微生物實(shí)驗(yàn)考試重點(diǎn)

微生物實(shí)驗(yàn)考試要點(diǎn)微生物實(shí)驗(yàn)考試要點(diǎn)微生物實(shí)驗(yàn)考試要點(diǎn)1．微生物的純培養(yǎng)物由一種微生物組成的細(xì)胞集體平時(shí)是由一個(gè)單細(xì)胞生長生殖形成。2．菌落：單個(gè)微生物細(xì)胞在適合的固體培養(yǎng)基表面或內(nèi)部生長、生殖到必然程度形成的肉眼可見的、有必然形態(tài)的子細(xì)胞生長集體。滅菌：是指物體中包括芽孢在內(nèi)的所有微生物都被殺死或除去。消毒殺死或滅活物質(zhì)或物體中所有病原微生物的舉措消毒起到防備感染或流傳作用5.無菌技術(shù)：在分別、轉(zhuǎn)接及培養(yǎng)純種微生物時(shí)，防備其被環(huán)境中微生物污染或其自己污染環(huán)境的技術(shù)。鑒識(shí)培養(yǎng)基：在培養(yǎng)基中加入能與特定微生物的代謝產(chǎn)物發(fā)生特點(diǎn)性化學(xué)反響的化學(xué)物質(zhì)，用于鑒識(shí)不同樣種類微生物。選擇培養(yǎng)基：依照不同樣微生物的營養(yǎng)需求或?qū)δ撤N化學(xué)物質(zhì)敏感性不同樣，在培養(yǎng)基中加入相應(yīng)營養(yǎng)物質(zhì)或化學(xué)物質(zhì)，控制不需要微生物的生長，將所需微生物從復(fù)雜的微生物集體中選擇分別出來。基礎(chǔ)培養(yǎng)基：含有一般微生物生長所需基本營養(yǎng)物質(zhì)的培養(yǎng)基。合成培養(yǎng)基：由化學(xué)成分完好認(rèn)識(shí)的物質(zhì)配制而成的培養(yǎng)基，也稱為化學(xué)限制培養(yǎng)基。平板劃線法：用接種環(huán)在培養(yǎng)平板表面劃線接種微生物，使微生物細(xì)胞數(shù)量隨著劃線次數(shù)的增加而減少，并漸漸分開。保溫培養(yǎng)后，在固體培養(yǎng)基表面獲得生長分其他微生物菌落。稀釋倒平板法：將待分其他資料稀釋后與已消融并冷卻至50℃左右的瓊脂培養(yǎng)基混淆，搖勻后制成可能含菌的培養(yǎng)平板，保溫培養(yǎng)后分別獲得的微生物菌落生長在固體培養(yǎng)基表面和里面。12．平板菌落計(jì)數(shù)法：將適合稀釋的樣品涂布于瓊脂培養(yǎng)基表面，培養(yǎng)后活細(xì)胞能形成菌落，經(jīng)過計(jì)算菌落數(shù)能知道樣品中的活菌數(shù)，該方法稱為平板計(jì)數(shù)或菌落計(jì)數(shù)。二．填空題（每空1分，共20分）用培養(yǎng)平板進(jìn)行微生物純培養(yǎng)分其他方法包括：平板劃線分別法/稀釋涂布平板法、稀釋倒平板法。霉菌菌體均由分支或不分支的菌絲組成。

培養(yǎng)基上，部分菌絲深入培養(yǎng)基內(nèi)吸取養(yǎng)料，稱為營養(yǎng)菌絲體；另一部分則向空中生長，稱為氣生菌絲體。有的氣生菌絲發(fā)育到必然階段，分化成子實(shí)體。革蘭氏陽性細(xì)菌細(xì)胞壁的主要成分為肽聚糖和磷壁酸，而革蘭氏陰性細(xì)菌細(xì)胞壁的主要成分則是脂質(zhì)、肽聚糖、蛋白質(zhì)、脂多糖。4.設(shè)計(jì)配制培養(yǎng)基所需依照的原則包括目的明確、營養(yǎng)協(xié)調(diào)、理化適合、經(jīng)濟(jì)節(jié)儉/控制氧化復(fù)原電位、原料根源和無菌辦理。5.常用的培養(yǎng)基凝結(jié)劑有：瓊脂、明膠、海藻酸膠。6.按用途分，培養(yǎng)基可分為鑒識(shí)培養(yǎng)基、營養(yǎng)培養(yǎng)基、特別培養(yǎng)基和選擇培養(yǎng)基。7.按所含成分區(qū)分培養(yǎng)基可分為天然培養(yǎng)基和組合培養(yǎng)基半組合培養(yǎng)基。8．在菌體形態(tài)察看中，需要進(jìn)行制片后才能在顯微鏡下察看，察看細(xì)菌時(shí)采用的制片方法是涂片法，察看放線菌時(shí)采用的制片方法是插片法或玻璃紙法，察看真菌采用的制片方法是美藍(lán)染液水浸片法或水-碘液浸片法。9．對(duì)細(xì)菌簡單染色法一般步驟是染色、水洗、干燥、鏡檢常用的染料有呂氏堿性美藍(lán)和草酸銨結(jié)晶紫染液等。10．濕熱滅菌法在常壓下蒸汽潛熱大、穿透力強(qiáng)、簡單使蛋白質(zhì)變性或凝結(jié)。11．每種微生物都有自己的最適合的pH值和必然的pH適合范圍。大部分細(xì)菌的最適pH為，酵母菌和霉菌的最適pH范圍為，放線菌的最適pH為。．對(duì)玻璃器皿、金屬用具等物品可用高壓蒸汽滅菌法或干熱滅菌法進(jìn)行滅菌；而關(guān)于牛奶或其他液態(tài)食品一般采用超高溫滅菌，其溫度為120℃，時(shí)間為2-4s。．革蘭氏染色法是鑒識(shí)細(xì)菌的重要方法，染色的要點(diǎn)以下：先用草酸銨結(jié)晶紫初染，再加碘液媒染，使菌體著色，爾后用乙醇脫色，最后用番紅復(fù)染，呈紫色為革蘭氏陽性反響，呈紅色為革蘭氏陰性反應(yīng)。

培養(yǎng)微生物的常用用具中，（A）是專為培養(yǎng)微生物設(shè)計(jì)的。A.平皿B.試管C.燒瓶D.燒杯．對(duì)光學(xué)顯微鏡察看收效影響最大的是（B）A目鏡B物鏡C聚光器D總放大倍數(shù)冷凍真空干燥法能夠長遠(yuǎn)珍藏微生物的原因是微生物處于（B）環(huán)境，代謝水平大大降低。A.干燥、缺氧、寡營養(yǎng)B.低溫、干燥、缺氧；C.低溫缺氧寡營養(yǎng)D.低溫干燥寡營養(yǎng)4．放線菌屬于（B）A病毒界B原核原生生物界C真菌界D真核原生生界5.實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)細(xì)菌常用的培養(yǎng)基是（A）A.牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基B.馬鈴薯培養(yǎng)基C.高氏一號(hào)培養(yǎng)基D.查氏培養(yǎng)基6．下面那一項(xiàng)不屬于稀釋倒平板法的缺點(diǎn)？（A）A菌落有時(shí)散布不夠均勻B熱敏感菌易被燙死C嚴(yán)格好氧菌因被固定在培養(yǎng)基中生長碰到影響D環(huán)境溫度低時(shí)不宜操7．微生物的分別方法中不包括（B）A稀釋平板法B影印法C劃線法D單細(xì)胞挑取法8．為了測定飲料中的細(xì)菌數(shù)，下述哪一種方法最好？（C）A比濁法B顯微直接計(jì)數(shù)法C平板計(jì)數(shù)法D膜過濾法9．制細(xì)菌標(biāo)本片采用的制片方法是（BA水浸片B.涂片法C.印片法D.組織切片法10．半固體培養(yǎng)基中，瓊脂使用濃度（B）。A、0B、0.3—0.5%C、1.5—2.0%D、5%11．接種環(huán)常用的滅菌方法（A）A火焰滅菌B干熱滅菌C高壓蒸汽滅菌D間歇滅巴斯德消毒法可用于（D）的消毒。A.啤酒B.葡萄酒C.牛奶.以上所有13.只能用高壓滅菌才能殺死的是（C）A.結(jié)核分枝桿菌B.病毒C.細(xì)菌的內(nèi)生孢子D.霉菌孢子四、判斷是非題（每題1分，共10分）1．為了防備雜菌，特別是空氣中的雜菌污染，試管及玻璃燒瓶都需采用適合的塞子塞口，平時(shí)采用棉花，也可采用各樣金屬、塑料及硅膠帽并在使用前進(jìn)行高溫干熱滅菌。（+）所有的微生物都能在固體培養(yǎng)基上生長，很多菌絲交織在一同，稱為菌絲體。在固體三．選擇題（每題1分，共10分）用固體培養(yǎng)基分別微生物的純培養(yǎng)是最重要的微生物學(xué)技術(shù)。（+）所有的培養(yǎng)基都是選擇性培養(yǎng)基。（+）直接挑取在平板上形成的單菌落就能夠獲得微生物的純培養(yǎng)。（+）6．顯微鏡的放大倍數(shù)越高，其視野越大。（+）所有碳源物質(zhì)既能夠?yàn)槲⑸锷L供應(yīng)碳素根源，也能夠供應(yīng)能源。（+）8．對(duì)含葡萄糖的培養(yǎng)基進(jìn)行高壓蒸汽滅菌時(shí)可在121.3加熱20即可。(+)115℃35min基礎(chǔ)培養(yǎng)基可用來培養(yǎng)所有種類的微生物。（+）可供大部分細(xì)菌生長五．問答題（共6題，其中生物工程專業(yè)全做，食品科學(xué)工程專業(yè)做前4題，共50分）1．試述革蘭氏染色的步驟和系統(tǒng)。（8分）＋菌：細(xì)胞壁厚，肽聚糖網(wǎng)狀分子形成一種透性障，當(dāng)乙醇脫色時(shí)，肽聚糖脫水而孔障減小，故保存結(jié)晶紫-碘復(fù)合物在細(xì)胞膜上。呈紫色。Gˉ菌：肽聚糖層薄，交聯(lián)松散，乙醇脫色不能夠使其構(gòu)造縮短，其脂含量高,乙醇將脂溶解，空隙加大，結(jié)晶紫-碘復(fù)合物溶出細(xì)胞壁，沙黃復(fù)染后呈紅色。革蘭氏染色法一般包括初染、媒染、脫色、復(fù)染等四個(gè)步驟，詳細(xì)操作方法是：1）涂片固定。2）草酸銨結(jié)晶紫染1分鐘。3）自來水沖刷。4）加碘液覆蓋涂面染1分鐘。5）水洗，用吸水紙吸去水分。6）加95%酒精數(shù)滴，并輕輕搖動(dòng)進(jìn)行脫色，30秒后水洗，吸去水分。7）蕃紅染色液（?。ɑ蛏滁S）染10秒鐘后，自來水沖刷。干燥，鏡檢。染色的結(jié)果，革蘭氏正反響菌體都呈紫色，負(fù)反響菌體都呈紅色。2．若是要從環(huán)境中分別獲得能利用苯作為碳源和能源的微生物純培養(yǎng)物，該怎樣設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)？（10分）將培養(yǎng)基所含的物質(zhì)定位苯和其他不能夠供應(yīng)能源和碳源的必需物質(zhì)，在培養(yǎng)基上方應(yīng)其他物質(zhì)吸取二氧化碳3．濕熱滅菌比干熱滅菌效率高的原因?（7分）濕熱滅菌法是指用飽和水蒸氣、開水或流通蒸汽進(jìn)行滅菌的方法，由于蒸汽潛熱大，穿透力強(qiáng)，簡單使蛋白質(zhì)變性或凝結(jié)，因此該法的滅菌效率比干熱滅菌法高，4．試述顯微鏡直接法和平板菌落計(jì)數(shù)法的優(yōu)缺點(diǎn)。（8分）

菌體數(shù)量不能夠做出較為宏觀,全面的反響.顯微鏡直接計(jì)數(shù)法一般與血球計(jì)數(shù)板配套使用.但顯微鏡直接計(jì)數(shù)法的優(yōu)點(diǎn)是迅速,察看到馬上能夠計(jì)數(shù).平板菌落計(jì)數(shù)法最大的缺點(diǎn)是速度慢,需要平板上長出菌落一段時(shí)間后才能計(jì)數(shù).可是由于平板菌落計(jì)數(shù)法平時(shí)做梯度稀釋,因此計(jì)數(shù)的線性范圍大.由于是菌懸液涂布,因此比較均勻,能較好的反響菌落的疏密程度.重復(fù)性,平行性很好,是經(jīng)典的計(jì)數(shù)方法.．某學(xué)生利用酪素培養(yǎng)基平板精選產(chǎn)細(xì)胞外蛋白酶細(xì)菌，在酪素培養(yǎng)基平板上發(fā)現(xiàn)有幾株菌的菌落周圍有蛋白質(zhì)水解圈，可否能僅憑蛋白質(zhì)水解圈與菌落直徑比大，就判斷該菌株產(chǎn)細(xì)胞外蛋白質(zhì)能力就大，而將其選擇為高產(chǎn)蛋白酶的菌種，為什么？（10分）答：酪素：微生物培養(yǎng)基的氨基酸氮源，由酪蛋白水解獲得，常有商品名稱為水解酪素或酶解酪素。酪蛋白水解后富含21種氨基酸，氨基酸種類齊備。因此常用于制備培養(yǎng)基。酪素培養(yǎng)基自然富含酪素。酪素實(shí)質(zhì)就是蛋白質(zhì)片段，蛋白酶有不同樣的底物對(duì)象，專一性各有不同樣，有很多蛋白酶不能夠水解酪素，因此不形成蛋白水解圈。蛋白水解圈與菌落直徑比大只能說明該種細(xì)菌該菌株產(chǎn)胞外的能夠水解酪素的蛋白酶的能力大小，而不能夠只是就判斷該菌株產(chǎn)胞外蛋白酶的能力就大或選其為高產(chǎn)蛋白酶的菌種。6.嚴(yán)格的無菌操作是所有微生物工作的基本要求，但在分別與培養(yǎng)極端嗜鹽菌常常在沒有點(diǎn)酒精燈的一般實(shí)驗(yàn)臺(tái)上傾倒培養(yǎng)平板，在平時(shí)環(huán)境中直接翻開皿蓋察看和挑取菌落，而其研究結(jié)果并沒有因此碰到影響，這是為什么？在它們生計(jì)環(huán)境中耐受或需要高鹽濃度，其他細(xì)菌不宜在該培養(yǎng)基生計(jì)。呂氏堿性美藍(lán)染液濃度和作用時(shí)間的不同樣，對(duì)酵母菌死細(xì)胞數(shù)量有何影響？試分析其原因。會(huì)造成更多的死細(xì)胞，在顯微鏡下察看，活的是透明無色，衰老的是淡藍(lán)色，死亡的是藍(lán)色，若是美藍(lán)染色液作用時(shí)間過長，會(huì)造成細(xì)胞脫水死亡并浸透染液，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。美藍(lán)是一種無毒性染料，它的氧化型是藍(lán)色的，而復(fù)原型是無色的，用它來

代謝的作用，使細(xì)胞內(nèi)擁有較強(qiáng)的復(fù)原能力，能使美藍(lán)從藍(lán)色的氧化型變?yōu)闊o色的復(fù)原型，因此酵母的活細(xì)胞無色，而關(guān)于死細(xì)胞或代謝遲緩的老細(xì)胞，則因它們無此復(fù)原能力或復(fù)原能力極弱，而被美藍(lán)染成藍(lán)色或淡藍(lán)色。因此，用美藍(lán)水浸片不只可察看酵母的形態(tài)，還能夠區(qū)分死、活細(xì)胞。但美藍(lán)的濃度、作用時(shí)間等均有影響，應(yīng)加注意。影響：會(huì)造成更多的死細(xì)胞，在顯微鏡下察看，活的是透明無色，衰老的是淡藍(lán)色，死亡的是藍(lán)色，若是美藍(lán)染色液作用時(shí)間過長會(huì)造成細(xì)胞脫水死亡并浸透染液影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。為什么說95%酒精脫色是革蘭氏染色的要點(diǎn)步驟？由于若是脫色過分，有可能會(huì)使革蘭氏陽性菌呈假陰性若是脫色不夠，有可能使革蘭氏陰性菌呈假陽性顯微鏡下，細(xì)菌、放線菌、酵母菌和霉菌的主要差異是什么？放線菌與細(xì)菌需要在油鏡下才能察看清楚，而霉菌和酵母菌在低倍鏡下即可看到。細(xì)菌：為細(xì)而短的單細(xì)胞微生物（個(gè)體渺?。?，主要形態(tài)有：球、桿、螺旋狀等。（部分桿菌還可形成芽孢）放線菌：存在分枝絲狀體和菌絲體，革蘭氏陽性菌，有孢子絲和孢子（球形、橢圓形、桿狀、柱狀）。酵母菌：單細(xì)胞，菌體呈圓球、卵形或橢圓形，少許呈檸檬形、尖形等。菌體比細(xì)菌大幾倍到幾十倍，部分處于出芽生殖過程中菌體還可察看到芽體，大部分菌體上還有芽痕。霉菌：菌絲和孢子的寬度平時(shí)比細(xì)菌和放線菌粗得多，常是細(xì)菌菌體寬度的幾倍到幾十倍，在低倍鏡下即可看到，并還可看到孢子囊梗、囊軸、孢子囊、包囊孢子等。簡述配制培養(yǎng)基的基本步驟及注意事項(xiàng)。１培養(yǎng)基配方的選定２培養(yǎng)基的制備記錄３培養(yǎng)基成分的稱?。磁囵B(yǎng)基各成份的混淆和溶化５培養(yǎng)基pH的