗原制備3.核酸抗原制備4.類(lèi)脂多糖抗原制備5.免疫球蛋白片段制備6.純化抗原的鑒定

二、可溶性抗原制備及鑒定可溶性抗原:蛋白質(zhì)、糖蛋白、脂蛋白、酶類(lèi)、補(bǔ)體、脂多糖、細(xì)菌外毒素和核酸二、可溶性抗原制備及鑒定返回

組織和細(xì)胞成分混合抗原制備程序上清液澄清所用材料必須是新鮮或低溫保存的去除包膜或結(jié)締組織臟器進(jìn)行灌洗洗去血跡及污物NS內(nèi)含0.5g／LNaN2冷浴中組織剪碎裝入搗碎機(jī)簡(jiǎn)內(nèi)高速粉碎制成組織勻漿液3000r／min×10min取上清液去除細(xì)胞碎片及微小組織離心

細(xì)胞破碎技術(shù)及評(píng)價(jià)1.酶處理法2.凍融法3.超聲破碎法4.表面活性劑處理細(xì)胞破碎技術(shù)及評(píng)價(jià)

常用酶類(lèi)：溶菌酶、纖維素酶、蝸牛酶等

1.酶處理法1.酶處理法方法：在一定的條件下，能消化細(xì)菌和組織細(xì)胞。

特點(diǎn)：①此法適用多種微生物；②具有作用條件溫和；③內(nèi)含物成分不易受到破壞；④細(xì)胞壁損壞的程度可以控制。

2.凍融法原理：因突然冷凍，細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成及胞內(nèi)外溶劑濃度的突然改變而破壞細(xì)胞。2.凍融法完方法：將待破碎的細(xì)胞置冰箱內(nèi)凍結(jié)，然后緩慢融化，如此反復(fù)兩次，大部分組織細(xì)胞及細(xì)胞內(nèi)的顆?？杀蝗谄?。特點(diǎn)：此法適用于組織細(xì)胞，對(duì)微生物細(xì)胞作用較差。

3.超聲破碎法原理：利用超聲波的機(jī)械振動(dòng)而使細(xì)胞破碎。由于超聲波發(fā)生空化作用（cavitation）使得液體形成局部減壓引起液體內(nèi)部發(fā)生流動(dòng)，漩渦生成與消失時(shí)，產(chǎn)生很大的壓力，使細(xì)胞破碎。超聲波使用的頻率從1kHz～20kHz不等，間歇進(jìn)行，避免長(zhǎng)期超聲產(chǎn)熱，導(dǎo)致抗原破壞。3.超聲破碎法特點(diǎn)：①操作簡(jiǎn)單，重復(fù)性較好，節(jié)省時(shí)間；②多用于微生物和組織細(xì)胞的破碎。4.表表面活活性劑劑處理理原理：：在適當(dāng)當(dāng)?shù)臏販囟?、、pH及低低離子子強(qiáng)度度的條條件下，，表面面活性性劑能能與脂脂蛋白白形成成微泡泡，使膜的的滲透透性改改變或或使之之溶解解。4.表表面活活性劑劑處理理常用的的有：：十二烷烷基硫硫酸鈉鈉(SDS,陰陰離子子型)、二乙胺胺十六六烷基基溴（（陽(yáng)離離子型型）、、聚山山梨酯酯（非離離子型型）、、新潔潔爾滅滅等。。應(yīng)用：：①破碎碎細(xì)菌菌，且且作用用比較較溫和和；②提取取核酸酸時(shí)，，常用用此法法破碎碎細(xì)胞胞。蛋白質(zhì)質(zhì)抗原原制備備蛋白質(zhì)質(zhì)是良良好的的抗原原，要要制備備特異異性高高的抗血血清通通常需需要純純化。。可采采用：：1.超超速離離心法法2.選選擇性性沉淀淀法3.凝凝膠層層析法法4.離離子交交換層層析法法5.親親合層層析法法蛋白質(zhì)質(zhì)抗原原制備備1．超超速離離心法法原理:利用各各顆粒粒在梯梯度液液中沉沉降速速度不不同，，使具有有不同同沉降降速度度的顆顆粒,處于于不同同密度度的梯度度層內(nèi)內(nèi)，達(dá)達(dá)到彼彼此分分離的的目的的。1．超超速離離心法法特點(diǎn)：：用超速速離心心或梯梯度密密度離離心法法純化化抗原，極極難將將某一一抗原原成分分分離離出來(lái)來(lái)。應(yīng)用：：用于少少部分分大分分子抗抗原和和一些些比較較輕的抗原原物質(zhì)質(zhì)的分分離，，如IgM、C1q、甲甲狀腺腺球蛋白、、載脂脂蛋白白A、、B等等。2、選選擇性性沉淀淀法原理：：根據(jù)各各蛋白白質(zhì)理理化特特性的的差異異，采采用各種沉沉淀劑劑或改改變某某些條條件促促使蛋蛋白質(zhì)質(zhì)抗原原成分沉沉淀，，從而而達(dá)到到純化化的目目的。。2、選選擇性性沉淀淀法常用方方法：：鹽析沉沉淀法法（不不同鹽鹽濃度度則溶溶解度不同同）；；常用用33～50％％飽和和度的的硫酸酸胺。。特點(diǎn)：：簡(jiǎn)單方方便，，純度度不高高，粗粗提球球蛋白白。應(yīng)用：：在大量量制備備中先先用此此法粗粗提，，再純純化。。3．凝凝膠層層析法法（凝凝膠過(guò)過(guò)濾法法）原理：：凝膠具具有三三維空空間多多孔網(wǎng)網(wǎng)狀結(jié)結(jié)構(gòu)的的物質(zhì)質(zhì)，經(jīng)適當(dāng)當(dāng)溶液液平衡衡后，，裝入入層析析柱。。當(dāng)含含有各各種分子大大小不不一的的混合合物加加在凝凝膠床床面時(shí)時(shí)，大大分子物質(zhì)質(zhì)不能能進(jìn)入入凝膠膠顆粒粒的網(wǎng)網(wǎng)孔結(jié)結(jié)構(gòu)內(nèi)內(nèi)，在在凝膠顆粒粒之間間的空空隙中中很快快地通通過(guò)凝凝膠床床，短短時(shí)間內(nèi)被被洗脫脫出來(lái)來(lái)；而而分子子較小小的物物質(zhì)則則進(jìn)入入凝膠網(wǎng)孔孔結(jié)構(gòu)構(gòu)內(nèi)，，反復(fù)復(fù)受到到阻滯滯，洗洗脫較較慢。。分成大、、中、、小三三種類(lèi)類(lèi)型。。3．凝凝膠層層析法法（凝凝膠過(guò)過(guò)濾法法）4．離離子交交換層層析法法原理：：利用帶帶離子子基團(tuán)團(tuán)的纖纖維素素或凝凝膠，，吸附附交換換帶相相反電電荷的的蛋白白質(zhì)抗抗原。。各種種蛋白白質(zhì)的的等電電點(diǎn)不不同，，所帶帶電荷荷不同同，與與纖維維素結(jié)結(jié)合的的能力力有差差別。。當(dāng)梯梯度洗洗脫時(shí)時(shí)，逐逐步增增加流流動(dòng)相相的離離子強(qiáng)強(qiáng)度，，使加加入的的離子子與蛋蛋白質(zhì)質(zhì)競(jìng)爭(zhēng)爭(zhēng)纖維維素上上的電電荷位位置置，從從而使使血清清中的的蛋白白質(zhì)分分成γγ球蛋蛋白、、α球球蛋白白、ββ球蛋蛋白和和清蛋蛋白等等幾個(gè)個(gè)部分分而被被洗脫脫下來(lái)來(lái)，達(dá)達(dá)到分分離純純化的的目的的。4．離離子交交換層層析法法5．親親和層層析法法（親親和色色譜））原理：：依據(jù)抗抗原抗抗體的的生物物學(xué)活活性進(jìn)進(jìn)行分分離和和提純純的技技術(shù)。。將純純化的的抗IgG附著于于惰性性的固固相基基質(zhì)上上，制制成免免疫吸吸附層層析柱柱。當(dāng)當(dāng)樣品品流過(guò)過(guò)此柱柱時(shí)，，待分分離的的IgG可選擇擇性地地與免免疫吸吸附劑劑上的的特異異性配配體(抗IgG)結(jié)合；；當(dāng)改改變洗洗脫條條件可可重新新解離離，將將待分分離的的Ig洗脫下下來(lái)，，達(dá)到到純化化的目目的。。優(yōu)點(diǎn)：：提取純純度高高、抗抗原抗抗體不不失活活性。。5．親親和層層析法法（親親和色色譜））正常細(xì)細(xì)胞＋標(biāo)記細(xì)細(xì)胞洗滴標(biāo)記細(xì)細(xì)胞被酶裂裂解加入特特異性抗體體其它蛋蛋白洗滌流流失SDS分離蛋蛋白親和層層析法法示意意圖核酸抗抗原制制備大分子子的核核酸具具有免免疫原原性。。提取核核酸的的主要要步驟驟：核酸酸抗抗原原制制備備破碎碎細(xì)細(xì)胞胞核酸酸從從細(xì)細(xì)胞胞中中游游離離出出來(lái)來(lái)酸沉沉淀淀核核除去去蛋蛋白白質(zhì)質(zhì)乙醇醇酚和和氯氯仿仿類(lèi)脂脂多多糖糖抗抗原原制制備備苯酚酚法法提提取取LPS：：干燥燥菌菌體體或或濕濕菌菌體體水中中混勻勻激烈烈攪攪勻勻加熱熱5min冰水水急冷冷降至至10℃℃以以下下離心心上層層的的水水層層(含含LPS)下層層的的酚酚層層菌體體殘殘?jiān)谟诘椎撞坎课∪∷畬訉油肝鑫龀臃蛹訜釤岢偎匐x離心心濃縮縮LPS在在上上層層沉沉淀淀的的透透明明膠膠狀狀部部?jī)?nèi)內(nèi)絞出出懸于于水水中中離心心得純純化化LPS類(lèi)脂脂多多糖糖抗抗原原制制備備同溫溫的的苯苯酚酚免疫疫球球蛋蛋白白片片段段制制備備1．．酶酶裂裂解解法法酶對(duì)對(duì)免免疫疫球球蛋蛋白白的的水水解解有有極極好好的專(zhuān)專(zhuān)一一性性，，不不同同的的酶酶可可將將免免疫疫球球蛋蛋白白裂裂解解為不不同同的的片片段段。。免疫疫球球蛋蛋白白片片段段制制備備2．．氧氧化化法法和和還還原原法法是將將免免疫疫球球蛋蛋白白輕輕、、重重鏈分分開(kāi)開(kāi)的的兩兩種種常常用用方方法法。。3.還可可用用強(qiáng)變變性性劑劑或利利用用改變變pH將免免疫疫球球蛋蛋白亞亞單單位位分分開(kāi)開(kāi)。。酶水水解解免免疫疫球球蛋蛋白白示示意意圖圖Fc段段，，用用以以制制備備抗抗重重鏈鏈血血清清F(ab’’)2，常常作作為為抗抗體體試試劑劑用用于于試試驗(yàn)驗(yàn)?zāi)竟瞎系暗鞍装酌该福╬apain)胰蛋蛋白白酶酶(pepsin)胃蛋蛋白白酶酶(pepsin)1.氧氧化化法法：：優(yōu)點(diǎn)點(diǎn)是是切切開(kāi)開(kāi)后后，，肽肽鏈鏈不不能能重重新新形成成二二硫硫鍵鍵、、便便于于肽肽鏈鏈純純化化；；缺點(diǎn)點(diǎn)是是色色氨氨酸酸側(cè)側(cè)鏈鏈容容易易被被破破壞壞。。氧化化法法和和還原原法法評(píng)評(píng)價(jià)價(jià)返回回2.還還原原法法：：將二二硫硫鍵鍵還還原原成成琉琉基基。。但但極極不不穩(wěn)定定，，易易重重新新形形成成二二硫硫鍵鍵，，必必須須及及時(shí)時(shí)用用碘乙乙酸酸或或碘碘化化酰酰胺胺進(jìn)進(jìn)行行羧羧甲甲基基化化。。純化化抗抗原原的的鑒鑒定定1.含含量量鑒鑒定定2.理理化化性性質(zhì)質(zhì)鑒鑒定定①凝凝膠膠層層析析技技術(shù)術(shù)測(cè)測(cè)定定②聚聚丙丙烯烯酰酰胺胺凝凝膠膠電電泳泳③凝凝膠膠管管狀狀電電泳泳④超超速速離離心心3.純純度度鑒鑒定定常用用醋醋酸酸纖纖維維膜膜電電泳泳4.免免疫疫活活性性鑒鑒定定常用用雙雙向向瓊瓊脂脂擴(kuò)擴(kuò)散散試試驗(yàn)驗(yàn)純化化抗抗原原的的鑒鑒定定藍(lán)色色1．．含含量量鑒鑒定定在一一定定范范圍圍內(nèi)內(nèi)，，顏顏色色深深淺淺與與蛋蛋白白質(zhì)質(zhì)濃濃度度呈呈直直線(xiàn)線(xiàn)相相關(guān)關(guān)。。方法法：：酚酚試試劑劑法法鑒鑒定定主要要試試劑劑：：磷磷鉬鉬酸酸-鎢鎢酸酸的的混混合合酸酸原理理：：蛋白白質(zhì)質(zhì)中中的的酪酪氨氨酸酸、、半半胱胱氨氨酸酸、、色色氨氨酸酸等等能能鎢酸酸、、鉬鉬酸酸還原原3H2OP205·13WO3·5MoO3·10H20和3H2P205·14WO3·4MoO3·10H20絡(luò)合合物物的的雙雙縮縮脲脲法法蛋白白質(zhì)質(zhì)＋＋Ca2+堿性性加深深含量量鑒鑒定定藍(lán)色色理化化性性質(zhì)質(zhì)鑒鑒定定已知知分分子子量量的的標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)品品測(cè)未未知知分分子子量量：：將樣樣品品在在同同一一凝凝膠膠柱柱上上，，同同一一條條件下下層層析析、、洗洗脫脫、、測(cè)測(cè)保保留留體體積積，，并并查查出出分分子子量量。。此法法簡(jiǎn)簡(jiǎn)便便、、樣樣品品用用量量少少，，有有一一定定的的實(shí)實(shí)用用價(jià)價(jià)值值。。凝膠膠柱柱保留留體體積積分子子量量的的對(duì)對(duì)數(shù)數(shù)2.理理化化性性質(zhì)質(zhì)鑒鑒定定繪制制標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)曲曲線(xiàn)線(xiàn)①凝凝膠膠層層析析技技術(shù)術(shù)進(jìn)進(jìn)行行測(cè)測(cè)定定垂直直電電泳泳聚合合成成大大分分子子凝凝膠膠②聚丙烯酰酰胺凝膠膠電泳（（PAGE）有分子篩篩效應(yīng)、、電荷效效應(yīng)及濃濃縮效應(yīng)應(yīng)，能精精確地分離離和鑒定定高分子子物質(zhì)。。PAG的的分子篩篩效應(yīng)測(cè)測(cè)定蛋白白質(zhì)抗原原的分子子量。原理：雙丙烯酰酰胺N,N-methylenebisacrylamide,Bis丙烯酰胺胺(acrylamide,Acr)催化劑3.純純度鑒定定方法：醋酸纖維維膜電泳泳進(jìn)行鑒鑒定。返回純度鑒定定原理：蛋白質(zhì)在在一定pH下都都帶有電電荷，由由于各種蛋白白質(zhì)等電電點(diǎn)不同同、分子子量也異異，因此此所帶電量量也各不不相同，，在外加加直流電電場(chǎng)的作作用下，它它們泳動(dòng)動(dòng)的速度度不同，，經(jīng)一段段時(shí)間后后即可彼此此分開(kāi)，，形成電電泳譜；；從而判判斷蛋白白質(zhì)抗原的的純度。。特點(diǎn)：快速簡(jiǎn)便便。三、半抗抗原免疫疫原的制制備1.半抗抗原：低分子量量的化學(xué)學(xué)物質(zhì)。。例如多多糖、多肽、甾甾族激素素、脂肪肪胺、類(lèi)類(lèi)脂質(zhì)、、核苷、、某些藥物物(包括括抗生素素）及其其他化學(xué)學(xué)物品等等。三、半抗抗原免疫疫原制備備2.載體體：蛋白質(zhì)類(lèi)類(lèi)多肽聚合合物大分子聚聚合物3.半抗抗原-載載體連接接方法:載體類(lèi)型型1.蛋白白質(zhì)：人血清白白蛋白、、牛血清白白蛋白、兔血清白蛋蛋白、牛牛甲狀腺腺球蛋白白等。載體類(lèi)型型2.多肽肽聚合物物：人工合成成的，常常見(jiàn)的有有多聚賴(lài)賴(lài)氨酸，其其分子量量大（可可達(dá)十幾幾萬(wàn)到幾幾十萬(wàn))，這種多聚聚物和半半抗原結(jié)結(jié)合后，，可刺激激免疫動(dòng)動(dòng)物產(chǎn)生高高效價(jià)、、高親和和力的抗抗體。3.大聚聚合物：：羧甲基纖纖維素、、聚乙烯烯吡咯烷烷酮等，可與與半抗原原結(jié)合，，加入弗弗氏完全全佐劑亦亦可誘發(fā)動(dòng)動(dòng)物產(chǎn)生生抗體。。半抗原-載體連連接方法法1碳化二亞亞胺法：：R-NH=CH-R’’半抗原＋＋載體蛋蛋白質(zhì)攪拌1～～2h室溫24h透吸除去去未反應(yīng)應(yīng)的半抗抗原人工免疫疫原半抗原載載體連接接方法1混合混合半抗原-載體連連接方法法2戊二醛法法:半抗原-NH2載體蛋白白-NH2半抗原-N=CH-(CH2)3-CH=NH-載載體蛋白白OHC-(CH2)3-CHO*戊二醛醛是常用用的帶有有兩個(gè)活活性基團(tuán)團(tuán)的雙功能聯(lián)接接劑半抗原載載體連接接方法2半抗原-載體連連接方法法3氯甲酸異異丁脂法法：半抗原-COOH載體蛋白白-NH2Cl-COO-CH2CH(CH3)2半抗原-COO-COO-CH2CH(CH3)2半抗原-CO-NH-載體蛋白白半抗原載載體連接接方法3簡(jiǎn)便，用用于類(lèi)固固醇抗原原制備HO-CH2CH(CH3)2＋半抗原-載體連連接方法法4琥珀酸酐酐法：用于不含含羧基衍衍生物半半抗原制制備半抗原原-CH2OHCH2-COCH2-CO帶羧基基的半半抗原原琥珀珀酸衍衍生物物半抗原原-CH2-OOC-CH2-CH2-COOH返回吡啶再經(jīng)氯氯甲酸酸異丁丁脂法法或碳碳化二亞胺胺法制制備載載體半半抗原原半抗原原載體體連接接方法法4四、佐佐劑*概概念：：與抗原原同時(shí)時(shí)或預(yù)預(yù)先注注射于于機(jī)體體，能能增加機(jī)體體免疫疫應(yīng)答答或改改變免免疫應(yīng)應(yīng)答類(lèi)類(lèi)型的的物質(zhì)質(zhì)。四、佐佐劑條件：：①增加加抗原原的表表面積積；②改變變抗原原的活活性基基團(tuán)構(gòu)構(gòu)型；；③佐劑劑與抗抗原混混合能能延長(zhǎng)長(zhǎng)抗原原在局局部組織的的存留留時(shí)間間；④可直直接或或間接接激活活免疫疫活性性細(xì)胞胞；⑤無(wú)毒毒性或或無(wú)副副作用用。（二））常用用佐劑劑的種種類(lèi)和和制備備1.氫氫氧化化鋁佐佐劑：：5%硫硫酸鋁鋁5%氫氫氧化化鈉氫氧化化鋁沉沉淀制成懸懸液即為佐佐劑強(qiáng)烈攪攪拌NS洗洗二次NS等體積積抗原原免疫接接種（二））常用用佐劑劑的種種類(lèi)和和制備備2.明明礬佐佐劑10%硫酸酸鉀鋁鋁氫氧化化鈉校校正pH值值至6.5沉淀乳狀懸懸液*明礬佐佐劑抗抗原常常用用用于肌肌肉注注射，，皮下下注射射易引起起肉芽芽種和和膿腫腫。NS攪攪拌NS洗洗二次離心抗原備用防腐劑劑作用大大于不不完全全佐劑劑局部形形成肉肉芽種種和潰潰瘍不能用用于人人體弗氏完完全佐佐劑3.弗弗氏佐佐劑(Freundadjuvant)液體石石蠟完全乳乳化備用＋高壓滅菌加熱抗原弗氏不不完全全佐劑劑卡介苗苗羊毛脂脂鑒定一滴乳劑乳劑不不散浮浮于液液面水中混合4.佐佐劑應(yīng)應(yīng)用原原則和和評(píng)價(jià)價(jià)目的:①增強(qiáng)強(qiáng)抗原原對(duì)機(jī)機(jī)體的的免疫疫原性性；②增強(qiáng)強(qiáng)抗體體的產(chǎn)產(chǎn)生能能力；；③為制制備出出高效效價(jià)的的免疫疫血清清；④增強(qiáng)強(qiáng)可溶溶性抗抗原的的免疫疫原性性；⑤在某某種情情況下下，改改變Ag免免疫應(yīng)應(yīng)答類(lèi)類(lèi)型；；⑥延長(zhǎng)長(zhǎng)抗原原在免免疫動(dòng)動(dòng)物的的時(shí)間間；⑦改變變抗原原的分分布；；⑧增強(qiáng)強(qiáng)局部部對(duì)變變應(yīng)原原的超超敏反反情況況；4.佐佐劑應(yīng)應(yīng)用原原則和和評(píng)價(jià)價(jià)應(yīng)用佐佐劑的的缺點(diǎn)點(diǎn)①佐劑常常混有有微量量其它它物質(zhì)質(zhì)，這這些物物質(zhì)進(jìn)進(jìn)入體內(nèi)內(nèi)后也也可引引起抗抗體的的產(chǎn)主主，影影響抗抗血清的的特異異性；；應(yīng)用佐佐劑的的缺點(diǎn)點(diǎn)②注射佐佐劑可可引起起局部部形成成肉芽芽腫和和無(wú)菌菌性膿腫腫；③反復(fù)注注射，，易發(fā)發(fā)生超超敏反反應(yīng)，，使局局部組組織壞死死，甚甚至引引起動(dòng)動(dòng)物死死亡。。第二節(jié)節(jié)免免疫疫血清清的制制備1.免免疫動(dòng)動(dòng)物選選擇2.免免疫方方法3.動(dòng)動(dòng)物采采血法法4.免免疫血血清的的分離離及保保存一、免免疫動(dòng)動(dòng)物選選擇能作免免疫接接種用用的動(dòng)動(dòng)物主主要是是哺乳乳類(lèi)和和禽類(lèi)類(lèi)。兔、綿綿羊、、豚鼠鼠、雞雞、山山羊和和馬。。一、免免疫動(dòng)動(dòng)物選選擇1.抗抗原與與免疫疫動(dòng)物物種屬屬差異異越遠(yuǎn)遠(yuǎn)越好好；2.動(dòng)動(dòng)物必必須適適齡、、健壯壯、無(wú)無(wú)感染染的正正常動(dòng)動(dòng)物、、體重合合乎要要求；；3.不不同動(dòng)動(dòng)物種種類(lèi)對(duì)對(duì)同一一免疫疫原有有不同同的免免疫應(yīng)答；；4.按按需要要量選選擇大大小不不同的的動(dòng)物物。二、免免疫方方法3.免免疫方方案①全量量免疫疫法：：弗氏氏佐劑劑抗原原多次次注射射②微量量免疫疫法：：卡介介苗7天弗氏佐佐劑1月抗原③混合合免疫疫法：：綜合合皮下下、淋淋巴結(jié)結(jié)和靜靜脈二、免免疫方方法1.免免疫原原的注注射劑劑量2.免免疫途途徑：：免疫疫反應(yīng)應(yīng)產(chǎn)生生速度度依次次為靜靜脈＞＞腹腔＞＞肌肉肉＞皮皮下＞＞皮內(nèi)內(nèi)＞淋淋巴結(jié)結(jié)＞足足掌三、動(dòng)動(dòng)物采采血法法1.頸頸動(dòng)脈脈放血血法：：最常常用的的方法法2.心心臟采采血法法：要要求操操作熟熟練3.靜靜脈采采血法法：1.4℃保保存：：可保保存3～6個(gè)月月2.低低溫保保存：：-20～～-40℃℃，可可保存存2～～3年年3.冰冰凍干干燥保保存：：可保保存3～5年三、動(dòng)動(dòng)物采采血法法四、免免疫血血清的的分離離和保保存第三節(jié)節(jié)抗抗體體的純純化和和鑒定定1.抗抗體特特異性性的純純化2.特特異性性IgG類(lèi)類(lèi)抗體體的純純化3.特特異性性抗體體的鑒鑒定一、抗抗體特特異性性的純純化1.親親合層層析法法：將交叉叉抗原原交聯(lián)聯(lián)到Sepharose4B上上，裝裝柱后后，將將預(yù)吸吸收的的抗體體通過(guò)過(guò)親合合層析柱，，雜抗抗體吸吸附在在柱上上，流流出液液則是是特異異性抗體體。一、抗抗體特特異性性的純純化2.吸吸附法法：利用不不含特特異性性抗原原的抗抗原液液，直直接加到到免疫疫血清清中，，抗原原則與與抗體體結(jié)合合，上上清液則則為無(wú)無(wú)雜抗抗體的的單價(jià)價(jià)特異異性抗抗體。。二、特特異性性IgG類(lèi)類(lèi)抗體體的純純化1.鹽鹽吸沉沉淀法法：經(jīng)硫酸酸銨鹽鹽吸提提取γγ球蛋蛋白3次，，基本本為IgG類(lèi)抗抗體，，但不不純。。二、特特異性性IgG類(lèi)類(lèi)抗體體的純純化2.A蛋白白親和和層析析：SPA與IgG的Fc段段有很很強(qiáng)的的特異性性的親親和力力，細(xì)細(xì)菌表表面不不同位位點(diǎn)獨(dú)獨(dú)立地地與抗體體結(jié)合合，一一個(gè)A蛋白白至少少可以以結(jié)合合二個(gè)個(gè)IgG分子子。適適合純純化細(xì)細(xì)胞培培養(yǎng)上上清中中的McAb。。3.其其它：：凝膠過(guò)過(guò)濾、、離子子交換換層析析等三、特特異性性抗體體的鑒鑒定1.抗抗體效效價(jià)的的鑒定定：即為抗抗體活活性滴滴定三、特特異性性抗體體的鑒鑒定2.抗抗體特特異性性鑒定定：①細(xì)菌菌類(lèi)抗抗原的的抗體體用凝凝集試試驗(yàn)②可溶溶性抗抗原的的抗體體用雙雙向瓊瓊脂擴(kuò)擴(kuò)散試試驗(yàn)3.抗抗體的的純度度鑒定定：免疫電電泳分分析法法4.抗抗體親親和力力鑒定定：親和力力高則則靈敏敏度好好第四節(jié)節(jié)單單克克隆抗抗體技技術(shù)單克隆隆抗體體：由B細(xì)細(xì)胞雜雜交瘤瘤產(chǎn)生生的只只識(shí)別別抗原原分子上上一種種抗原原決定定簇的的抗體體分子子。多克隆隆抗體體：識(shí)別抗抗原分分子上上各種種抗原原決定定簇的多種種抗體體的混混合制制劑。。一、雜雜交瘤瘤技術(shù)術(shù)的原原理及及流程程二、單單克隆隆抗體體的應(yīng)應(yīng)用返回一、雜交瘤瘤技術(shù)術(shù)的原原理及及流程程二、單單克隆隆抗體體的應(yīng)應(yīng)用1.醫(yī)醫(yī)學(xué)檢檢驗(yàn)試試劑：：①傳染染病的的快速速診斷斷②尋找找TSA及及檢測(cè)測(cè)TAA③免疫疫細(xì)胞胞抗原原檢測(cè)測(cè)④激素素測(cè)定定⑤血中中藥物物濃度度監(jiān)測(cè)測(cè)⑥HLA分分型監(jiān)監(jiān)測(cè)二、單單克隆隆抗體體的應(yīng)應(yīng)用2.導(dǎo)導(dǎo)向治治療作作用3.抗抗原物物質(zhì)的的分離離和提提純9、靜夜四無(wú)無(wú)鄰，荒居居舊業(yè)貧。。。12月-2212月-22Thursday,December29,202210、雨雨中中黃黃葉葉樹(shù)樹(shù)，，燈燈下下白白頭頭人人。。。。03:52:3503:52:3503:5212/29/20223:52:35AM11、以我獨(dú)沈沈久，愧君君相見(jiàn)頻。。。12月-2203:52:3503:52Dec-2229-Dec-2212、故人人江海海別，，幾度度隔山山川。。。03:52:3503:52:3503:52Thursday,December29,202213、乍見(jiàn)翻翻疑夢(mèng)，，相悲各各問(wèn)年。。。12月-2212月-2203:52:3503:52:35December29,202214、他鄉(xiāng)生白白發(fā)，舊國(guó)國(guó)見(jiàn)青山。。。29十二二月20223:52:35上上午03:52:3512月-2215、比不不了得得就不不比，，得不不到的的就不不要。。。。十二月月223:52上上午午12月月-2203:52December29,202216、行行動(dòng)動(dòng)出出成成果果，，工工作作出出財(cái)財(cái)富富。。。。2022/12/293:52:3503:52:3529December202217、做前前，能能夠環(huán)環(huán)視四四周；；做時(shí)時(shí)，你你只能能或者者最好好沿著著以腳腳為起起點(diǎn)的的射線(xiàn)線(xiàn)向前前。。。3:52:35上上午3:52上上午午03:52:3512月月-229、沒(méi)有有失敗敗，只只有暫暫時(shí)停停止成成功?。?。12月月-2212月月-22Thursday,December29,202210、很多事事情努力力了未必必有結(jié)果果，但是是不努力力卻什么么改變也也沒(méi)有。。。03:52:3503:52:3503:5212/29/20223:52:35AM11、成功就是是日復(fù)一日日那一點(diǎn)點(diǎn)點(diǎn)小小努力力的積累。。。12月-2203:52:3503:52Dec-2229-Dec-2212、世世間間成成事事，，不不求求其其絕絕對(duì)對(duì)圓圓滿(mǎn)滿(mǎn)，，留