DB32-T 4366-2022人載脂蛋白AⅠ羊多抗血清制備技術(shù)規(guī)程

ICS65.020.20CcsB41

DB32江 蘇 省 地 方 標(biāo) 準(zhǔn)DB32/T4366-2022人載脂蛋白AⅠ羊多抗血清制備技術(shù)規(guī)程Technicalregulationsforproductionofsheepanti-humanapolipoproteinapolipoproteinAⅠpolyclonalantiserum2022-09-062022-10-06江蘇省市場監(jiān)督管理局發(fā)布前 言本文件按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利，本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。本文件由江蘇省畜牧業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會提出并歸口。江蘇省農(nóng)科院。本文件主要起草人：徐志偉、姚明霞、徐一然、溫小林、鄧碧華、于建寧、李云、胡強(qiáng)、張兆麗、譚圣偉、盛媛媛。人載脂蛋白AⅠ羊多抗血清制備技術(shù)規(guī)程范圍本文件運用于人載脂蛋白AⅠ羊多抗血清制備中羊品種選擇和飼養(yǎng)要求、免疫佐劑選用、抗原乳化、抗原接種、抗體效價評估、抗血清制備的步驟和方法。規(guī)范性引用文件本文件無規(guī)范性引用文件。術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。AⅠApolipoproteinAⅠ用于運輸血液中脂類的高密度主要載脂蛋白,A1是載脂蛋白A族中最多的一種組分，用于運輸血液中脂類的高密度主要載脂蛋白,A1是載脂蛋白A族中最多的一種組分，約占HDL顆粒的65%，主要在肝臟、部分在小腸合成。4 羊的選擇和飼養(yǎng)要求選用體重30kg—40kg10方式，每天早晚觀察羊的健康狀況。5 抗原要求人血清通過優(yōu)化PEG沉淀、離子交換吸附的方法，純度達(dá)96%。6 免疫佐劑選用首次免疫佐劑采用弗氏完全佐劑，從第二次免疫開始，采用弗氏不完全佐劑。7 抗原乳化容器中，用吸管以60滴/min的速度緩慢加入載脂蛋白AⅠ抗原溶液，用漩渦混合器以1.5萬rmp/min混合均勻，抗原溶液全部加完后，再持續(xù)混合15min?？乖臃N免疫劑量和部位每只羊免疫抗原劑量為1mg，抗原濃度為1mg/ml,為各部位平均接種。不同免疫次數(shù)間的間隔天數(shù)和部位，見表1。表1 免疫劑量和部位次數(shù)間隔天數(shù)（d）免疫接種部位第1次0腹股溝、肘部、耳后、額下、背側(cè)和足窩第2次15腹股溝、肘部、耳后、額下、背側(cè)和腹股溝淋巴結(jié)點第3~9次9腹股溝、肘部、耳后、額下和背側(cè)抗體效價評估在第7次免疫后動脈采血檢測抗體水平，采用瓊脂擴(kuò)散法進(jìn)行效價測定,效價不低于1：1616，可以判定為合格，可以采血?？寡逯苽洳裳?50mL1/5。10.2血清制備37℃1h后，把玻璃瓶從水浴鍋中取出；4500rmp/min15min乳白色或微黃色，去掉沉淀物雜質(zhì)。外觀質(zhì)量血清應(yīng)呈黃色或微紅色血清狀液體，允許少量的絮狀物或沉淀。血清保存血清用滅菌處