實驗報告-質(zhì)粒提取及檢測

：同實驗者：唐妍 2017年4月10題目：質(zhì)粒DNA的提取及檢一、實驗?zāi)緿NA二、實驗原質(zhì)粒一種外的穩(wěn)定遺傳因子，大小從1-200kb不等，為雙鏈、閉環(huán)的DNA分子，載體要把一個有用的外源通過工程，轉(zhuǎn)化到細(xì)胞中去進(jìn)行繁殖和表達(dá)，的質(zhì)粒、λ噬菌體、M13噬菌體、噬菌粒外，還有酵母人工載體以及動、植物病分離質(zhì)粒DNA堿裂解溶液Ⅰ：50mmol/L，10mmol/EDTA-Na，25mmol/LTris-HClDNA溶液Ⅱ：0.4mol/LNaOH，2%SDS，1：1作用：細(xì)胞在NaOH和SDS溶液中裂解時，蛋白質(zhì)與DNA發(fā)生變1 ：同實驗者：唐妍 2017年4月10題目：質(zhì)粒DNA的提取及檢溶液Ⅲ：5mol/L60ml，11.5ml，電帶電荷的物質(zhì)，在電場中的趨向運動稱為電泳。DNA200bp50kbDNADNA（U（TDNA度是非常重要的。提取質(zhì)DNADNA閉環(huán)超螺旋DNA。當(dāng)提取的質(zhì)粒DNA電泳時,同一質(zhì)粒DNA泳動速度：閉環(huán)超螺旋〉線核酸含量有關(guān)。三、實驗材儀恒溫?fù)u床，高壓滅菌鍋，超凈工作臺，、 材2 ：同實驗者：唐妍 2017年4月10題目：質(zhì)粒DNA的提取及檢試LB（Tryptone）10g，酵母提取物（Yeast瓊脂（固體培養(yǎng)基）15g，1NNaOHpH7.5;氨芐青霉素抽提液（飽和酚：氯仿：異戊醇無水乙 作用：除去DNA水化層，使DNA沉淀 作用：純化質(zhì)粒DNA。g.TE緩沖液或ddH2O DNAGoldview（DNA1×TAE上樣緩沖液四、方法和質(zhì)粒DNA的提370C1.5mLEppendorf，10000rpm×2min，100μLI，10200μL2~35150μL3-53 ：同實驗者：唐妍 2017年4月10題目：質(zhì)粒DNA的提取及檢15（6）10000rpm×5min，混勻，10000rpm×10min，將上清液轉(zhuǎn)移至新的離心管中；加入等體積（370μL）氯仿/異戊醇（24:1），混勻，10000rpm2min2200C（10）12000rpm×5min，800μL70%12000rpm1min，倒盡上清液，吸水紙吸干液體，30min，直至變得透明無乙醇味；20μLddH2ODNA5μL-200CDNA瓊脂糖凝膠電泳檢瓊脂糖凝膠板的650C（不燙手為宜），1μLGoldview氣泡，緩慢倒入事先準(zhǔn)備的制膠有機(jī)玻璃槽（插入樣品槽模板梳子）30min膠板放入電泳槽中（樣品孔位于負(fù)極），1×TAE5mm，用取液DNA5μL1μL（6×）1~2cm4 ：同實驗者：唐妍 2017年4月10題目：質(zhì)粒DNA的提取及檢DNA五、結(jié)果及DNADNADNA3DNADNA，常以超螺旋形式存在；如果兩條鏈DNADNA分子。DNAcccDNA>線性>ocDNADNA的泳動速度最快，電泳速度最快的條帶顯色最深。閉合環(huán)狀DNA、開環(huán)DNA和線性DNA分子；DNA條帶不是特別清晰，分析有以下幾個原因：DNA部分降解、電泳緩沖液陳舊、DNA上樣量過多、有蛋白污染、DNA變性。5：同實驗者：2017410題目：質(zhì)粒DNA的提取及檢六、討核酸樣品中不應(yīng)存在對酶有抑制作用的和過高濃度的金屬離子其他生物大分子（如蛋白質(zhì)、多糖和脂類分子）DNARNApH4~10機(jī)械剪切力的主要危害對象是大分子量的線型DNA分子，如真核細(xì)胞的DNA；對分子量小的環(huán)狀DNA分子，如質(zhì)粒DNA及RNA分子則相對少一些。0~4RNApoly(A)RNA(25:24:1)混合液可使者兩個問題迎刃而6生命科學(xué)學(xué)