生物基礎知識選修1word版本

生物基礎知識匯編選修12、果酒和果醋的發(fā)酵(簡易)裝置①充氣口的作用——②排氣口的作用——提供氧氣用來取樣，對發(fā)酵情況進行監(jiān)測在酒精發(fā)酵時用來排出CO2③出料口的作用——④排氣口用長而彎曲的膠管的目的——防止雜菌污染⑤釀酒和釀醋時使用方法的差異——制酒時，關閉充氣口；制醋時，應將充氣口連接氣泵，輸入無菌空氣(氧氣)三、實驗步驟(器皿預處理→取材→沖洗→去?！鷫赫ァb瓶→培養(yǎng)、發(fā)酵)1、器皿預處理——對發(fā)酵瓶、榨汁機等用具進行清洗并消毒→無菌

(方法——溫水反復沖洗→體積分數(shù)為75%的酒精擦拭)2、取材、沖洗——選取新鮮、成熟(含糖量高)、無病變的葡萄用清水沖洗葡萄1~2遍(不反復沖洗的原因——3、去梗和腐爛(含雜菌)的葡萄——先沖洗后去枝梗?減少雜菌污染的機會4、壓榨、裝瓶——用榨汁機榨取葡萄汁；裝瓶時果汁量不超過塑料瓶總體積的2/3(原因——①提供氧氣→大量繁殖；②防止發(fā)酵旺盛時汁液溢出)5.將發(fā)酵瓶置于適宜的溫度下進行果酒發(fā)酵保留附著在葡萄皮上的野生型酵母菌)6.果酒制成后，進行果醋發(fā)酵須①向發(fā)酵液中通入無菌空氣，②調(diào)節(jié)溫度至30~35℃，③在發(fā)酵液中加入醋酸菌或醋曲(在酸性條件下，重鉻酸鉀與酒精反應呈灰綠色)四、分析與評價(一)果酒的制作是否成功初步鑒定——發(fā)酵后取樣，嗅味(酒味)和品嘗用顯微鏡觀察酵母菌，并統(tǒng)計其數(shù)量；用重鉻酸鉀檢驗酒精的存在進一步鑒定——用顯微鏡觀察醋酸菌，并統(tǒng)計其數(shù)量初步鑒定——觀察菌膜的形成、嗅味和品嘗進一步鑒定——檢測和比較醋酸發(fā)酵前后的pH；(二)果醋的制作是否成功五、其它釀制白葡萄酒的主要過程——榨汁→滅菌→加入釀酒酵母菌→發(fā)酵→產(chǎn)生乙醇、排除多余酵母菌→陳釀(如在橡木桶和地窖中進行后續(xù)發(fā)酵，以獲得特定的風味和色澤)→形成葡萄酒→裝瓶提高果酒品質(zhì)，抑制其他微生物的生長措施——直接在果汁中加入人工培養(yǎng)的酵母菌；制作果醋時，也可以直接在果酒中加入醋酸菌配制好的葡萄糖溶液用于酵母菌的無氧呼吸時需加熱煮沸的原因——除去溶液中的空氣；殺死雜菌一、基礎知識生物技術實踐二(自然發(fā)酵)腐乳的制作腐乳——一種經(jīng)過微生物發(fā)酵而形成的大豆食品(大豆→豆腐→發(fā)酵→腐乳)參與豆腐發(fā)酵的微生物——毛霉(前期起主要作用)、青霉、曲霉、酵母菌等毛霉毛霉——真核生物；分解者；代謝類型——異養(yǎng)需氧型形態(tài)特征——白色絲狀(<空氣中>直立菌絲、<培養(yǎng)基中>匍匐菌絲)生殖方式——孢子生殖豆腐上毛霉的來源傳統(tǒng)生產(chǎn)(自然發(fā)酵)——空氣中的毛霉孢子現(xiàn)代生產(chǎn)——(嚴格無菌)將優(yōu)良毛霉菌種直接接種在豆腐上原理——①前期發(fā)酵：毛霉等產(chǎn)生的蛋白酶將豆腐中的蛋白質(zhì)分解成小分子的肽和氨基酸?腐乳味道鮮美，易于消化吸收；脂肪酶可將脂肪水解為甘油和脂肪酸；②后期發(fā)酵：酶與多種微生物協(xié)同作用?生成腐乳的香氣二、實驗設計讓豆腐長出毛霉加鹽腌制密封腌制加鹵湯裝瓶(一)實驗流程毛霉發(fā)酵的適宜溫度——15~18℃(不適于細菌、酵母菌和曲霉的生長)豆腐——毛霉生長繁殖的培養(yǎng)基(二)具體操作步驟1.將豆腐切成若干塊；所用豆腐的含水量為70％左右。要點：水分不能過多的原因——水分過多，腐乳不易成形2.將豆腐塊平放在鋪有干粽葉的盤內(nèi)；豆腐塊周圍留有一定的空隙?通氣散熱，以利毛霉生長；豆腐上面再鋪上干凈的粽葉；氣候干燥時，將平盤用保鮮膜包裹，但不要封嚴要點：粽葉的作用——可以提供菌種，并能起到保溫的作用保鮮膜不要封嚴的原因——以免濕度太高，不利于毛霉的生長3.將平盤放入溫度保持在15~18℃的地方；毛霉逐漸生長4.當毛霉生長旺盛，并呈淡黃色時，去除保鮮膜以及鋪在上面的粽葉?使豆腐塊的熱量和水分能夠迅速散失，同時散去霉味5.當豆腐涼透后，拉斷豆腐間的菌絲6.加鹽腌制：毛坯與鹽的質(zhì)量分數(shù)比為5:1；_____________________________________________________，以防止雜菌從瓶口進入分層加鹽，并隨層加高而增加鹽量，在瓶口表面鋪鹽厚些7.黃酒、米酒和糖＋香辛料(如胡椒)→制成鹵湯；酒精含量12％左右8.將腐乳咸坯擺入瓶中，加入鹵湯和輔料后，將瓶口用酒精燈加熱滅菌，用膠條密封(三)操作提示加鹽的作用——①析出豆腐中的水分?豆腐塊變硬；②抑制微生物的生長，避免豆腐塊腐敗變質(zhì)控制鹽的用量的原因——鹽的濃度過低，不足以抑制微生物的生長，可能導致豆腐腐敗變質(zhì)；鹽的濃度過高，會影響腐乳的口味。鹵湯中酒精含量控制在12％左右的原因——①酒精含量過高?對蛋白酶的抑制作用大?腐乳成熟時間延長；②酒精含量過低?難以抑制微生物生長，豆腐易腐?。痪凭窟^低?蛋白酶的活性高?蛋白質(zhì)水解加快?影響腐乳的色、味鹵湯加酒的作用——①抑制微生物的生長；②使腐乳具有獨特的香味加香辛料的作用——①調(diào)制腐乳的風味；②防腐殺菌三、結果分析與評價(一)是否完成腐乳的制作依據(jù)——前期發(fā)酵后豆腐表面長有菌絲；后期發(fā)酵基本沒有雜菌的污染(二)腐乳質(zhì)量的評價制作成功的腐乳的特點——色澤基本一致；味道鮮美、咸淡適口、無異味；塊形整齊、厚薄均勻、質(zhì)地細膩、無雜質(zhì)四、其它酶與微生物(協(xié)同參與生化反應)毛霉等產(chǎn)生的蛋白酶和脂肪酶等酶使蛋白酶作用緩慢，促進其他生化反應?生成腐乳的香氣①析出豆腐中的水分；②抑制微生物的生長①使豆腐表面形成一層菌膜?腐乳的“體”；②毛霉分泌蛋白酶等酶?催化蛋白質(zhì)等水解咸胚→腐乳毛胚→咸胚白胚→毛胚后期發(fā)酵(密封腌制)加鹵湯裝瓶加鹽腌制前期發(fā)酵(讓豆腐長出毛霉菌絲)發(fā)揮作用的成分作用主要變化實驗流程影響腐乳風味和質(zhì)量的因素——鹽、酒的用量；發(fā)酵的溫度、發(fā)酵時間的長短；香辛料；菌種和雜菌等。腐乳外部一層致密的“皮”的成因、作用——“皮”是前期發(fā)酵時在豆腐表面上生長的菌絲(匍匐菌絲)；它能形成腐乳的“體”，使腐乳成形(“皮”對人體無害)生物技術實踐三探討加酶洗衣粉的洗滌效果一、基礎知識加酶洗衣粉——含酶制劑的洗衣粉(用特殊化學物質(zhì)包裹酶?與其他成分隔離)加酶洗衣粉中常用的酶制劑——①蛋白酶、②淀粉酶、③脂肪酶、④纖維素酶，其中應用最廣泛、效果最明顯的是——堿性蛋白酶和堿性脂肪酶堿性蛋白酶能清除血漬、奶漬的原理——堿性蛋白酶能將血漬、奶漬等含有的大分子蛋白質(zhì)水解成可溶性的氨基酸或小分子的肽普通洗衣粉的去污能力主要來自——表面活性劑污漬中的不溶于水的大分子有機物可溶于水的小分子有機物相應酶制劑(利用酶的專一性)(酶本身無毒且易被微生物分解)使用加酶洗衣粉可減少環(huán)境污染的原因——使用加酶洗衣粉可以降低表面活性劑和三聚磷酸鈉的用量，使洗滌劑朝低磷無磷的方向發(fā)展添加了復合酶的洗衣粉去污能力更強淀粉酶可催化水解醬、粥等污漬；纖維素酶可使織物增艷、去除顆粒性污垢加酶洗衣粉中的酶沒有被固定化相同時間內(nèi)污物的殘留狀況或污物徹底洗凈所用的時間)二、實驗設計——探究不同溫度[X]對加酶洗衣粉洗滌效果[f(X)]的影響變量實驗變量——水溫(5℃<冬季>、15℃<春季>、25℃<秋季>和35℃<夏季>，符合一年中的實際氣溫變化情況)無關變量——水量、水質(zhì)、洗衣粉的用量，衣物的質(zhì)料、大小及浸泡時間和洗滌的時間、酶制劑的種類、污物的類型及量(=污染程度)等。因變量——洗滌效果(指標——洗滌材料用布料(衣物不理想)的原因——①對照時，易控制布料的大小、顏色以及污物的量，使其相同；②便于洗滌效果的比較。1.相關問題其它——①用滴管控制污物的量，待污物干燥后再進行實驗；②布料應放在洗衣粉溶液中浸泡相同的時間；③采用玻璃棒或筷子攪拌的方式模擬洗衣過程；④模擬攪拌的時間、次數(shù)和力量應基本相同。2.實驗方案的設計⑴實驗材料——⑵水溫、水質(zhì)及水量——添加了復合酶的洗衣粉，大小相同的白棉布4塊(在上面分別滴加4滴同種的植物油，放置至干燥)。水溫的溫度梯度為5℃、15℃、25℃和35℃；水質(zhì)為自來水(水質(zhì)——硬水，如河水；軟水，如自來水)三、其它子課題探究普通洗衣粉和加酶洗衣粉對同一衣物污漬的洗滌效果探究同一種類的加酶洗衣粉對相同污漬、不同布料的洗滌效果污物的殘留狀況的指標——污物是否消失、顏色變淺程度、面積縮小情況等用全自動洗衣機效果較佳的原因——科學且更有利于控制變量不同布料——化纖、棉布等堿性蛋白酶能使蛋白質(zhì)水解，羊毛、蠶絲等織物不能用加酶洗衣粉洗滌添加了堿性蛋白酶的洗衣粉可以分解人體皮膚表面蛋白質(zhì)，應避免與這類洗衣粉長時間地接觸。生物技術實踐四酵母細胞的固定化一、基礎知識缺點優(yōu)點固定化細胞固定化酶直接用酶(一)直接使用酶、固定化酶與固定化細胞①固定后的細胞不易與反應物充分接觸?反應速率下降；②大分子物質(zhì)難以自由通過細胞膜?固定化細胞不能用于催化大分子物質(zhì)的反應①成本低；②操作容易；③對酶活性的影響更?。虎芸梢源呋幌盗械姆磻?；⑤容易回收；①只催化一種化學反應；②固定后的酶與反應物不易充分接觸?反應速率下降①既能與反應物接觸，又能與產(chǎn)物分離?提高產(chǎn)品的質(zhì)量；②固定在固相載體上的酶可被反復利用?降低生產(chǎn)成本①酶易失活；②難回收，不能再次利用，生產(chǎn)成本高；③反應后酶混在產(chǎn)物中，影響產(chǎn)品質(zhì)量催化效率高，耗能低、污染低(二)固定化細胞——(主要)吸附法和包埋法固定化酶多用化學結合法(、交聯(lián)法)和物理吸附法，不宜(也可)用包埋法的原因——①酶分子很小，易被吸附或結合；②個小的酶容易從包埋材料中漏出固定化細胞多用包埋法，不宜采用化學結合法和物理吸附法的原因——①細胞個大，不易從包埋材料中漏出；②個大的細胞難以被吸附或結合。包埋法——將微生物、動物和植物細胞等包埋在不溶于水的多孔性載體中，最常用的是凝膠包埋法CaCl2溶液的作用——(聚沉)使海藻酸鈉溶液形成凝膠海藻酸鈉溶液凝膠珠(濃度改變→孔徑改變)CaCl2吸附法——制備固定化動物細胞的主要方法(動物細胞大多具附著特性)(三)固定化酶技術的應用實例——高果糖漿的生產(chǎn)原理——葡萄糖葡萄糖異構酶果糖含小孔的篩板——酶顆粒無法通過，而反應溶液可以自由出入休眠狀態(tài)正常生活狀態(tài)二、實驗操作(一)制備固定化酵母細胞1.酵母細胞的活化——蒸餾水、攪拌酵母細胞活化時體積變大?選擇體積足夠大的容器，以免活化液溢出2.配制CaCl2溶液3.配制海藻酸鈉溶液(最關鍵)①海藻酸鈉濃度過高?凝膠珠不呈圓形或橢圓形(很難形成凝膠珠)；海藻酸鈉溶液過低?凝膠珠包埋的酵母菌數(shù)目少(凝膠珠顏色過淺、呈白色)②溶化海藻酸鈉的正確加熱方法——小火間斷加熱(?以免焦糊)4.海藻酸鈉溶液與酵母細胞混合將海藻酸鈉溶液冷卻至室溫→加入已活化的酵母菌→充分攪拌(使其混合均勻)→轉(zhuǎn)移至注射器中。5.固定化酵母細胞以恒定的速度緩慢地將注射器中的溶液滴加到配制好的CaCl2溶液中→將凝膠珠在CaCl2溶液中浸泡30min左右?以便形成穩(wěn)定的結構(二)用固定化酵母細胞發(fā)酵(無氧呼吸產(chǎn)生酒精)1.將固定好的酵母細胞用蒸餾水沖洗2～3次?去除CaCl2等雜質(zhì)和雜菌2.10％的葡萄糖溶液(或無菌麥芽汁)+固定好的酵母細胞→25℃下發(fā)酵海藻酸鈉≈聚乙烯醇(PVA)+海藻酸鈉氯化鈣溶液≈飽和硼酸+氯化鈣溶液1.觀察凝膠珠的顏色和形狀三、課題成果評價合格的凝膠珠——①用手擠壓，不容易破裂，沒有液體流出；②在實驗桌上用力摔打很容易彈起；③呈圓形或橢圓形2.觀察發(fā)酵的葡萄糖溶液利用固定的酵母細胞發(fā)酵產(chǎn)生酒精，可以看到產(chǎn)生了很多氣泡(無氧呼吸產(chǎn)生的CO2)，同時會聞到酒味類型現(xiàn)象酒精發(fā)酵醋酸發(fā)酵氣味和味道酒味酸味氣泡和泡沫有氣泡和泡沫無氣泡和泡沫發(fā)酵液顏色混濁混濁，液面形成白色菌膜生物技術實踐五DNA的粗提取與鑒定一、基礎知識提取DNA的基本思路——利用DNA與RNA、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)在物理和化學性質(zhì)方面的差異，提取DNA，去除其他成分DNA的溶解性①0.14mol/L的NaCl溶液?DNA溶解度最小?DNA析出，蛋白質(zhì)等雜質(zhì)溶解；2mol/L的NaCl溶液?DNA溶解度很大?DNA溶解，蛋白質(zhì)等雜質(zhì)析出②DNA純化原理——95%的冷酒精使DNA析出，脂肪等雜質(zhì)溶解DNA對高溫、酶和洗滌劑的耐受性——大多數(shù)蛋白質(zhì)在60~80℃的高溫時會變性，DNA在80℃以上才變性；蛋白酶能水解蛋白質(zhì)，不能水解DNA；洗滌劑能瓦解細胞膜，但對DNA沒有影響DNA的鑒定——在沸水浴的條件下，DNA遇二苯胺會被染成藍色DNA的溶解度NaCl溶液的濃度(mol/L)0.14二、實驗設計(一)實驗材料的選取實驗材料——DNA含量相對較高的生物組織，如雞血、菜花(花椰菜)、洋蔥要點多用雞血的原因——①雞血細胞核中DNA含量豐富，材料易得；②雞血細胞極易吸水脹破。(用動物肝臟作實驗材料常需勻漿和離心)不用哺乳動物(如豬)成熟紅細胞的原因——無細胞核等，細胞中無DNA(二)破碎細胞，獲取含DNA的濾液破碎雞血細胞的方法——在雞血細胞液中加入一定量的蒸餾水，同時用玻璃棒攪拌(細胞膜、核膜破裂)(用1~2層紗布過濾后收集濾液<含核物質(zhì)>)破碎洋蔥細胞方法——在切碎的洋蔥中加入一定量的洗滌劑和食鹽→攪拌和研磨

→過濾收集研磨液(研磨不充分?提取的DNA量少)加入洗滌劑和食鹽的作用——洗滌劑能溶解細胞膜，有利于DNA的釋放；食鹽有利于DNA的溶解(三)去除濾液中的雜質(zhì)方案一方法——在濾液中加入NaCl?使NaCl溶液濃度為2mol/L→過濾除去不溶的雜質(zhì)；加蒸餾水?調(diào)節(jié)NaCl溶液濃度為0.14mol/L?析出DNA，(多層紗布?濾取DNA于紗布上)過濾去除溶液中的雜質(zhì)；……原理——DNA在不同濃度的NaCl溶液中溶解度的不同(?除去多種雜質(zhì))(除去血漿的原因——血漿無DNA，含大量雜質(zhì)蛋白等)方案二原理——方法——蛋白酶能分解雜質(zhì)蛋白?使DNA與蛋白質(zhì)分開(酶的專一性)直接在濾液中加入嫩肉粉(嫩肉粉中含木瓜蛋白酶)方案三原理——方法——DNA和蛋白質(zhì)對高溫耐受性不同?蛋白質(zhì)變性，與DNA分離將濾液放在60~75℃的恒溫水浴箱中(四)DNA的析出與鑒定析出純化方法——在濾液中加入體積相等的、冷卻的體積分數(shù)為95%的酒精溶液→靜置→出現(xiàn)白色絲狀物(粗提取的DNA)→玻璃棒沿一個方向攪拌(目的——防止DNA斷裂)→卷起絲狀物用冷卻酒精的原因——DNA在冷卻的酒精中凝集效果較佳鑒定步驟取兩支相同試管，編號為A、B，向A、B兩試管內(nèi)各加入等量的2mol/L的NaCl溶液；在A試管中放入絲狀物，并用玻璃棒攪拌，使其溶解，B試管不放；將兩支試管置于沸水浴中加熱一段時間；在兩支試管中各加入等量的二苯胺試劑，并混合均勻；試管冷卻后，觀察比較兩試管中溶液顏色的變化現(xiàn)象——A試管溶液呈藍色(顏色的深淺與溶液中DNA含量成正比)；B試管溶液不呈藍色結論——絲狀物中含DNA三、操作提示①血液中加入檸檬酸鈉的作用——防止血液凝固②加入洗滌劑后，動作要輕柔——避免產(chǎn)生大量泡沫③加入酒精后用玻璃棒攪拌時，動作要輕緩——以免加劇DNA分子的斷裂，導致DNA分子不能形成絮狀沉淀④二苯胺試劑要現(xiàn)配現(xiàn)用——否則會影響鑒定的效果提取蛋白質(zhì)比提取DNA的難度大的原因——①與DNA相比，蛋白質(zhì)對溫度、鹽濃度、pH等條件要敏感得多，很容易失活；②蛋白質(zhì)的空間結構多種多樣，理化性質(zhì)各不相同，使得蛋白質(zhì)的提取沒有一種統(tǒng)一的方法生物技術實踐六微生物的分離與培養(yǎng)一、基礎知識培養(yǎng)基——按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長繁殖(或積累代謝產(chǎn)物)的營養(yǎng)基質(zhì)液體培養(yǎng)基瓊脂(凝固劑)固體培養(yǎng)基(實驗室最常用的培養(yǎng)基之一)基本組成——水、碳源、氮源、無機鹽其他要求pH——

細菌生長的最適PH為中性或微堿性(6.5~7.5)；霉菌生長的最適PH值為酸性(5.0~6.0)特殊營養(yǎng)物質(zhì)——維生素等，如培養(yǎng)乳酸桿菌時需添加維生素氧氣——培養(yǎng)厭氧型微生物需提供無氧條件例：牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基營養(yǎng)構成(牛肉膏蛋白胨來源于動物原料，含糖、維生素、有機氮等營養(yǎng)物質(zhì))組分牛肉膏5g蛋白胨10gNaCl5gH2O定容至1000mL營養(yǎng)碳源、磷酸鹽和維生素氮源和維生素無機鹽氫、氧元素㈡菌落(肉眼可見)單個微生物生長、繁殖固體培養(yǎng)基表面(或內(nèi)部)1個菌落子細胞群體?獲得所需微生物的純培養(yǎng)物一定形態(tài)結構?分類、鑒定㈠培養(yǎng)基分離原理——根據(jù)微生物對營養(yǎng)成分、氧氣、pH等要求不同，只提供目的微生物生長的必需條件，或加入某些抑制劑使非目的微生物不能生長選擇培養(yǎng)基定義——允許特定種類的微生物生長，同時抑制或阻止其他種類微生物生長的培養(yǎng)基示例無碳(或含無機碳源)培養(yǎng)基?選擇分離自養(yǎng)型微生物無氮培養(yǎng)基?選擇分離自生固氮菌含青霉素的培養(yǎng)基?選擇分離酵母菌和霉菌(、抗青霉素的細菌)尿素作為(唯一)氮源的培養(yǎng)基

?選擇分離分解尿素的細菌(合成脲酶，催化尿素分解成氨，以利農(nóng)作物吸收)水凝固劑氮源碳源無機鹽(緩沖pH等)作用水瓊脂尿素葡萄糖KH2PO4、Na2HPO4等成分㈢微生物分離纖維素作為(唯一)碳源的培養(yǎng)基

?選擇分離分解纖維素的微生物(合成分泌纖維素酶，催化纖維素分解成葡萄糖)無機鹽水氮源、維生素等碳源氮源等KCl等作用水酵母膏、水解酪素纖維素粉NaNO3成分土壤——微生物的天然培養(yǎng)基(富含有機質(zhì)的土壤表層有大量微生物)無瓊脂?液體培養(yǎng)基㈣無菌技術(獲得純凈培養(yǎng)物的關鍵?防止外來雜菌的入侵)無菌技術的目的①防止實驗室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染；②有效避免操作者自身被微生物感染。消毒與滅菌消毒——

使用較為溫和的物理或化學方法僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對人體有害的微生物(不包括芽孢和孢子)?部分滅菌滅菌——使用強烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有微生物，包括芽孢和孢子無菌技術(即所有防止雜菌污染的方法)的主要內(nèi)容①對實驗操作的空間、操作者的衣著和手，進行清潔和消毒；②將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等進行滅菌；③為避免周圍環(huán)境中微生物的污染，實驗操作應在酒精燈火焰附近進行

——④實驗操作時，應避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周圍的物品相接觸。酒精燈的火焰旁能形成一個無菌區(qū)域；實驗室常用的消毒和滅菌方法高溫致死的機理——高溫使微生物的蛋白質(zhì)和核酸等重要的生物大分子發(fā)生不可逆的變性(破壞蛋白質(zhì)等的空間結構)高溫滅菌的類型——干熱滅菌和濕熱滅菌(水蒸氣加速蛋白質(zhì)變性，效果更好)消毒方法措施適用對象煮沸消毒法100℃、5~6min日常生活常用(殺死微生物的營養(yǎng)細胞和一部分芽孢)巴氏消毒法70~75℃，30min或80℃，15min不耐高溫的液體，如牛奶(殺死微生物且營養(yǎng)成分不被破壞)化學藥劑酒精擦試雙手(皮膚及機械)氯氣水源石碳酸先噴灑石碳酸或煤酚皂(加強)，后紫外線照射接種室、接種箱、超凈工作臺(殺死物體表面或空氣中的微生物)煤酚皂紫外線在富含纖維素的環(huán)境中尋找纖維素分解菌，如樹林中多年落葉形成的腐殖土，多年積累的枯枝敗葉等。滅菌方法措施適用對象灼燒滅菌直接在酒精燈火焰的充分燃燒層(溫度最高)灼燒(迅速徹底)接種環(huán)、接種針、金屬用具(接種工具)；試管口或瓶口(在接種過程中易被污染的部位)干熱滅菌干熱滅菌箱160~170℃，1~2h吸管、培養(yǎng)皿(玻璃器皿)、金屬用具(能耐高溫的、需保持干燥的物品)高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌鍋加水，排出冷空氣100kPa，121℃，15~30min培養(yǎng)基日常生活中食品保存的方法——食品保存可以通過保持干燥、真空的條件，以及冷藏等方法來阻止微生物的生長。無土栽培、植物組織培養(yǎng)、微生物的培養(yǎng)三者在設計思路和具體操作上的異同——這三種培養(yǎng)技術都需要為培養(yǎng)物提供充足的營養(yǎng)，但無土栽培技術的操作并不需要保證無菌的條件，而其他兩種技術都要求嚴格的無菌條件。巴斯德設計的鵝頸瓶實驗有力地駁斥了“自然發(fā)生論”，證明微生物只能從微生物產(chǎn)生，不能從沒有生命的物質(zhì)自然產(chǎn)生。二、實驗操作㈠制備100mL牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基步驟要點原因計算牛肉膏0.5g、蛋白胨1g、NaCl0.5g、瓊脂2g、蒸餾水定容至100mL稱量玻棒挑取牛肉膏置于稱量紙上稱牛肉膏比較黏稠稱取牛肉膏、蛋白胨時動作要迅速，稱后要及時蓋上瓶蓋牛肉膏、蛋白胨都容易吸潮溶化牛肉膏及稱量紙+水→加熱溶化去紙→加蛋白胨+氯化鈉→攪拌溶解→加瓊脂→加熱→瓊脂完全熔化后→加蒸餾水定容至100mL加入瓊脂后需不斷攪拌防止瓊脂糊底而導致燒杯破裂滅菌配制好的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到錐形瓶→加棉塞→包牛皮紙→皮筋勒緊→高壓蒸汽滅菌；培養(yǎng)皿→幾層舊報紙包緊→干熱滅菌高壓蒸汽滅菌時棉塞外包牛皮紙防止冷凝水沾濕棉塞，影響透氣和滋生微生物干熱滅菌時物品勿接觸內(nèi)壁鐵板防止包裝紙烤焦起火倒平板培養(yǎng)基冷卻至50℃左右(液體)；在酒精燈火焰附近倒平板

防止瓊脂凝固；酒精燈的火焰旁能形成一個無菌區(qū)域㈡倒平板1、倒平板的操作步驟⑴將滅過菌的培養(yǎng)皿放在火焰旁的桌面上，右手拿裝有培養(yǎng)基的錐形瓶，左手拔出棉塞。⑵右手拿錐形瓶，使瓶口迅速通過火焰。⑶用左手的拇指和食指將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，右手將錐形瓶中的培養(yǎng)基(約10~20mL)倒入培養(yǎng)皿，左手立即蓋上培養(yǎng)皿的皿蓋。⑷等待平板冷卻凝固(大約需5~10min)后，將平板倒過來放置，使皿蓋在下、皿底在上。2、倒平板的要點可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時，就可以進行倒平板了。⑵使錐形瓶的瓶口通過火焰的原因——⑴估計培養(yǎng)基溫度約為50℃左右的方法——通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。⑶平板冷凝后須倒置的原因——平板冷凝后，皿蓋上會凝結水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，①既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地揮發(fā)，②又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。

⑷皿蓋與皿底之間濺有培養(yǎng)基的平板最好不用來培養(yǎng)微生物的原因——空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生。㈢純化大腸桿菌——使聚集在一起的微生物分散成單個細胞?從而在培養(yǎng)基表面形成單個菌落?1個菌落來自1個細胞的生長繁殖?微生物的純培養(yǎng)物1、最常用的微生物接種(純化)方法⑴平板劃線法——通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散(單個細菌→單個菌落)到培養(yǎng)基的表面。⑵稀釋涂布平板法——將菌液進行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進行培養(yǎng)。(稀釋度足夠高：單個細菌→單個菌落)2、平板劃線法⑴平板劃線操作步驟①將接種環(huán)放在火焰上灼燒，直到接種環(huán)燒紅。②在火焰旁冷卻接種環(huán)，并打開盛有菌液的試管的棉塞。③將試管口通過火焰。④將已冷卻的接種環(huán)伸入菌液中，沾取一環(huán)菌液。⑤將試管口通過火焰，并塞上棉塞。⑥左手將皿蓋打開一條縫隙，右手將沾有菌種的接種環(huán)迅速伸入平板內(nèi)，劃三至五條平行線，蓋上皿蓋。注意不要劃破培養(yǎng)基。⑦灼燒接種環(huán)，待其冷卻后，從第一區(qū)域劃線的末端開始往第二區(qū)域內(nèi)劃線。重復以上操作，在三、四、五區(qū)域內(nèi)劃線。注意不要將最后一區(qū)的劃線與第一區(qū)相連。⑧將平板倒置，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)多少1更少2特少3稀少4單個5⑵平板劃線要點①在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)的原因——A.操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；B.每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結束后接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。②在劃線操作結束時，仍需灼燒接種環(huán)的原因——劃線結束后灼燒接種環(huán)能及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細菌污染環(huán)境和感染操作者。③在灼燒接種環(huán)之后，要等其冷卻后再進行劃線的原因——以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。④在做第二次以及其后的劃線操作時，總是從上一次劃線的末端開始劃線的原因——劃線后，線條末端細菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個細菌繁殖而來的菌落。菌液101稀釋液102稀釋液103稀釋液104稀釋液105稀釋液106稀釋液1mL1mL1mL1mL1mL1mL3、稀釋涂布平板法⑴系列稀釋操作步驟9mL稀釋倍數(shù)①將分別盛有9mL水的6支試管滅菌，并按101~106的順序編號。②用移液管吸取1mL培養(yǎng)的菌液，注入101倍稀釋的試管中。用手指輕壓移液管上的橡皮頭，吹吸三次，使菌液與水充分混勻。③從101倍稀釋的試管中吸取1mL稀釋液，注入102倍稀釋的試管中，重復第2步的混勻操作。依次類推，直到完成最后一次試管的稀釋。