基礎(chǔ)生物學(xué)實(shí)驗(yàn)（二）：蛋白質(zhì)含量的測(cè)定_第1頁
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蛋白質(zhì)含量的測(cè)定目的原理操作步驟注意事項(xiàng)目的掌握考馬斯亮藍(lán)測(cè)定蛋白質(zhì)含量的原理和技術(shù)，了解該方法的用途。測(cè)定前面實(shí)驗(yàn)分離獲得樣品中的蛋白質(zhì)含量，以確定各步處理獲得樣品中酶的比活力、純度及回收率。蛋白質(zhì)含量測(cè)定的原理考馬斯亮蘭G-250染料，在酸性溶液中與蛋白質(zhì)結(jié)合，使染料的最大吸收峰的位置（max）由465nm變?yōu)?95nm。在595nm下測(cè)定的吸光度值A(chǔ)595與蛋白質(zhì)濃度成（在一定濃度范圍內(nèi),10-100μg/mL）正比。操作步驟蛋白質(zhì)含量的測(cè)定（1）蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作：（2）蛋白質(zhì)含量的測(cè)定蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作表1蛋白質(zhì)溶液標(biāo)準(zhǔn)曲線的測(cè)定步驟蛋白質(zhì)含量的測(cè)定表2蛋白質(zhì)含量的測(cè)定步驟注意：每個(gè)樣液的加樣量要根據(jù)樣液蛋白質(zhì)的實(shí)際含量具體調(diào)整。數(shù)據(jù)處理1．蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制2．計(jì)算SOD分離純化過程中各步處理獲得的樣液中蛋白質(zhì)的總的含量蛋白質(zhì)的總的含量（μg）＝A*B*C/DA:每個(gè)樣品測(cè)得的蛋白質(zhì)含量（μg/mL）；根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得；B:每個(gè)樣品總量（mL）C:稀釋倍數(shù)D:實(shí)際測(cè)定樣液的用量（mL）SOD分離純化各步處理的結(jié)果及分析實(shí)驗(yàn)各步處理效果的考核指標(biāo)比活力＝酶的總活力/總蛋白質(zhì)含量（mg）純度指標(biāo)酶（活）的回收率（％）＝每次總活力×100/第一次總活力純化的效果的指標(biāo)純化倍數(shù)＝每次比活力/第一次比活力純化的效率指標(biāo)注意事項(xiàng)為保證測(cè)定數(shù)據(jù)的可靠性，應(yīng)根據(jù)樣品蛋白質(zhì)實(shí)際濃度的不同，適當(dāng)調(diào)整樣品的測(cè)定用量；操作時(shí)可以配好標(biāo)準(zhǔn)曲線樣液，以此作

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