4種檢測方法對兒童血液標(biāo)本的梅毒抗體檢測研究,醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)論文

4種檢測方法對兒童血液標(biāo)本的梅毒抗體檢測研究,醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)論文兒童梅毒主要是由于在宮內(nèi)感染引起的先天性梅毒，少數(shù)可通過哺乳、輸血等接觸而傳染。梅毒螺旋體易通過胎盤感染胎兒，導(dǎo)致先天性梅毒，對胎兒及新生兒造成不良影響，小兒梅毒嚴(yán)重影響小兒的身心健康與發(fā)育，是一種嚴(yán)重影響嬰幼兒身心健康的疾病。近年來,梅毒感染率逐步增加，其防治現(xiàn)已成為特別重要的社會和醫(yī)學(xué)問題。梅毒發(fā)病率不斷增加，新生兒先天梅毒的發(fā)病率也隨之增加。小兒梅毒診斷主要從流行病學(xué)資料、臨床表現(xiàn)、實(shí)驗(yàn)室檢查等幾方面進(jìn)行。診斷梅毒要有豐富的臨床經(jīng)歷體驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)室檢測是臨床診斷的主要根據(jù)也是監(jiān)測和防止醫(yī)院感染的重要手段。假如由于臨床醫(yī)生不理解梅毒化驗(yàn)結(jié)果過分夸張梅毒感染的病情，可能造成新生兒家長對新生兒治療的放棄，這些都可能帶來醫(yī)療糾紛，也嚴(yán)重?fù)p害兒童健康。為了提高實(shí)驗(yàn)人員和臨床醫(yī)生的對兒童梅毒的實(shí)驗(yàn)診斷的充分正確認(rèn)識，進(jìn)而探尋求索出經(jīng)濟(jì)的、合理的兒童梅毒實(shí)驗(yàn)診斷方式方法及評估最合理的小兒梅毒實(shí)驗(yàn)報(bào)告，為臨床和患者家長提供充分全面的小兒梅毒實(shí)驗(yàn)診斷信息及科學(xué)、正確、合理有效的溝通技巧進(jìn)而避免誤會做出奉獻(xiàn)，特對近兩年徐州市兒童醫(yī)院〔下面簡稱我院〕的141例疑似梅毒兒童的檢測診斷數(shù)據(jù)進(jìn)行分析研究。

1、資料與方式方法

1.1一般資料

所有臨床資料均為2018年4月～2020年12月在我院門診及住院的0～3歲141例患兒，嬰兒組〔0～1歲〕119例和幼兒組〔1～3歲〕22例。門診就診23例、住院118例。經(jīng)病史、臨床診斷及血清學(xué)檢驗(yàn)均為陽性確診梅毒感染55例，梅毒的血清學(xué)實(shí)驗(yàn)診斷至少1種方式方法陽性，但后來經(jīng)復(fù)查及隨訪檢驗(yàn)排除梅毒感染86例。先天性梅毒52例，后天性梅毒3例。

1.2方式方法

所有血液標(biāo)本嚴(yán)格根據(jù)試劑盒講明書進(jìn)行梅毒抗體檢測和結(jié)果判定，并在試劑盒有效期內(nèi)使用。分別進(jìn)行了如下實(shí)驗(yàn)：快速血漿反響素實(shí)驗(yàn)〔RPR〕、膠體金實(shí)驗(yàn)〔SYP〕、酶聯(lián)免疫梅毒抗體檢測〔ELISA〕、凝集法實(shí)驗(yàn)〔TPPA〕。

1.3儀器和試劑

酶標(biāo)儀：安圖2018酶標(biāo)儀。金標(biāo)法試劑：廈門英科新創(chuàng)生物試劑公司。酶聯(lián)免疫梅毒抗體試劑：北京萬泰生物試劑公司。凝集法試劑：日本富士公司產(chǎn)品。快速反響素試劑：上?？迫A生物試劑公司。所有試劑均在有效期內(nèi)使用。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方式方法

采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS13.0對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料以率表示，陽性率的比擬采用多個獨(dú)立樣本非參數(shù)檢驗(yàn)和兩獨(dú)立樣本非參數(shù)檢驗(yàn)。以P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2、結(jié)果

2.14種實(shí)驗(yàn)方式方法對141例疑似梅毒患者檢測結(jié)果用4種檢測方式方法對梅毒疑似兒童血液進(jìn)行梅毒檢測，經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析，4種方式方法差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義〔2=105.80，P=0.000〕；ELISA陽性率〔96.45%〕最高，RPR陽性率〔RPR〕最低〔46.10%〕；SYP和TPPA法陽性率高于RPR，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義〔2=53.36，P=0.000〕；SYP和TPPA法陽性率低于ELISA陽性率，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義〔2=61.76，P=0.000〕。見表1。

2.24種實(shí)驗(yàn)方式方法對55例確診梅毒患者檢測結(jié)果RPR方式方法在確診梅毒的兒童診斷中陽性率低于其他3種方式方法，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義〔2=22.82，P=0.000〕；SYP方式方法低于ELISA和TPPA，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義〔2=4.96，P=0.850〕；ELISA法和TPPA比擬，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義〔2=0.343，P=0.558〕。見表2。

2.34種檢測方式方法在86例假陽性病例中的檢測結(jié)果在86例假陽性中：ELISA有78例，假陽性最高，TPPA無假陽性。新生兒的假陽性明顯高于幼兒組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義〔2=78.22，P=0.000〕。見表3。

3、討論

ELISA檢測為雙抗原夾心法，利用基因重組工程合成抗原，為TP的特異性試驗(yàn)，檢測的是梅毒總抗體，對梅毒有較高的特異性和敏感性，且抗TP抗體即便經(jīng)過抗梅毒治療后，仍持續(xù)存在，甚至終生存在。新生兒可能攜帶母體的抗體即便新生兒沒有感染梅毒可以能是陽性，所以ELISA方式方法比其他方式方法陽性率高。劉保林在ELISA與RPR法檢測梅毒抗體結(jié)果分析中，得出ELISA法特異性和敏感性都較高。該方式方法操作簡單，是應(yīng)用酶標(biāo)儀進(jìn)行結(jié)果判定，原始資料也容易保存，是一種較好的、合適大批標(biāo)本篩查梅毒的理想方式方法，值得在臨床上積極推廣應(yīng)用。固然ELISA方式方法特異性高，但是在新生兒梅毒檢測中，ELISA方式方法經(jīng)常會碰到假陽性。由于新生兒血液較難抽出，經(jīng)常會碰到溶血標(biāo)本。ELISA方式方法所使用的底物顯色容易遭到溶血影響，導(dǎo)致太多ELISA方式方法檢測陽性標(biāo)本，因而ELISA方式方法能夠用作兒童梅毒篩查檢測但不能用作確診。在86例假陽性中有78例ELISA陽性，所以在141例疑似梅毒檢測中ELISA方式方法陽性率最高，后經(jīng)過重新抽血復(fù)查由于溶血引起的有71例，因而當(dāng)碰到溶血標(biāo)本要十分注意假陽性的可能。141例疑似病例檢測結(jié)果顯示RPR陽性率較低〔46.10%〕，RPR方式方法在141例疑似梅毒檢測中陽性率最低，可能由于RPR試驗(yàn)檢查的是人體內(nèi)的反響素，它是人體感染TP后組織遭到毀壞裂解出來的一種類脂成分，這種成分與TP的蛋白質(zhì)結(jié)合成為抗原，刺激機(jī)體產(chǎn)生抗類脂質(zhì)抗體即反響素，這種體內(nèi)反響素陽性的前提是感染了梅毒并且有一定的經(jīng)過或者從母體攜帶這種反響素或者有類似抗類脂抗體才能檢測陽性，TP毀壞組織可使機(jī)體產(chǎn)生反響素，而其他毀壞機(jī)體的經(jīng)過可以產(chǎn)生反響素，梅毒患者RPR試驗(yàn)陽性，但RPR陽性者并不一定感染TP。如妊娠、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、慢性腎炎、風(fēng)疹、水痘等，RPR同樣可能呈陽性，在5例RPR假陽性中，后來調(diào)查證實(shí)都是免疫性疾病引起的假陽性，因而不能單獨(dú)根據(jù)RPR陽性診斷梅毒，應(yīng)對結(jié)果加以綜合分析。所以RPR方式方法不能用作兒童梅毒篩查，只能用作療效觀察。并且55例確診病例檢測中RPR陽性率72.73%都低于其他方式方法，在確診病例檢測也較低，可能是在檢測前部分兒童已經(jīng)得到治療，導(dǎo)致了RPR陰轉(zhuǎn)，進(jìn)而證實(shí)了不宜用RPR方式方法作為兒童梅毒檢測篩查方式方法。TPPA是將特異性TP抗原包被在明膠顆粒上，與血清中的特異性抗體結(jié)合后出現(xiàn)肉眼可見的凝集反響的檢測方式方法，屬于TP抗原血清試驗(yàn)，有著很高的敏感度和特異性，一般用作確認(rèn)試驗(yàn)。從該檢測分析中能夠看出55例確診梅毒陽性率100.00%，而假陰性的標(biāo)本陰性率100%，因而能夠用作梅毒確診實(shí)驗(yàn)。但試劑較貴、檢測時需手工完成，實(shí)驗(yàn)耗時長，結(jié)果判定難以自動化，不利于大批量標(biāo)本檢測，主要用于其他方式方法篩檢后的陽性標(biāo)本確實(shí)認(rèn)。從以上結(jié)果分析能夠看出金標(biāo)法有較高的靈敏性和特異性。金標(biāo)法采用純化重組基因的梅毒抗原，以SYP作為指示標(biāo)記，于硝酸纖維素膜上進(jìn)行反響，以雙抗原夾心法原理快速定性檢測血清中的TP特異性抗體。此法操作快速簡便，可分批或單人檢測，結(jié)果容易觀察和保存，且用血量少，價格低廉，不需任何儀器，對基層醫(yī)療機(jī)構(gòu)很實(shí)用，尤其是急診檢查。經(jīng)過以上討論顯示，以上4種試驗(yàn)方式方法各有其特點(diǎn)。在判定兒童能否已感染梅毒時，特異性試驗(yàn)提供了較為特異的試驗(yàn)根據(jù)，必要時可聯(lián)合兩類試驗(yàn)，并動態(tài)監(jiān)測抗體的動態(tài)變化，以免漏診或誤診。檢驗(yàn)工作者在對梅毒檢測診斷時應(yīng)結(jié)合臨床進(jìn)行綜合分析，根據(jù)實(shí)際情況進(jìn)行選擇并優(yōu)化組合上述檢測方式方法。

先天性梅毒患兒出生時66%無臨床異常感覺和狀態(tài)，多在出生后4～8周出現(xiàn)異常感覺和狀態(tài)，梅毒血清學(xué)試驗(yàn)是先天性梅毒診斷的重要根據(jù)，在平常工作中可能先用ELISA方式方法檢測篩查，出現(xiàn)陽性要用TPPA方式方法確診，高度懷疑梅毒者要3個月后隨訪復(fù)查。因而在臨床診斷中不能僅憑新生兒血清學(xué)檢測是陰性就斷定沒有感染。由于標(biāo)本的原因新生兒的檢測經(jīng)常有假陽性，因而復(fù)查對新生兒的感染的判定非常重要。在141例疑似梅毒中，至少有1種血清學(xué)實(shí)驗(yàn)陽性，經(jīng)過隨訪復(fù)查排除86例梅毒感染，本研究分析證實(shí)了兒童梅毒血清學(xué)檢測結(jié)果是診斷梅毒的重要根據(jù)，但并非是唯一的。

診斷梅毒時，梅毒血清學(xué)檢測不能取代具體的病史詢問和認(rèn)真的體格檢查。只要在具體的病史和體格檢查的基礎(chǔ)上，綜合分析梅毒檢測結(jié)果，醫(yī)生才能作出正確的診斷。因而，患兒在看病時，千萬不要由于一些原因此隱瞞兒童父母的性生活史，進(jìn)而影響醫(yī)生的診斷，貽誤治療機(jī)會，導(dǎo)致嚴(yán)重后果的發(fā)生。血清學(xué)試驗(yàn)用作先天性梅毒的輔助診斷，其首要問題是將無異常感覺和狀態(tài)感染嬰兒從非感染嬰兒區(qū)別開來，這些嬰兒的母親梅毒血清試驗(yàn)陽性，困難在于不能將母親體液免疫反響同嬰兒的抗體反響相區(qū)別，由于母親血清學(xué)診斷經(jīng)常又存在著假陽性。梅毒的診斷應(yīng)特別認(rèn)真仔細(xì)、由于它和很多其他疾