乙肝血清標(biāo)志物檢測

乙肝血清學(xué)標(biāo)志物

檢測及意義

山西醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院檢驗(yàn)科郭先鋒精選ppt要點(diǎn)簡介抗原組成傳染源傳播途徑病原學(xué)診斷血清學(xué)模式及臨床意義End精選ppt

前言病毒性肝炎在我國各類傳染病中發(fā)病率最高乙型病毒性肝炎在我國危害極大我國乙型肝炎患者近3千萬病毒性肝炎，一般特指由嗜肝病毒感染所引起的肝炎。HBV-屬嗜肝DNA病毒精選pptA病毒性肝炎HepatitisVirus腸道傳播腸道外傳播F,TTV?其它ENANBBDC病毒性肝炎-背景精選ppt

傳染源糞便血液/血源性物質(zhì)/體液血液/血源性物質(zhì)/體液血液/血源性物質(zhì)/體液糞便傳播途徑糞-口經(jīng)皮膚/經(jīng)粘膜經(jīng)皮膚/經(jīng)粘膜經(jīng)皮膚/經(jīng)粘膜糞-口慢性感染否是是是否病毒性肝炎類型ABCDE基因組類型ssRNAdsDNA

ssRNA

ssRNA

ssRNA精選pptHepatitisBVirus乙型肝炎的病原體乙型病毒性肝炎[1]是由乙肝病毒（HBV）引起的、以肝臟炎性病變?yōu)橹鞑⒖梢鸲嗥鞴贀p害的一種傳染病。本病廣泛流行于世界各國，主要侵犯兒童及青壯年，少數(shù)患者可轉(zhuǎn)化為肝硬化或肝癌。因此，它已成為嚴(yán)重威脅人類健康的世界性疾病，也是我國當(dāng)前流行最為廣泛、危害性最嚴(yán)重的一種傳染病。精選ppt乙型病毒性肝炎無一定的流行期，一年四季均可發(fā)病，但多屬散發(fā)。近年來乙肝發(fā)病率呈明顯增高趨勢估計全球半數(shù)以上人口已被HBV感染過，5%的人口為HBV慢性感染.中國：乙肝高發(fā)區(qū)，人群HBsAg的檢出率達(dá)9.8%精選ppt電鏡下HepatitisBVirus精選ppt乙型肝炎病毒HBV乙型肝炎病毒（HBV）為專一的嗜肝病毒，近年由于核酸分子雜交技術(shù)的進(jìn)展，在肝外器官細(xì)胞也能檢出HBV-DNA。通過北京乙肝肝病毒試驗(yàn)研究提供了在肝外細(xì)胞復(fù)制的證據(jù)。人HBV也可能在肝外細(xì)胞內(nèi)復(fù)制，有待深入研究。HBV感染者血清經(jīng)電鏡檢查有3種病毒顆粒.1.大球形顆粒，完整的HBV顆粒直徑為42nm，又名Dane顆粒，分為包膜與核心的兩部分，外衣殼及包膜含有表面抗原，衣殼內(nèi)為核心結(jié)構(gòu)，有核心抗原，核心抗原下面藏有e抗原。精選ppt乙型肝炎病毒HBV２.小球形顆粒，陽性血清中最多的顆粒，主要為表面抗原，不含核酸及ＤＮＡ成分，為不完整的ＨＢＶ．３.管形顆粒，實(shí)際上是一串小球形顆粒聚合在一起的，也含有表面抗原．精選ppt1.HBV形態(tài)結(jié)構(gòu)大球形顆粒（Dane顆粒）小球形顆粒管形顆粒精選pptHBVvirionTheinfectiousvirioniscalledtheDANEparticle.精選pptDane顆粒（完整的病毒）形態(tài)HBsAgHBcAgHBVDNADNAP（外膜蛋白）（核衣殼蛋白）精選pptBothcomprisedofHBsAg精選pptHBVnomenclatureHBV:hepatitisB

virusHBsAg:hepatitisBvirussurfaceantigenHBsAb:hepatitisBvirussurfaceantibodyHBcAg:hepatitisBviruscoreantigenHBcAb:hepatitisBviruscoreantibodyHBeAg:hepatitisBviruse

antigenHBeAb:hepatitisBviruse

antibody精選ppt抗原組成(一)--HBsAg位于病毒表面，是一種糖蛋白(曾用名：澳抗)出現(xiàn)時間：HBV感染后2～6個月（潛伏期）HBsAg有10個亞型，各亞型間存在不完全的交叉免疫。近年用亞型單克隆抗體研究表明，d和y、w和r決定簇可以同時存在于同一病毒抗原顆粒上，形成adwr、aywr、adyw和adyr復(fù)合亞型。精選ppt其機(jī)制為①不同亞型病毒的雙重感染；②單一亞型病毒感染后，有的HBV-DNA發(fā)生點(diǎn)突變。臨床表現(xiàn)病情反復(fù)，肝臟損害較重，因而有的HBV感染者血清中同時HBsAg陽性、抗-HBs陽性。4種亞型(adr,adw,ayr,ayw)。刺激機(jī)體產(chǎn)生保護(hù)性抗體即抗-HBs.精選ppt

HBsAg血清中HBsAg陽性是HBV感染的標(biāo)志。本身具有抗原性，無傳染性。但由于HBsAg常與HBV同時存在，故認(rèn)為是傳染性標(biāo)志之一。但須注意，HBV-DNA可自X基因區(qū)終點(diǎn)起逆向與肝細(xì)胞發(fā)生整合，整合后的S基因表達(dá)較強(qiáng)，不斷產(chǎn)生HBsAg，整合的HBcAg基因組被抑制，不表達(dá)HBeAg、HBcAg，在這種情況下，即使HBV已從體內(nèi)清除，而HBsAg仍可持續(xù)陽性，從理論上講，這種HBsAg陽性血液并無傳染性。精選ppt急性HBV感染后，血清中首先出現(xiàn)HBsAg，整個急性期均可陽性，至恢復(fù)期可滴度下降或轉(zhuǎn)陰。如HBsAg持續(xù)陽性半年以上，稱為慢性HBsAg攜帶者（無癥狀HBsAg攜帶者），可持續(xù)陽性達(dá)數(shù)年。一般認(rèn)為HBsAg滴度與病變程度不成比例。肝功能正常，HBsAg滴度高，肝臟可重要病變，若HBsAg陰性及DNAp陰性，表示無重要傳染性。反之，肝功能異常，HBsAg滴度不高，肝臟可有明顯病變，如有部分肝硬化、肝癌患者呈HBsAg陰性或低滴度。無癥狀HBsAg攜帶者或慢性活動性乙型肝炎均可有相同的HBsAg滴度變化不能代表病情的輕重，因此分解此不能將HBsAg滴度的變化作為判斷病情輕重和藥物治療效的指標(biāo)。

精選ppt用免疫電鏡及免疫熒光法在肝細(xì)胞漿內(nèi)證實(shí)有HBsAg,而血清中HBsAg陰性，其機(jī)制尚無確切解釋。已知原因之一是現(xiàn)用的RIA檢測法，其測試靈敏度為10-5,尚不能測出最低感染量(10-7)，因此有10%假陰性，故對HBsAg的判斷，以陽性有診斷意義，陰性不能排除HBV感染。近年發(fā)現(xiàn)血清中HBV標(biāo)志均陰性，而在白細(xì)胞或肝細(xì)胞內(nèi)檢出HBV-DNA，說明確定或除外HBV感染不能單憑HBsAg是否陽性，應(yīng)與其他標(biāo)志結(jié)合判斷。精選pptHBsAg持續(xù)時間●急性自限性肝炎：血中HbsAg大多可持續(xù)1-6周，最長可達(dá)6個月內(nèi)可消失●慢性肝炎或慢性HBsAg攜帶者：可持續(xù)陽性。精選ppt抗原組成(二)--HBcAgHBcAg為HBC復(fù)制指標(biāo).位于Dane顆粒核心部分和肝細(xì)胞核內(nèi)，在血清中不易檢出游離的HBcAg主要成分是蛋白質(zhì)刺激機(jī)體產(chǎn)生抗-HBc(非保護(hù)性抗體)存在于受感染的肝細(xì)胞核內(nèi)，有很強(qiáng)的免疫原性，在乙肝急性期、恢復(fù)期和HBsAg攜帶者中?？蓹z出抗-HBc。除非HBVC基因序列出現(xiàn)極少數(shù)變異或感染者有免疫缺陷?？?HBcIgM陽性提示急性期或慢性感染急性發(fā)作，抗HBcIgG出現(xiàn)較遲，但可保持多年或者終生。精選ppt（抗-HBs●出現(xiàn)時間：急性感染后期或HBsAg轉(zhuǎn)陰后（數(shù)月才能檢測出）.6-12月內(nèi)逐步上升至高峰，可持續(xù)多年，但滴度會逐漸下降?！窨?HBs為保護(hù)性抗體（中和抗體）其出現(xiàn)標(biāo)志著HBV感染進(jìn)入恢復(fù)期●-HBs對相同HBsAg亞型的HBV再感染有免疫力，但對不同亞型的HBV保護(hù)力不完全。精選ppt抗原組成(三)--HBeAg位于HBV的核心,是一種可溶性蛋白抗原HBeAg和Dane顆粒出現(xiàn)相平行，且與DNA多聚酶在血中的消長動態(tài)相符合血中HBeAg的出現(xiàn)可作為HBV復(fù)制及血清有感染性的指標(biāo).急性HBV感染時HBeAg的出現(xiàn)時間略晚于HBsAg，在病變極期后消失，如果HbeAg持續(xù)存在預(yù)示趨向慢性。大部分情況持續(xù)存在表示患者處于高感染低應(yīng)答期。刺激機(jī)體產(chǎn)生抗-HBe。轉(zhuǎn)換過程意味著由免疫耐受轉(zhuǎn)換為免疫激活，此時常有病變活動的激化。抗-HBe能與受染肝細(xì)胞表面的e抗原結(jié)合,通過補(bǔ)體介導(dǎo)破壞受染的肝細(xì)胞,抗-HBe的出現(xiàn)是預(yù)后良好的征象?？笻Be陽轉(zhuǎn)后，病毒復(fù)制處于靜止?fàn)顟B(tài)，傳染性降低。部分病人仍有病毒復(fù)制，肝炎活動，稱為HBeAg陰性慢性肝炎。精選pptHBVDNA是病毒復(fù)制和有傳染性最直接的證據(jù)檢測方法：斑點(diǎn)雜交法、PCR法近年用多聚酶鏈反應(yīng)（PCR）這一體外DNA擴(kuò)增技術(shù)，使靈敏度提高100倍以上（10FGfg/ml），可測出極微量的病毒。HBV-DNA-p是HBV核心所具有的DNA-p，在病毒復(fù)制過程中起逆轉(zhuǎn)酶作用。DNA-p活性是表示HBV復(fù)缺點(diǎn)活力的重要指標(biāo)。HBV-DNA及DNA-p檢測有助于判斷HBV感染者病毒復(fù)制程度及傳染性大小，較靈敏評價抗病毒藥物的療效。

乙肝精選ppt抗原組成(四)--Pre-S抗原位于HBV的外衣殼上，有兩種刺激機(jī)體產(chǎn)生抗Pre-S1和抗Pre-S2，能阻斷HBV與肝細(xì)胞受體結(jié)合，從而起到抵抗病毒的作用抗Pre-S1和抗Pre-S2的出現(xiàn)，表示病情好轉(zhuǎn)，趨向痊愈精選ppt傳染源患者潛伏期急性期慢性期無癥狀HBsAg攜帶者精選ppt

高中等低/不能檢出血液精液尿血清陰道分泌物糞便傷口滲出物唾液汗液淚液乳汁各種體液中HBV的濃度精選ppt血源性傳播輸血、注射、外科和牙科手術(shù)、針刺等剃刀、牙刷和蚊蟲叮咬等母嬰垂直傳播宮內(nèi)傳播分娩時微小皮損處傳播產(chǎn)后母嬰密切接觸性傳播HBV傳播途徑精選ppt精選ppt病原學(xué)診斷(一)--抗原抗體檢測項目：HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc以及抗-HBcIgM方法ELISA(enzyme-linkedimmunosorbentassay，最常用，定性)發(fā)光免疫分析(定量)反相間接血凝試驗(yàn)(少用)精選pptELISA的基本原理利用抗原和抗體特異性結(jié)合主要的試劑固相抗原或抗體酶標(biāo)記的抗原或抗體酶的底物精選pptELISA的主要方法間接法:測定抗-HBs夾心法：測定HBsAg和HBeAg競爭法：測定抗-HBc中和法：測定抗-HBe捕捉法：測定抗-HBcIgM精選ppt病原學(xué)診斷(二)—核酸檢測核酸雜交探針PCR引物精選ppt各項HBV血清標(biāo)志物的解釋HBsAg–HBV感染的標(biāo)志,可能是急性或慢性Anti-HBs–既往感染自然免疫/接種疫苗產(chǎn)生Anti-HBcIgM–急性HBV感染標(biāo)志Anti-HBcIgG–既往或慢性HBV感染HBeAg–病毒復(fù)制活躍，具有高度傳染性

Anti-HBe–慢性感染,病毒不再復(fù)制,低傳染性HBV-DNA–直接測定病毒復(fù)制狀態(tài)，比HBeAg更準(zhǔn)確；臨床主要用于監(jiān)測治療反應(yīng)精選ppt為什么要開展乙肝“兩對半”定量檢測乙型病毒性肝炎是世界性的傳染病，嚴(yán)重地威脅著人類的健康。我國是乙型病毒性肝炎高發(fā)病國家。據(jù)統(tǒng)計全世界無癥狀攜帶者（HBsAg攜帶者）超過2.8億，我國占1億以上，且多數(shù)無癥狀。所以乙肝的早期診斷對控制傳染源、降低發(fā)病率及疾病的治療均具有很重要的意義。酶標(biāo)（ELISA）檢測始于20世紀(jì)80年代中期，它對乙肝“兩對半”定性測定在疾病的診斷，病情監(jiān)測，療效觀察起到了一定的作用，但酶標(biāo)檢測HbsAg靈敏度較低，不能真正意義上定量測定血清中HbsAg含量。隨著臨床醫(yī)學(xué)的發(fā)展，定性檢測已經(jīng)遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足臨床及患者的要求?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析定量測定乙肝“兩對半”大大彌補(bǔ)了酶標(biāo)定性測定及靈敏度低的不足。精選ppt血清學(xué)檢測的臨床意義HBsAg抗-HBsHBeAg抗-HBe抗-HBc臨床意義

急性或慢性感染(大三陽)+-+-++++乙肝后期或慢性感染(小三陽)--++---潛伏期或急性乙肝早期--+++痊愈或恢復(fù)期,有免疫力-----+++--痊愈,有免疫力疫苗接種或曾經(jīng)感染過,有免疫力精選ppt血清學(xué)檢測的臨床意義HBsAg抗-HBsHBeAg抗-HBe抗-HBc臨床意義血清學(xué)檢測的臨床意義血清學(xué)檢測的臨床意義

急性或慢性感染(傳染性弱)+---+-++急性乙肝恢復(fù)期或既往感染------+急性窗口期或既往感染康復(fù)期-----未感染過HBV++--+++--+急性感染趨向恢復(fù);慢性攜帶者HBV感染已恢復(fù),有免疫力精選pptSymptomsHBeAganti-HBeTotalanti-HBcIgManti-HBcanti-HBsHBsAg0481216202428323652100AcuteHBVInfectionwithRecoveryTypicalSerologicCourseWeeksafterExposureTitre精選pptIgManti-HBcTotalanti-HBcHBsAgAcute(6months)HBeAgChronic(Years)anti-HBe0481216202428323652YearsWeeksafterExposureTitreProgressiontoChronicHBVInfectionTypicalSerologicCourse小結(jié)精選ppt乙肝五項檢測的影響因素1.樣本采集與處理的影響

1.1標(biāo)本嚴(yán)溶血及混有紅細(xì)胞的血清易沉淀或附著在聚乙烯孔內(nèi)不易洗凈，殘留在孔內(nèi)的血紅蛋白具有過氧化物酶樣的活性，催化底物顯色造成假陽性，嚴(yán)重溶血標(biāo)本禁用。

1.2塑料試管能吸附抗原物質(zhì)，樣本久置在塑料管內(nèi)會使樣本內(nèi)抗原含量下降造成假陰性。最好使用一次性玻璃試管或真空管采血管；并使用非抗凝標(biāo)本，肝素抗凝血漿會增加OD值，可能與高濃度肝素具有強(qiáng)大的負(fù)電荷能吸附酶標(biāo)記物不易洗脫有關(guān)；EDTA、酶抑制劑（如NaN3）可抑制ELISA系統(tǒng)中辣根過氧化物酶活性。

1.3標(biāo)本凝固不全，正常血液采集后1/2~2h開始凝固，18~24h血塊完全收縮。在工作中，有時為了爭取時間快速檢測，常在血液還未開始凝固時即強(qiáng)行離心分離血清，使血清中仍殘留部分纖維蛋白原，在ELISA測定過程中可以形成肉眼可見的纖維蛋白塊，易造成假陽性結(jié)果；因此血液標(biāo)本采集后必須使其充分凝固后再分離血清，或標(biāo)本采集時用帶分離膠的采血管或于采血管中加入適當(dāng)?shù)拇倌齽?/p>

精選ppt乙肝五項檢測的影響因素2、試劑的影響

2.1乙肝兩對半試劑廠家較多；不同廠家出產(chǎn)的試劑靈敏度與特異性存在一定的差別，有資料顯示，不同廠家試劑的特異性和敏感性分別為89.4%—99.3%,78~89%存在較大差異。有的廠家酶標(biāo)板孔間A值差大于15%；標(biāo)記酶的活性及顯色液的穩(wěn)定比較差。使用質(zhì)劣的試劑必然導(dǎo)致結(jié)果的假陽性或假陰性。因此。選擇高質(zhì)量的試劑是保證結(jié)果準(zhǔn)確的關(guān)鍵之一。

2.2不同方法學(xué)的檢測試劑，會使兩對半結(jié)果出現(xiàn)一些不同。例如：在實(shí)際工作中常用ELISA檢測HBsAg結(jié)果為陰性，而電化學(xué)發(fā)光檢測為陽性。除方法學(xué)的靈敏度外；還存在使用單抗或多克隆抗體試劑的差別。單抗對變異抗原或亞型乙肝標(biāo)志物檢測存在差異，建議試劑廠家對劑的制備應(yīng)該考慮亞型及型濃度的問題。

精選ppt乙肝五項檢測的影響因素3、干擾物質(zhì)的影響

有人認(rèn)為大約40%的人血清標(biāo)本中含有非特異性干擾物質(zhì)，可以不同程度影響檢測結(jié)果；常見的干擾物質(zhì)有：類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、嗜異性抗體、嗜靶抗原自身抗體、醫(yī)源性誘導(dǎo)的抗鼠Ig抗體、交叉反應(yīng)物質(zhì)和其它物質(zhì)等。如RF因子可與標(biāo)記二抗的FC段法結(jié)合造成假陽性，補(bǔ)體從C1q活化，使一抗和酶標(biāo)二抗的抗體分子發(fā)生變構(gòu)，F(xiàn)c的C1q分子結(jié)合點(diǎn)暴露出來，則補(bǔ)體C1q可將二者連接起來造成假陽性，采用56℃30分鐘滅活補(bǔ)體可降低假陽性率，高濃度的AFP（如孕婦），在儲存過程中可能形成二聚體會導(dǎo)致本底過深影響檢測結(jié)果。

精選ppt乙肝五項檢測的影響因素4、藥物的影響

4.1高效價的乙肝免疫球蛋白會與HBsAg形成復(fù)合物，影響HBsAg的檢出，所以一些HBsAg陽性患者注射乙肝免疫球蛋白后，HBsAg檢測會呈陰性反應(yīng)，導(dǎo)致乙肝兩對半少見模式的出現(xiàn)，如我們常遇到乙肝大三陽的孕婦，為阻斷乙肝母嬰垂直傳播時，在孕第8、9、10月常規(guī)注射乙肝免疫球蛋白，不僅影響孕婦HBsAg的檢出；而且其所生產(chǎn)的生新兒也常出現(xiàn)HBsAg陰性，HBeAg陽性和HBcAb陽性等少見模式、可能是乙肝免疫球蛋白屬IgG抗體能通過胎盤進(jìn)入胎兒體內(nèi)與胎兒血液中的HBsAg結(jié)合形成復(fù)合物；則新生兒HBsAg檢測呈陰性；用0.5ML的鹽酸處理標(biāo)本1小時可提高出率。

4.2為預(yù)防乙肝，部分HBsAg陰性人群在接種乙肝疫苗后的1—2周內(nèi)，血清中可檢出HBsAg成份，形成一過性HBsAg陽性，這可能是乙肝疫苗主要成分是HBsAg.，有方法能夠把它檢出；如電化學(xué)發(fā)光法，建議接種乙肝疫苗后1個月內(nèi)不應(yīng)作HBsAg檢測。

精選ppt乙肝DNA檢測的臨床意義HBV-DNA稱為乙肝病毒脫氧核糖核酸。乙肝病毒是一種部分雙鏈DNA病毒，也就是說它的遺傳物質(zhì)是DNA，它載有病毒所有遺傳信息，乙肝病毒靠它才可以復(fù)制、增殖、繁衍后代。研究證明，乙肝病毒的裸DNA(沒有蛋白質(zhì)包裹DNA)就有感染性，完成對宿主的侵襲，造成宿主體內(nèi)出現(xiàn)完整的乙肝病毒顆粒。也就是說HBV-DNA相當(dāng)于完整的乙肝病毒顆粒。因此，檢測HBV-DNA是判斷乙肝病毒有無復(fù)制的“金指標(biāo)”。DNA的檢測的目的主要是判斷目前患者病毒復(fù)制程度的大小，也是傳染性大小，尤其在判斷乙肝的轉(zhuǎn)歸，以及用藥前