病毒和亞病毒因子

關(guān)于病毒和亞病毒因子第一頁，共六十五頁，2022年，8月28日第二頁，共六十五頁，2022年，8月28日第三章病毒和亞病毒一、教學(xué)目的與要求學(xué)習(xí)病毒的形態(tài)和大小，掌握病毒的化學(xué)組成、形態(tài)結(jié)構(gòu)、增殖方式和生活周期，了解亞病毒的特點，了解病毒在生產(chǎn)實踐中的應(yīng)用。二、

教學(xué)內(nèi)容：

1、病毒的形態(tài)結(jié)構(gòu)、化學(xué)成分與增殖方式(★)

2、亞病毒的組成與特點３、病毒與實踐(☆)第三頁，共六十五頁，2022年，8月28日第一節(jié)病毒病毒的概念：病毒是一類由核酸和蛋白質(zhì)等少數(shù)幾種成分組成的超顯微“非細(xì)胞生物”。其本質(zhì)是一種只含有DNA或RNA的遺傳因子，它們能以感染態(tài)和非感染態(tài)兩種狀態(tài)存在。在宿主體內(nèi)呈感染態(tài)，只能在活的、敏感細(xì)胞內(nèi)以復(fù)制方式增殖(活細(xì)胞內(nèi)專性寄生)；在離體條件下，能以無生命的生物大分子顆粒狀態(tài)長期存在，并可保持其侵染活性，即非感染態(tài)?？梢宰鳛橹虏∫蜃?，也可以當(dāng)作遺傳成分。第四頁，共六十五頁，2022年，8月28日第一節(jié)病毒病毒的特點1、形體極微小，都通過細(xì)菌濾器，只能在電鏡下觀察；2、無細(xì)胞構(gòu)造，其主要成分僅為核酸和蛋白質(zhì)兩種。故又稱“分子生物”；3、每一種病毒只含一種核酸，不是DNA就是RNA；4、既無產(chǎn)能酶系，又無蛋白質(zhì)和核酸合成酶系，只能利用宿主活細(xì)胞內(nèi)現(xiàn)成代謝系統(tǒng)合成自身的核酸和蛋白質(zhì)組分；5、以核酸和蛋白質(zhì)等“元件”的裝配實現(xiàn)大量繁殖；6、在離體條件下，能以無生命的生物大分子狀態(tài)存在，并可長期保持侵染活力；7、對一般抗生素不敏感，但對干擾素敏感；8、有些病毒的核酸還能整合到宿主的基因組中，并誘發(fā)潛伏性感染。第五頁，共六十五頁，2022年，8月28日第一節(jié)病毒病毒的主要類群真病毒：亞病毒：至少含有核酸和蛋白質(zhì)兩種組分類病毒：衛(wèi)星因子：朊病毒：只含不具獨立侵染性的核酸組分只含具獨立侵染性的核酸組分只含單一蛋白質(zhì)組分病毒第六頁，共六十五頁，2022年，8月28日第一節(jié)病毒病毒與人類的關(guān)系病毒種類多樣性：凡在有細(xì)胞的生物生存之處都有與其相對應(yīng)的病毒存在。與人類關(guān)系密切至今和許多有益動物疑難疾病和威脅性最大的傳染病幾乎都是病毒病發(fā)酵工業(yè)中的噬菌體污染會嚴(yán)重危及生產(chǎn)許多侵染有害生物的病毒則可制成生物防治劑而用于生產(chǎn)實踐許多病毒還是生物學(xué)基礎(chǔ)研究和基因工程中的重要材料或工具第七頁，共六十五頁，2022年，8月28日一、病毒的形態(tài)構(gòu)造和化學(xué)成分一）病毒的大小二）病毒的形態(tài)三）病毒的化學(xué)組成、結(jié)構(gòu)和對稱性重點第八頁，共六十五頁，2022年，8月28日一）病毒的大小測量單位為納米,直徑20-200nm

(病毒：細(xì)菌：真菌約為1：10：100)

<50nm小型病毒50nm-150nm中型病毒（大多數(shù)）>150nm大型病毒

最大：痘病毒，直徑約為200nm最?。翰硕够《?，直徑9-11nm第九頁，共六十五頁，2022年，8月28日微生物的大小比較葡萄球菌(1000nm）

牛痘病毒300×250nmABCDEFG立克次體450nm衣原體390nmA、大腸桿菌噬菌體

(65×95nm)B、腺病毒(70nm)C、脊髓灰質(zhì)炎病毒

(30nm)D、乙腦病毒(40nm)E、蛋白分子(10nm)F、流感病毒(100nm)G、煙草花葉病毒第十頁，共六十五頁，2022年，8月28日二）病毒的形態(tài)1、病毒的細(xì)胞形態(tài)多種多樣，有桿狀、球狀、蝌蚪狀、磚狀、子彈狀桿狀：直桿狀----煙草花葉病毒、苜?；ㄈ~病毒稍彎曲----馬鈴薯X病毒、甜菜黃化病毒球狀：豌豆花葉病毒、黃瓜花葉病毒、大多數(shù)動物病毒蝌蚪狀：有些細(xì)菌病毒桿狀球狀蝌蚪狀第十一頁，共六十五頁，2022年，8月28日二）病毒的形態(tài)2、病毒的群體形態(tài)①包涵體②噬菌斑③病斑和空斑④枯斑第十二頁，共六十五頁，2022年，8月28日①包涵體（inclusionbody）概念：

感染病毒的宿主細(xì)胞內(nèi)，出現(xiàn)在光學(xué)顯微鏡下可見的大小、形態(tài)、數(shù)量不等的小體，稱為包涵體。在細(xì)胞中的形成部位：

位于細(xì)胞核內(nèi)—如包疹病毒 位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)—如狂犬病毒等

細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)內(nèi)都有—麻疹病毒

包涵體的本質(zhì)

—大多數(shù)是病毒粒子組成的，少數(shù)是細(xì)胞對病毒的反應(yīng)。了解研究包涵體的實踐意義

—病毒鑒定、臨床診斷依據(jù)第十三頁，共六十五頁，2022年，8月28日②噬菌斑(plaque)概念：

指在宿主細(xì)菌的菌苔上，噬菌體使菌體裂解而形成的一個具有一定形狀、大小、邊緣和透明度的空斑（負(fù)菌落）。應(yīng)用：

1、噬菌體定量計數(shù)

2、噬菌體的鑒定烈性噬菌體噬菌斑溫和噬菌體噬菌斑第十四頁，共六十五頁，2022年，8月28日

③空斑和病斑：由動物病毒在宿主單層細(xì)胞培養(yǎng)物上形成的。也可以采用噬菌斑法類似的技術(shù)。用于動物病毒粒子的計數(shù)。④枯斑：

植物病毒在植物葉片上形成的群體稱為枯斑第十五頁，共六十五頁，2022年，8月28日三）病毒的組成、結(jié)構(gòu)與對稱性1、病毒的化學(xué)組成基本成分為核酸和蛋白質(zhì)，有的還有脂質(zhì)、糖類等。①病毒核酸一種病毒只有一種核酸，核酸構(gòu)成了病毒的基因組，具有遺傳信息的載體和傳遞體的作用。是病毒系統(tǒng)分類中最可靠的分子基礎(chǔ)。大多數(shù)病毒粒子中只有一個核酸分子，但有少數(shù)RNA病毒含2個或以上的核酸分子，各個分子擔(dān)負(fù)著不同的遺傳功能，它們一起構(gòu)成了病毒的基因組，這些病毒為雙組分基因組、三組分基因組和多組分基因組。類型極為多樣化：病毒DNA和RNA不僅有是單鏈(singlestrand,ss)還是雙鏈(doublestrand,ds)，線狀和環(huán)狀，而且有正鏈(+鏈)和負(fù)鏈(-鏈)，其類型為生物之最。第十六頁，共六十五頁，2022年，8月28日若干有代表性病毒的核酸類型細(xì)菌病毒真菌病毒第十七頁，共六十五頁，2022年，8月28日三）病毒的組成、結(jié)構(gòu)與對稱性1、病毒的化學(xué)組成②病毒蛋白質(zhì)：由病毒核酸編碼結(jié)構(gòu)功能：結(jié)構(gòu)蛋白組成病毒體的成分

衣殼蛋白：包在病毒外構(gòu)成病毒的基本結(jié)構(gòu)——核衣殼

包膜蛋白：

基質(zhì)蛋白：連接衣殼蛋白與包膜蛋白的部分吸附功能：噬菌體尾絲及包膜糖蛋白刺突吸附在宿主表面的受體上破壞宿主細(xì)胞膜與細(xì)胞壁：如噬菌體的溶菌酶增殖：各種酶。如DNA和RNA聚合酶，RNA復(fù)制酶、逆轉(zhuǎn)錄酶等第十八頁，共六十五頁，2022年，8月28日三）病毒的組成、結(jié)構(gòu)與對稱性裸露病毒：基本結(jié)構(gòu)(核衣殼)包膜：核心(基因組)：衣殼：病毒核酸由許許多多衣殼粒(蛋白質(zhì)亞單位)組成由類脂雙層膜(來自宿主的細(xì)胞膜)組成，有的長有刺突包膜病毒：2、病毒的構(gòu)造病毒粒(病毒體)：有時也稱病毒顆?；虿《玖Ｗ樱瑢Ｖ赋墒斓?、結(jié)構(gòu)完整的和有感染性的單個病毒。第十九頁，共六十五頁，2022年，8月28日病毒粒的模式構(gòu)造衣殼粒衣殼核心（核酸）核衣殼包膜包膜病毒包膜子粒第二十頁，共六十五頁，2022年，8月28日3、病毒粒的對稱體制

桿狀：煙草花葉病毒(TMV)等絲狀：E.coil的f1、fd、M13噬菌體等卷曲狀：正粘病毒(流感病毒)等彈狀：狂犬病毒，水泡性口膜炎病毒等小型：脊髓灰質(zhì)炎病毒等，Φ174噬菌體等

大型：腺病毒等

無包膜：E.coil的T偶數(shù)噬菌體(蝌蚪狀)等有包膜：痘病毒(磚塊狀)三）病毒的組成、結(jié)構(gòu)與對稱性無包膜無包膜有包膜螺旋對稱二十面體對稱復(fù)合對稱有包膜：皰疹病毒等第二十一頁，共六十五頁，2022年，8月28日ssRNA

(5%)衣殼粒

(95%)煙草花葉病毒的模式構(gòu)造第二十二頁，共六十五頁，2022年，8月28日腺病毒的模式構(gòu)造A二十面體的形態(tài)第二十三頁，共六十五頁，2022年，8月28日五鄰體腺病毒的模式構(gòu)造B衣殼粒形態(tài)12個角，20個面，30條棱，252個球狀衣殼粒70-80nm六鄰體第二十四頁，共六十五頁，2022年，8月28日腺病毒的模式構(gòu)造C腺病毒的形態(tài)核心為線狀dsDNA第二十五頁，共六十五頁，2022年，8月28日E.coil的T偶數(shù)噬菌體的模式構(gòu)造T2、T4、T665nm95nm95nm20nm（中空的核心）第二十六頁，共六十五頁，2022年，8月28日第二十七頁，共六十五頁，2022年，8月28日二、4類病毒及其繁殖方式一）原核生物病毒—噬菌體二）植物病毒三）人類和脊椎動物病毒四）昆蟲病毒第二十八頁，共六十五頁，2022年，8月28日一）原核生物病毒—噬菌體概念：即原核生物的病毒。包括噬細(xì)菌體、噬放線菌體和噬藍(lán)細(xì)菌體等。分布：噬菌體在自然界廣泛存在，凡有原核生物活動之處幾乎都發(fā)現(xiàn)有相應(yīng)噬體菌存在。種類：可歸納成6種主要形態(tài)第二十九頁，共六十五頁，2022年，8月28日噬菌體的六類形態(tài)★T-系噬菌體——T-系噬菌體是研究的最廣泛而又深入的細(xì)菌噬菌體，按發(fā)現(xiàn)的先后順序進(jìn)行從T1---T7編號，后來發(fā)現(xiàn)其中偶數(shù)者的形態(tài)都相同（蝌蚪形收縮性長尾），故統(tǒng)稱T偶數(shù)噬菌體（A型）。第三十頁，共六十五頁，2022年，8月28日1、噬菌體的繁殖吸附(adsorption)侵入(penetration)增殖(復(fù)制與生物合成）成熟（裝配）(assembly)裂解（釋放）(release)第三十一頁，共六十五頁，2022年，8月28日幾個概念烈性噬菌體（virulentphage）——感染細(xì)胞后，能在寄主細(xì)胞內(nèi)短時間完成吸附、侵入、增殖、成熟和裂解5個階段而實現(xiàn)繁殖，產(chǎn)生大量子代噬菌體并引起細(xì)菌裂解的噬菌體。溫和噬菌體（temperatephrage）——噬菌體感染細(xì)胞后，將其核酸整合（插入）到宿主的核DNA上，并且可以隨宿主DNA的復(fù)制而進(jìn)行同步復(fù)制，在一般情況下，不引起寄主細(xì)胞裂解的噬菌體。裂解性周期（增殖性周期）——烈性噬菌體所經(jīng)歷的繁殖過程第三十二頁，共六十五頁，2022年，8月28日TheLyticLifeCycleofLyticBacteriophages第三十三頁，共六十五頁，2022年，8月28日吸附：接觸→結(jié)合→特異性吸附（病毒以其特殊結(jié)構(gòu)與宿主細(xì)胞表面的特異受體結(jié)合）噬菌體:尾絲、刺突---------細(xì)胞壁(脂多糖、脂蛋白、磷壁酸)

莢膜、鞭毛、性毛動物病毒：刺突、吞噬作用和胞飲作用被動進(jìn)入植物病毒：刺突侵入病毒或其一部分進(jìn)入宿主細(xì)胞的過程噬菌體:吸附后尾絲收縮，使尾管碰及細(xì)胞壁，這時，尾管端所攜帶的少量溶菌酶水解細(xì)胞上的肽聚糖，然后，尾鞘收縮，把尾管推出并插入細(xì)胞壁中，頭部的核酸就通過尾管迅速注入宿主細(xì)胞中，而將蛋白質(zhì)外殼留在壁外。動物病毒：核衣殼侵入，需脫殼植物病毒：通過表面?zhèn)诨蚶ハx口器插入細(xì)胞而侵入吸附和侵入第三十四頁，共六十五頁，2022年，8月28日Thebacteriophagebindstoreceptorsonthebacterialcellwall.Thebacteriophageinjectsitsgenomeintothebacterium'scytoplasm

Fig.2:Penetration

Fig.1:Adsorption

第三十五頁，共六十五頁，2022年，8月28日增殖（復(fù)制和生物合成）①核酸復(fù)制第三十六頁，共六十五頁，2022年，8月28日增殖（復(fù)制和生物合成）②蛋白質(zhì)的生物合成首先是設(shè)法利用宿主細(xì)胞內(nèi)原有的RNA聚合酶轉(zhuǎn)錄出噬菌體的mRNA病毒一轉(zhuǎn)錄出其mRNA，就由這些mRNA合成出病毒蛋白質(zhì)(酶、衣殼粒)早期轉(zhuǎn)錄:早期蛋白次早期轉(zhuǎn)錄:次早期蛋白晚期轉(zhuǎn)錄:晚期蛋白噬菌體的基因組轉(zhuǎn)錄和表達(dá)具有嚴(yán)格的時序性第三十七頁，共六十五頁，2022年，8月28日裝配(成熟)①偶數(shù)噬菌體的裝配指導(dǎo)裝配：需要有一些非結(jié)構(gòu)蛋白作指導(dǎo)第三十八頁，共六十五頁，2022年，8月28日成熟(裝配)②TMV的裝配自體裝配：各個組分自發(fā)地組裝形成病毒粒完整病毒粒雙層盤雙圈螺旋第三十九頁，共六十五頁，2022年，8月28日裂解(釋放)裂解（Disintegration）:裸露病毒裂解當(dāng)宿主細(xì)胞內(nèi)的大量子代噬菌體成熟后，由于水解細(xì)胞膜的脂肪酶和水解細(xì)胞壁的溶菌酶等的作用，促進(jìn)了細(xì)胞的裂解，從而完成了子代噬菌體的釋放。自外裂解指大量噬菌體吸附在同一宿主細(xì)胞表面并釋放眾多的溶菌酶，最終因外在的原因而導(dǎo)致細(xì)胞裂解。裂解量：平均每一宿主細(xì)胞裂解后產(chǎn)生的子代病毒粒子數(shù)出芽（Budding）:包膜病毒裝配好的核衣殼遷移到宿主細(xì)胞膜上對應(yīng)特異部位，在出芽穿過細(xì)胞膜的過程中裹上包膜，釋放.第四十頁，共六十五頁，2022年，8月28日植物病毒的繁殖過程第四十一頁，共六十五頁，2022年，8月28日2、噬菌體效價的測定效價(滴度,Titre)—表示每毫升試樣中所含有的具有侵染性的病毒粒子數(shù)。噬菌體效價—或噬菌斑形成單位（plaque-formingunit,pfu）或感染中心數(shù)（infectivecentre），指噬菌體的濃度，即每毫升試樣中含具有侵染性的噬菌體的個數(shù)。噬菌體效價測定方法電鏡直接計數(shù)法、血細(xì)胞凝集試驗、抗原試驗（免疫沉淀試驗、酶聯(lián)免疫吸附試驗等）、分光光度法雙層平板法成斑率同一樣品根據(jù)噬菌斑計算出來的效價與用電鏡計算出來的效價比。第四十二頁，共六十五頁，2022年，8月28日主要操作步驟：雙層平板法（2%瓊脂底層培養(yǎng)基7-8mL）上層培養(yǎng)基（1%瓊脂培養(yǎng)基3mL）底層平板宿主菌懸液（對數(shù)期菌液0.2mL）噬菌體試樣（合適稀釋液0.1mL）上層平板雙層平板混均37℃10余h計數(shù)噬菌斑雙層平板法計算出來的噬菌體效價總是比用電鏡直接計數(shù)得到的效價低可使所有噬菌斑都近似位于同一平面上，因而大小一致、邊緣清晰且無重疊現(xiàn)象瓊脂較稀，故形成的的噬菌斑形態(tài)較大、特征較明顯并便于觀察和計數(shù)第四十三頁，共六十五頁，2022年，8月28日3、一步生長曲線概念：或稱一級生長曲線，是定量描述烈性噬菌體生長規(guī)律的實驗曲線?；緦嶒灢襟E1、吸附用噬菌體的高倍稀釋液去感染高濃度的宿主細(xì)胞，以保證每個細(xì)胞所吸附的噬體體至多只有一個。吸附數(shù)分鐘后，在混合液中加入適量的相應(yīng)抗血清以中和尚未吸附的噬菌體。2、稀釋用保溫的培養(yǎng)液稀釋此混合液，同時終止抗血清的作用。3、培養(yǎng)與測定置于適宜的溫度與培養(yǎng)，其間每隔數(shù)分鐘取樣，連續(xù)測定其效價，以感染時間為橫坐標(biāo)，噬菌體的效價為縱坐標(biāo)繪制一步生長曲線。第四十四頁，共六十五頁，2022年，8月28日3、一步生長曲線指噬菌體核酸侵入宿主細(xì)胞后至第一個成熟噬菌體粒子裝配前的一段時間。指潛伏期后的宿主細(xì)胞迅速裂解，溶液中噬菌體粒子急劇增多的一段時間。指感染后的宿主細(xì)菌全部裂解，溶液中噬菌體效價達(dá)到最高點的時期。指在潛伏前期人為地(用氯仿等)裂解宿主細(xì)胞后，此裂解液仍無侵染性的一段時間。胞內(nèi)積累期：指在隱晦期后，若人為地裂解細(xì)胞，其裂解液已呈現(xiàn)侵染性的一段時間。噬菌體以分鐘計，動物病毒和植物病毒以小時或天計。是平均每一宿主細(xì)胞裂解后所產(chǎn)生的子代病毒粒子數(shù)。其值等于平穩(wěn)期病毒效價與潛伏期病毒效價之比。噬菌體的裂解量一般為幾十至上百個，動物病毒和植物病毒可達(dá)數(shù)百至上萬個第四十五頁，共六十五頁，2022年，8月28日3、一步生長曲線Phageplaques概念：又稱一級生長曲線，定量描述烈性噬菌體生長規(guī)律的實驗曲線。其基本實驗步驟為：Samplesremovedat5-minuteintervalsPhagesuspensionInfectedbacteriaBacteriaBacterialysedBacteriachlorofomHost

bacteria

meltedagarBacteria—eachcellbeconesinfectedwithonephageAllowtohardedSandwichoftopagarandnutrientagarNutrientagarplateIncubate24-48hoursLawnofhostcellBacteriophagesuspensionAllowedtostand1minutewithchloroformPourmixtureofbacteriaandphageontonutrientagarplate1%瓊脂培養(yǎng)基45℃-48℃2%瓊脂雙層平板每隔數(shù)分鐘取樣第四十六頁，共六十五頁，2022年，8月28日4、溶源性概念：或稱溶源現(xiàn)象。指溫和噬菌體侵染敏感宿主細(xì)胞后不裂解它們，而與宿主細(xì)胞共存的特性。溶源菌：是能與溫和噬菌體長期共存，一般不會出現(xiàn)有害影響的宿主細(xì)胞。溫和噬菌體如E.coli的、P1、P2，Salmonellatyphimurium的P22等存在形式：游離態(tài)：指成熟后被釋放并有侵染性的游離噬菌體狀態(tài)整合態(tài)：指已整合到宿主基因上的前噬菌體狀態(tài)。(進(jìn)入溶源性周期)營養(yǎng)態(tài)：指前噬菌體經(jīng)外界理化因子誘導(dǎo)后，脫離宿主核基因組而處于積極復(fù)制、合成和裝配的狀態(tài)。檢出：噬菌斑第四十七頁，共六十五頁，2022年，8月28日前噬菌體：沒有感染力圖1.1-4細(xì)菌受噬菌體感染后的兩種反應(yīng)

A.裂解反應(yīng)B.溶原性反應(yīng)自發(fā)或誘導(dǎo)變異營養(yǎng)態(tài)游離態(tài)整合態(tài)自發(fā)或誘導(dǎo)變異第四十八頁，共六十五頁，2022年，8月28日★烈性噬菌體與溫和噬菌體的生活史比較：吸附侵入增殖成熟裂解整合同步復(fù)制自發(fā)或誘導(dǎo)多次循環(huán)裂解性循環(huán)溶源性循環(huán)第四十九頁，共六十五頁，2022年，8月28日★溶源菌的檢驗：●方法：

將少量溶源菌與大量的敏感性指示菌混合→→倒瓊脂平板→→經(jīng)培養(yǎng)后觀察是否有噬菌斑出現(xiàn)?！衩舾行灾甘揪鋈茉淳呀夂笏尫诺臏睾褪删w會發(fā)生裂解循環(huán)者，這些菌株可以從自然界或菌種庫中獲得。由于溶源菌在細(xì)胞分裂過程中有極少數(shù)個體會引起自發(fā)裂解，其釋放的噬菌體可不斷侵染溶源菌菌落周圍的指示菌菌苔，于是就形成了一個個中央有溶源菌的小菌落，四周有透明圈圍著的獨特的噬菌斑第五十頁，共六十五頁，2022年，8月28日在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)待測菌樣原噬菌體復(fù)制除去活菌體倒瓊脂平板（或?qū)V液加到敏感性指示菌的液體培養(yǎng)物中培養(yǎng)觀察是否有噬菌斑出現(xiàn)（或使菌液變清）對數(shù)期進(jìn)行紫外照射培養(yǎng)，過濾取少量濾液與大量的敏感性指示菌混合溶源菌的優(yōu)化檢驗步驟：第五十一頁，共六十五頁，2022年，8月28日補(bǔ)充1：病毒的分類病毒的分類系統(tǒng)病毒分類與命名的權(quán)威機(jī)構(gòu)國際病毒分類委員會（ICTV）國際病毒分類系統(tǒng)目、科、亞科、屬、種分類依據(jù)是其免疫學(xué)特性與宿主特異性ICTV將其定義為具有一定世代關(guān)系并占據(jù)一定生境的病毒群。即在具有科和屬特征前提下，把某些次要特征不完全相同的病毒歸為同一種。病毒種以下的血清型、基因型、毒力株、變異株和分離株的分類和命名由公認(rèn)的國際專家小組確定。病毒的命名采用英文或英文化拉丁文，只用單名，不用斜體書寫。但目、科、亞科、屬分別用拉丁文后綴“virales”、“viridae”、“virinae”、“virus”。第五十二頁，共六十五頁，2022年，8月28日補(bǔ)充2：病毒研究的基本方法一、病毒的培養(yǎng)病毒只能在對其敏感的相應(yīng)宿主及其細(xì)胞內(nèi)才能繁殖。二、病毒的分離與純化1、病毒的分離將疑有病毒而待分離的標(biāo)本經(jīng)處理后，接種于敏感的實驗宿主、雞胚或細(xì)胞培養(yǎng)，經(jīng)過一段時間后，檢查病毒特異性病理表現(xiàn)或用其他方法來肯定病毒的存在。2、病毒的純化(1)病毒純化的標(biāo)準(zhǔn)第五十三頁，共六十五頁，2022年，8月28日補(bǔ)充2：病毒研究的基本方法二、病毒的鑒定：病毒性質(zhì)和特征分析1、病毒感染的宿主范圍及感染表現(xiàn)的鑒定2、病毒的理化性質(zhì)鑒定病毒顆粒大小和形態(tài)、病毒及其組分的沉降系數(shù)、浮力密度和相對分子質(zhì)量、病毒的核酸類型、對理化因子的敏感性等。3、血細(xì)胞凝集性質(zhì)鑒定不同病毒所凝集的血細(xì)胞種類及發(fā)生凝集所要求的溫度、pH條件不同4、病毒的血清學(xué)鑒定采用免疫血清或抗體，進(jìn)行免疫沉淀反應(yīng)、凝集反應(yīng)、酶聯(lián)免疫吸附測定、血凝抑制實驗等5、病毒的分子生物學(xué)鑒定病毒感染宿主所引起的疾病癥狀；在雞胚絨毛尿囊膜上所形成的痘皰形態(tài)及在單層細(xì)胞培養(yǎng)物上所產(chǎn)生的細(xì)胞病變表現(xiàn)等第五十四頁，共六十五頁，2022年，8月28日補(bǔ)充3：病毒與腫瘤發(fā)生腫瘤是由失去調(diào)控而異常生長和繁殖的新生異常細(xì)胞或瘤形成的組織團(tuán)塊。據(jù)估計，15%的人類腫瘤是由病毒所引起。腫瘤病毒可引發(fā)機(jī)體腫瘤發(fā)生的病毒。其最顯著的特征是能夠像溫和噬菌體一樣把病毒自身核酸整合到宿主染色體DNA上。第五十五頁，共六十五頁，2022年，8月28日補(bǔ)充4：新生病毒概念指以往局部低水平感染的病毒或具有種間屏障的病毒，將其宿主范圍擴(kuò)大到別的物種，引起了大范圍的人類傳染性疾病。其產(chǎn)生與人類對環(huán)境的破壞有關(guān)、艾滋?。ㄈ祟惈@得性免疫缺陷綜合癥，AIDS），其病原體是人免疫缺陷病毒（HIV）其產(chǎn)生與現(xiàn)代交通、旅游發(fā)展和人類大規(guī)模遷居有關(guān)脊髓灰質(zhì)炎病毒其產(chǎn)生與某些病毒基因突變改變了宿主范圍或致病力有關(guān)禽流感（AI），由A型流感（H有15個型，N有9個型）病毒引起H5N1流感、甲型H1N1流感，由A型流感病毒變種引起其產(chǎn)生與人和動物的密切接觸有關(guān)嚴(yán)重急性呼吸綜合癥（SARS），由SARS冠狀病毒引起第五十六頁，共六十五頁，2022年，8月28日第五十七頁，共六十五頁，2022年，8月28日第二節(jié)亞病毒類病毒(Viroids)：只含具獨立侵染活性的核酸低相對分子量，有二級結(jié)構(gòu)環(huán)狀，裸露ssRNA分子，無衣殼或包膜復(fù)制依賴于宿主細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄酶系統(tǒng)，而不需要輔助病毒其RNA不產(chǎn)生蛋白質(zhì)其RNA總是在宿主細(xì)胞核中復(fù)制類病毒顆粒的識別需要鑒定其RNA序列多與植物疾病相關(guān)第五十八頁，共六十五頁，2022年，8月28日第二節(jié)亞病毒衛(wèi)星因子：只含不具獨立侵染活性的核酸，需輔助病毒才能復(fù)制和感染衛(wèi)星病毒核酸分子含有編碼衣殼蛋白的遺傳信息，核酸被所編碼的衣殼蛋白包裹成形態(tài)學(xué)和血清學(xué)與輔助病毒不同的顆粒。衛(wèi)星核酸（衛(wèi)星RNA或衛(wèi)星DNA）核酸分子沒有編碼衣殼蛋白的遺傳信息，核酸被裝配于輔助病毒的衣殼蛋白中。例如：煙草壞死病毒（TNV）衛(wèi)星病毒（STNV）人類丁型肝炎病毒（HDV）是乙型肝炎病毒（HBV）的衛(wèi)星核酸第五十九頁，共六十五頁，2022年，8月28日第二節(jié)亞病毒朊病毒：蛋白侵染子（“普利昂”）是具侵染性蛋白質(zhì)分子，對人類最大的威脅是導(dǎo)致人類和家畜患中樞神經(jīng)系統(tǒng)退化性病變，最終不治而亡?？篃?，90度不能使之失活抗輻射抗DNA酶或RNA酶降解對蛋白質(zhì)變性劑如酚和尿素敏感具有直