體外診斷試劑分類和常見產(chǎn)品技術(shù)原理及應(yīng)用知識(shí)分享

體外診斷(zhěnduàn)試劑的分類和基本原理洛陽惠爾納米(nàmǐ)科技有限公司第一頁，共48頁。體外診斷試劑和器械在國外統(tǒng)一稱為(chēnɡwéi)體外診斷醫(yī)療器械。屬于醫(yī)療器械的一部分。在我國，體外診斷試劑是指：可單獨(dú)使用或與儀器、器具、設(shè)備或系統(tǒng)組合使用,在疾病的預(yù)防、診斷、治療監(jiān)測、預(yù)后觀察、健康狀態(tài)評(píng)價(jià)以及遺傳性疾病的預(yù)測過程中,用于對(duì)人體樣本(各種體液、細(xì)胞、組織樣本等)進(jìn)行體外檢測的試劑、試劑盒、校準(zhǔn)品(物)、質(zhì)控品(物)等。概念(gàiniàn)第二頁，共48頁。根據(jù)國家(guójiā)管理類別：按照產(chǎn)品風(fēng)險(xiǎn)程度的高低，體外診斷試劑依次分為第三類、第二類、第一類產(chǎn)品。不同類的產(chǎn)品在審查、批準(zhǔn)后頒發(fā)醫(yī)療器械注冊(cè)證書上由不同的機(jī)構(gòu)進(jìn)行：第三類由國家(guójiā)食品藥品監(jiān)督管理局審查、批準(zhǔn)；第二類由省級(jí)食品藥品監(jiān)督管理局審查、批準(zhǔn)；第一類由市級(jí)食品藥品監(jiān)督管理局審查、批準(zhǔn)。體外診斷(zhěnduàn)試劑的分類（一）第三頁，共48頁。第三類產(chǎn)品(chǎnpǐn)：1．與致病性病原體抗原、抗體以及核酸等檢測相關(guān)的試劑；2．與血型、組織配型相關(guān)的試劑；3．與人類基因檢測相關(guān)的試劑；4．與遺傳性疾病相關(guān)的試劑；5．與麻醉藥品(yàopǐn)、精神藥品(yàopǐn)、醫(yī)療用毒性藥品(yàopǐn)檢測相關(guān)的試劑；6．與治療藥物作用靶點(diǎn)檢測相關(guān)的試劑;7．與腫瘤標(biāo)志物檢測相關(guān)的試劑;8．與變態(tài)反應(yīng)（過敏原）相關(guān)的試劑。第四頁，共48頁。除已明確為第三類、第一類的產(chǎn)品，其他為第二類產(chǎn)品，主要包括(bāokuò)：1．用于蛋白質(zhì)檢測的試劑；2．用于糖類檢測的試劑；3．用于激素檢測的試劑；4．用于酶類檢測的試劑；5．用于酯類檢測的試劑；6．用于維生素檢測的試劑；7．用于無機(jī)離子檢測的試劑；8．用于藥物及藥物代謝物檢測的試劑；9．用于自身抗體檢測的試劑；10．用于微生物鑒別或藥敏試驗(yàn)的試劑；11．用于其他生理、生化或免疫功能指標(biāo)檢測的試劑。第二類產(chǎn)品(chǎnpǐn)：第五頁，共48頁。1．微生物培養(yǎng)基（不用于微生物鑒別和藥敏試驗(yàn)）；2．樣本處理用產(chǎn)品，如溶血(rónɡxuè)劑、稀釋液、染色液等。*注：第二類產(chǎn)品中的某些產(chǎn)品，例如蛋白質(zhì)、糖類、激素、酶類等的檢測，如果用于腫瘤的診斷、輔助診斷、治療過程的監(jiān)測，或用于遺傳性疾病的診斷、輔助診斷等，則按第三類產(chǎn)品注冊(cè)管理。在藥物及藥物代謝物檢測的試劑中，如果該藥物屬于麻醉藥品、精神藥品或醫(yī)療用毒性藥品范圍，則按第三類產(chǎn)品注冊(cè)管理。第一類產(chǎn)品(chǎnpǐn)：第六頁，共48頁。按照受理和審評(píng)分為：按照藥品受理和審評(píng)的和按照醫(yī)療器械受理審評(píng)的。一、按藥品受理和審評(píng)的體外診斷試劑(shìjì)：*1.ABO血型定型試劑(shìjì)（盒）*2.乙型肝炎表面抗原（HBsAg）試劑(shìjì)（盒）*3.丙型肝炎病毒（HCV）抗體試劑(shìjì)（盒）*4.人類免疫缺陷病毒HIV抗原/抗體診斷試劑(shìjì)（盒）*5.梅毒螺旋體抗體試劑(shìjì)（盒）6.放免試劑(shìjì)(盒)注：*號(hào)的品種，預(yù)期用途為血源篩查時(shí)按藥品受理和審評(píng)，為臨床診斷時(shí)，按第三類醫(yī)療器械進(jìn)行管理。體外診斷試劑(shìjì)的分類（二）第七頁，共48頁。二、按醫(yī)療器械受理和審評(píng)的體外診斷試劑：1、臨床血液學(xué)和體液學(xué)檢驗(yàn)試劑2、臨床化學(xué)檢驗(yàn)試劑3、臨床免疫學(xué)檢驗(yàn)試劑。4、微生物學(xué)(wēishēnɡwùxué)檢驗(yàn)試劑5、組織細(xì)胞學(xué)檢驗(yàn)試劑6、變態(tài)反應(yīng)、自身免疫診斷檢驗(yàn)試劑（盒）7、遺傳性疾病檢驗(yàn)試劑8、分子生物學(xué)檢驗(yàn)試劑9、其它檢驗(yàn)試劑（盒）體外診斷(zhěnduàn)試劑的分類（二）第八頁，共48頁。按照技術(shù)方法分：1.比色法（顏色反應(yīng)）；2.分光(fēnɡuānɡ)光度法；3.凝集法；4.散射法（沉淀反應(yīng)）；5.透射比濁法（沉淀反應(yīng)）；6.速率法、終點(diǎn)法（產(chǎn)物或底物量）；7.標(biāo)記技術(shù)；8.生物親和；9.免疫技術(shù)；10.發(fā)光技術(shù)；11.熒光技術(shù)；12.放射技術(shù)；13.形態(tài)分析；14.流式細(xì)胞；15.電泳技術(shù)；體外診斷試劑(shìjì)的分類（三）第九頁，共48頁。按照技術(shù)方法分：16.克隆技術(shù)；17.酶技術(shù)；18.基因(jīyīn)技術(shù)；19.聚合酶鏈反應(yīng)-PCR（分子生物技術(shù)）；20.雜交技術(shù)（分子生物技術(shù)）；21.印跡技術(shù)；22.層析技術(shù)；23.色譜技術(shù)；24.質(zhì)譜技術(shù)；25.溶出法；26.伏安法；27.多技術(shù)聯(lián)合應(yīng)用，如：酶聯(lián)免疫、免疫比濁、放射免疫、免疫化學(xué)發(fā)光、免疫層析、熒光雜交、免疫組化、流式熒光、電極溶出伏安法等。體外診斷試劑(shìjì)的分類（三）第十頁，共48頁。在實(shí)際應(yīng)用中，單一技術(shù)往往不能滿足檢測需要，因此，診斷試劑會(huì)聯(lián)合使用(shǐyòng)多種技術(shù)。常見的體外診斷產(chǎn)品：1.生化分析儀、生化試劑；2.酶標(biāo)儀、酶免試劑；3.免疫化學(xué)發(fā)光儀及試劑；4.膠體金（乳膠、熒光）免疫層析試劑；5.血細(xì)胞分析儀、細(xì)胞檢測試劑；6.尿液分析儀、尿液檢測試劑（試紙）；7.（血?dú)猓╇娊赓|(zhì)分析儀、電解質(zhì)試劑；8.細(xì)菌、微生物培養(yǎng)及鑒定試劑；9.免疫組化染色液、液基細(xì)胞試劑、免疫印跡試劑10.PCR儀及試劑；11.血型試劑；12.流式細(xì)胞儀。12.微量元素（原子吸收法）常見的體外診斷產(chǎn)品技術(shù)(jìshù)原理及應(yīng)用第十一頁，共48頁。生化(shēnɡhuà)分析儀、生化(shēnɡhuà)試劑全自動(dòng)生化分析儀；肝功類、腎功類等比色法、比濁法、散射(sǎnshè)法、速率法、終點(diǎn)法第十二頁，共48頁。酶標(biāo)儀、酶免試劑(shìjì)酶標(biāo)儀：比色計(jì)；酶免試劑：酶聯(lián)免疫(miǎnyì)法比色法抗原抗體特異性結(jié)合、酶作為標(biāo)記物和催化物，加入底物產(chǎn)生顏色反應(yīng)，放入比色計(jì)進(jìn)行比色。第十三頁，共48頁?；瘜W(xué)發(fā)光儀及試劑(shìjì)以酶為催化劑，通過氧化反應(yīng)，使底物發(fā)光。過氧化物酶（HRP)促發(fā)光，底物——魯米諾堿性(jiǎnxìnɡ)磷酸酶(AP)促發(fā)光，底物——螺旋金剛烷環(huán)氧化物苯磷酸酯（AMPPD)第十四頁，共48頁。非酶促化學(xué)發(fā)光(fāɡuānɡ)及電化學(xué)發(fā)光(fāɡuānɡ)非酶促化學(xué)發(fā)光：以吖啶酯、過氧化氫為發(fā)光系統(tǒng)，不需要酶的催化。儀器成本高，技術(shù)復(fù)雜，尚未國產(chǎn)化（Abbott)電化學(xué)發(fā)光：氧化反應(yīng)是通過(tōngguò)電極上的電化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生，標(biāo)記物為三氯聯(lián)吡啶釕。儀器成本高，技術(shù)復(fù)雜，尚未國產(chǎn)化。（Roche）第十五頁，共48頁。膠體金（乳膠、熒光）層析(cénɡxī)試劑膠體金免疫層析法：將特異性的抗原或抗體以條帶狀固定在膜上，膠體金標(biāo)記試劑（抗體或單克隆抗體）吸附在結(jié)合墊上，當(dāng)待檢樣本加到試紙條一端的樣本墊上后，通過毛細(xì)作用向前移動(dòng)，溶解結(jié)合墊上的膠體金標(biāo)記試劑后相互反應(yīng)，當(dāng)移動(dòng)至固定的抗原或抗體的區(qū)域時(shí)，待檢物與金標(biāo)試劑的結(jié)合物又與之發(fā)生特異性結(jié)合而被截留，聚集在檢測帶上，可通過肉眼(ròuyǎn)觀察到顯色結(jié)果。該法現(xiàn)已發(fā)展成為診斷試紙條，使用十分方便。第十六頁，共48頁。膠體金免疫(miǎnyì)層析法反應(yīng)示意圖吸樣墊膠體金墊包被T線包被C線上樣墊NC膜支撐物第十七頁，共48頁。HIV膠體金類快速(kuàisù)診斷試劑檢測結(jié)果第十八頁，共48頁。第三類）

免疫(miǎnyì)印跡試劑免疫印跡試劑盒:風(fēng)濕病自身(zìshēn)抗體檢測試劑盒（免疫印跡法）第十九頁，共48頁。免疫印跡法示意圖第二十頁，共48頁。（第四類）

蛋白芯片（微陣列）類試劑(shìjì)蛋白芯片（微陣列）：丙型肝炎病毒(bìngdú)抗體檢測試劑盒（蛋白芯片法）；多腫瘤標(biāo)志物檢測試劑盒（蛋白芯片法）第二十一頁，共48頁。（第五類）

單抗類試劑(shìjì)血型定型類試劑：血型定型試劑盒（單克隆抗體）免疫(miǎnyì)組化：ImmuChem免疫(miǎnyì)組化試劑盒（單抗）免疫(miǎnyì)比濁：血清載脂蛋白A1免疫(miǎnyì)比濁試劑盒乳膠凝集：D-dimer二聚體乳膠凝集試劑盒第二十二頁，共48頁。（第六類）

多抗類試劑(shìjì)血型定型(dìngxíng)類試劑：血型定型(dìngxíng)試劑盒（人血清/馬血清）免疫組化：癌胚抗原檢測試劑盒（多抗）免疫比濁：β-微球蛋白測定試劑盒（免疫比濁法）乳膠凝集：沙門氏菌乳膠凝集試劑盒第二十三頁，共48頁。抗原(kàngyuán)抗原(kàngyuán)：指進(jìn)入有免疫活性的組織（宿主）而引發(fā)免疫應(yīng)答的物質(zhì)。或雖不能引發(fā)免疫，但可以同抗體結(jié)合的物質(zhì)。蛋白質(zhì)，多糖，核酸，糖脂，青霉素全抗原(kàngyuán)性具有多個(gè)抗原(kàngyuán)決定族第二十四頁，共48頁?？贵w(kàngtǐ)宿主對(duì)體內(nèi)存在的外來分子，微生物或其他因子的應(yīng)答而產(chǎn)生的蛋白質(zhì)（免疫(miǎnyì)球蛋白，丙種球蛋白）根據(jù)抗體性質(zhì)：多克隆抗體，單克隆抗體根據(jù)抗體分子結(jié)構(gòu)：IgA,D,E,G,M第二十五頁，共48頁。IgGIgM抗體(kàngtǐ)模式圖第二十六頁，共48頁。單克隆抗體(kàngtǐ)由一株淋巴細(xì)胞產(chǎn)生，針對(duì)一種抗原決定族抗原免疫小鼠-取脾臟(pízàng)-與瘤細(xì)胞融合-克隆篩選-單克隆抗體細(xì)胞株擴(kuò)增細(xì)胞-注射入小鼠腹腔-采腹水-純化抗體第二十七頁，共48頁。流程雜交瘤技術(shù)(jìshù)第二十八頁，共48頁。多克隆(kèlónɡ)抗體針對(duì)多個(gè)抗原決定族抗原免疫動(dòng)物-采集(cǎijí)動(dòng)物血清純化抗體第二十九頁，共48頁。（第七類）

診斷(zhěnduàn)血清（菌液）診斷血清：侵襲(qīnxí)性大腸埃希氏菌診斷血清；志賀氏菌屬四種混合多價(jià)血清診斷菌液：傷寒沙門菌菌體（O）抗原、鞭毛（H）抗原診斷菌液第三十頁，共48頁。（第八類）

血球凝集(níngjí)類試劑抗體致敏血球：破傷風(fēng)抗體診斷(zhěnduàn)試劑（血凝法）；白喉抗體診斷(zhěnduàn)試劑（血凝法）第三十一頁，共48頁。（第九類）

核酸(hésuān)擴(kuò)增類試劑熒光PCR：乙型肝炎病毒核酸定量測定試劑盒PCR-ELISA：結(jié)核分支桿菌檢測試劑盒（核酸擴(kuò)增酶聯(lián)免疫法）PCR-毛細(xì)管電泳：性染色體多倍體（分型與突變(tūbiàn)）檢測試劑盒；PCR-電泳：α-地中海貧血基因診斷試劑盒（gap-PCR法）轉(zhuǎn)錄介導(dǎo)擴(kuò)增（TMA）：沙眼衣原體與結(jié)核分枝桿菌檢測試劑盒第三十二頁，共48頁。PCR基本原理示意圖第三十三頁，共48頁。PCR過氧化物(ɡuòyǎnɡhuàwù)酶聯(lián)物96孔酶標(biāo)法加樣分析(fēnxī)觀察(guānchá)數(shù)據(jù)PCR產(chǎn)物的檢測

96孔酶標(biāo)法

第三十四頁，共48頁。（第十類）

基因芯片(jīyīnxīnpiàn)（微陣列）類試劑基因芯片（微陣列）：α-地中海貧血基因芯片診斷試劑盒PCR-雜交(zájiāo)：人乳頭瘤病毒基因分型檢測試劑盒（PCR-反向雜交(zájiāo)法）第三十五頁，共48頁。（第十一類）

探針(tànzhēn)放大（原位雜交）類試劑bDNA類：HIV-1bDNA檢測(jiǎncè)試劑盒；mRNA檢測(jiǎncè)試劑盒(生物素原位雜交法)第三十六頁，共48頁。探針放大(fàngdà)類試劑--支鏈DNA技術(shù)病毒的RNA釋放后加入微孔板中——板孔中包被有可與病毒特異結(jié)合的一系列靶探針（TargetProbe），另一系列靶探針的一端可標(biāo)記在游離的病毒核酸鏈上，另一端可與bDNA結(jié)合——bDNA信號(hào)放大——加入酶標(biāo)記物對(duì)結(jié)合的bDNA進(jìn)行標(biāo)記——經(jīng)過清洗(qīngxǐ)后加入底物進(jìn)行反應(yīng)，測定反應(yīng)強(qiáng)度。第三十七頁，共48頁。（第十二類）

普通(pǔtōng)生化類試劑（十萬級(jí)要求）（包括酶類化學(xué)試劑、凝血試劑類等試劑）酶類化學(xué)試劑:丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）測定試劑盒；堿性(jiǎnxìnɡ)磷酸酶（ALP）測定試劑盒凝血試劑:凝血酶原時(shí)間（PT）測定試劑盒；組織纖溶酶原激活物（t-PT）測定試劑盒第三十八頁，共48頁。普通生化類試劑(十萬(shíwàn)級(jí)要求)（1）★原理：臨床普通生化類試劑是一類用于測定人血液、尿液等中各項(xiàng)生化指標(biāo)的試劑。含有各種非特異性蛋白成分，要求在十萬(shíwàn)級(jí)潔凈環(huán)境中生產(chǎn)。檢測方法均為比色法，方法學(xué)原理均為顯色反應(yīng)。

★產(chǎn)品涉及：1、酶類：含酶、輔酶與牛血清白蛋白等、劑型為干粉或液體。2、血凝類：試劑組分中含有其他活性類組分（如兔腦粉等）?！锷a(chǎn)工藝：原材料稱量、溶解、定容、中試、分裝、組裝、成品檢驗(yàn)?！镪P(guān)鍵控制點(diǎn)：原料稱量、配制、物料平衡?！都?xì)則》要求：應(yīng)在10萬級(jí)凈化環(huán)境中進(jìn)行生產(chǎn)操作。第三十九頁，共48頁。（第十三類）

普通生化類試劑（清潔環(huán)境）（包括一般化學(xué)試劑、血?dú)?xuèqì)電解質(zhì)類、血液分析儀用試劑類等）一般化學(xué)試劑：無機(jī)離子（鋁、鎘等）測定試劑盒；白蛋白測定試劑盒（BCG法）；總膽固醇測定試劑盒（COD-CE-PAP法）血?dú)怆娊赓|(zhì):電解質(zhì)分析儀隨機(jī)試劑；生化(shēnɡhuà)分析儀用稀釋液、沖洗液血液分析儀用試劑:血液分析儀用稀釋液、溶血?jiǎng)┑谒氖摚?8頁。普通生化類試劑(shìjì)（清潔環(huán)境）★原理：與普通生化試劑（十萬級(jí)要求）類相同?！锂a(chǎn)品涉及：無機(jī)離子檢測、血?dú)怆娊赓|(zhì)類、血液分析儀用試劑類等試劑?！锕に囈螅撼a(chǎn)可在清潔環(huán)境(huánjìng)中進(jìn)行操作外，生產(chǎn)工藝和關(guān)鍵控制點(diǎn)與普通生化試劑（十萬級(jí)要求）類相同。第四十一頁，共48頁。（第十四類）

干化學(xué)(huàxué)類試劑干化學(xué)試劑（條、卡或盒）：干化學(xué)尿液分析試紙條(zhǐtiáo)；尿微量白蛋白（UALB）測試卡第四十二頁，共48頁。干化學(xué)(huàxué)類試劑◆原理：以濾紙為載體，將各種試劑(shìjì)組分浸漬后干燥，作為試劑(shìjì)層，固定在支持物上，試紙上的各測試塊與被測樣品中的成分發(fā)生酶化學(xué)反應(yīng)，使試紙塊發(fā)生不同的顏色變化，顏色深淺與樣品中的成份含量成正比，再由光電耦合元件對(duì)測試塊的顏色進(jìn)行判讀，達(dá)到測定樣品中化學(xué)成分含量的目的。◆生產(chǎn)工藝主要環(huán)節(jié)：特定試劑(shìjì)的配制、試劑(shìjì)條的浸潤、干燥、切割、分包裝等；第四十三頁，共48頁。（第十五類）

藥敏類試劑(shìjì)藥敏紙片（卡）：抗生素藥敏紙片；隨機(jī)專用(zhuānyòng)藥敏試劑（盒）（卡）第四十四頁，