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文檔簡介

葉綠體的分離及熒光觀察細胞生物學實驗四目的要求

通過植物細胞葉綠體的分離,了解細胞器分離的一般原理和方法。

觀察葉綠體的自發(fā)熒光和次生熒光,并熟悉熒光顯微鏡的使用方法。

實驗原理將組織勻漿后懸浮在等滲介質中進行差速離心，是分離細胞器的常用方法。葉綠體的分離應在等滲溶液(0.35mol/L氯化鈉或0.4mol/L蔗糖溶液)中進行,以免滲透壓的改變使葉綠體受到損傷。實驗用品材料：菠菜葉片。

試劑：碳酸鈣、丙酮、甲醇、

醋酸酮、氫氧化鉀、乙醚、鹽酸。

器材：研缽、移液管、吸球、

天平、分液漏斗、量筒、試管。實驗方法一、葉綠體的分離與觀察

1.選取新鮮的嫩菠菜葉，洗凈擦干后去除葉梗脈，稱30g于150ml0.35mol/LNaCl溶液中，裝入組織搗碎機。2.利用組織搗碎機低速(5000r/min)勻漿3～5min。3.將勻漿用6層紗布過濾于500ml燒杯中。4.取濾液4ml在1000r/min下離心2min。棄去沉淀。5.將上清液在3000r/min下離心5min。棄去上清液，沉淀即是葉綠體(混有部分細胞核)。6.將沉淀用0.35mol/LNaCl溶液懸浮。

觀察7.取葉綠體懸液一滴滴于載玻片上，加蓋玻片后即可在普通光鏡和熒光顯微鏡下觀察。(1)在普通光鏡下觀察。(2)在熒光顯微鏡下觀察葉綠體的直接熒光。(3)在熒光顯微鏡下觀察葉綠體的間接熒光：取葉綠體懸液一滴滴在無熒光載片上，再滴加一滴0.01%吖啶橙熒光染料,加蓋片后即可在熒光顯微鏡下觀察。二、菠菜葉手切片觀察用剔須刀片將新鮮的嫩菠菜葉切削出一斜面置于載玻片上，滴加1～2滴0.35mol/LNaCl溶液，加蓋片后輕壓，置顯微鏡下觀察。(1)在普通光鏡下觀察。(2)在熒光顯微鏡下觀察其直接熒光。(3)觀察間接熒光：向手切片上滴加1～2滴0.01%吖啶橙染液，染色1min，洗去余液,加蓋片后可在熒光顯微鏡下觀察間接熒光。

植物的葉片和葉綠體葉片葉綠體葉片切面葉肉細胞思考題1、葉綠體分離

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