移植排斥反應(yīng)的預(yù)測(cè)、診斷試劑盒的開發(fā)生產(chǎn)

PAGEPAGE34EvaluationWarning:ThedocumentwascreatedwithSpire.Docfor.NET.項(xiàng)目建議書項(xiàng)目領(lǐng)域：：生物技術(shù)項(xiàng)目名稱：：移植排斥反反應(yīng)的預(yù)預(yù)測(cè)、診診斷試劑劑盒的開開發(fā)生產(chǎn)產(chǎn)單位：陜西瑞奇生生物科技技有限公公司基本信息1..項(xiàng)目負(fù)負(fù)責(zé)人基基本情況況姓名胡軍性別男出生年月1962..10學(xué)歷研究生學(xué)位博士獲得最終學(xué)位院校第四軍醫(yī)大大學(xué)所學(xué)專業(yè)移植免疫學(xué)學(xué)現(xiàn)從事專業(yè)業(yè)移植免疫學(xué)學(xué)職稱講師職務(wù)務(wù)/主要工作經(jīng)經(jīng)歷1982--19889年，在在河南省省確山縣縣衛(wèi)生防防疫站從從事流行行病防治治工作。1989--19992年，在第四軍醫(yī)大學(xué)微生物學(xué)教研室病毒及其免疫專業(yè)讀碩士學(xué)位。1992--19996年在在第四軍軍醫(yī)大學(xué)學(xué)微生物物學(xué)教研研室從事事病毒及及其免疫疫和移植植免疫的的研究工工作。1996--19999年，在在第四軍軍醫(yī)大學(xué)學(xué)西京醫(yī)醫(yī)院心血血管病研研究所移移植免疫疫學(xué)專業(yè)業(yè)讀博士士學(xué)位。1999--20001年在第第四軍醫(yī)醫(yī)大學(xué)西西京醫(yī)院院心血管管病研究究所從事事移植免免疫學(xué)研研究。2001年年至今，從從事生物物技術(shù)產(chǎn)產(chǎn)品的開開發(fā)研究究，主要要從事移移植免疫疫學(xué)產(chǎn)品品的開發(fā)發(fā)工作。主要工作成成績(jī)從事過(guò)的主主要重大大項(xiàng)目情情況、研研究成果果和獲知知識(shí)產(chǎn)權(quán)權(quán)情況（不不限字?jǐn)?shù)數(shù)）1、軍隊(duì)重重大課題題《心肺肺聯(lián)合移移植臨床床研究》220022.055-20005..12主要參參加者。項(xiàng)項(xiàng)目進(jìn)展展順利。2、《心臟臟移植臨臨床與基基礎(chǔ)研究究》項(xiàng)目目的主要要參加者者，已獲獲得陜西西省科技技進(jìn)步一一等獎(jiǎng)。3、已獲得得國(guó)家發(fā)發(fā)明專利利一項(xiàng)，已申請(qǐng)的發(fā)明專利一項(xiàng)，準(zhǔn)備申請(qǐng)的專利兩項(xiàng)。2.項(xiàng)目基基本信息息項(xiàng)目?jī)?nèi)容摘摘要（限限5000字）：：器官移移植排斥斥反應(yīng)預(yù)預(yù)測(cè)、診診斷產(chǎn)品品的開發(fā)發(fā)生產(chǎn)器官移植是是臨床上上發(fā)展最最迅速的的一個(gè)領(lǐng)領(lǐng)域，據(jù)據(jù)權(quán)威機(jī)機(jī)構(gòu)預(yù)測(cè)測(cè)，到二二十一世世紀(jì)中葉葉，外科科手術(shù)的的一半都都將是器器官置換換。世界界上已有有70多多萬(wàn)人接接受了器器官移植植，而且且這個(gè)數(shù)數(shù)字還在在以每年年5萬(wàn)多多例的速速度增加加，但臨臨床上對(duì)對(duì)器官移移植病人人的選擇擇及移植植后排斥斥反應(yīng)的的無(wú)創(chuàng)診診斷、監(jiān)監(jiān)測(cè)手段段等尚未未建立起起來(lái)；這嚴(yán)重重制約了了器官移移植的發(fā)發(fā)展和水水平的提提高。本項(xiàng)目把基基因工程程技術(shù)和和傳統(tǒng)免免疫學(xué)方方法及新新建立的的免疫學(xué)學(xué)方法結(jié)結(jié)合起來(lái)來(lái)，制備備世界通通用的HHLA抗抗原標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)細(xì)胞，為為器官移移植前的的供、受體搭搭配，移移植后排排斥反應(yīng)應(yīng)的預(yù)測(cè)測(cè)、診斷斷提供快快捷、敏敏感、特特異、可可靠、無(wú)創(chuàng)的科科學(xué)檢測(cè)測(cè)方法，該該方法目目前已用用于臨床床心臟移移植的排排斥反應(yīng)應(yīng)的診斷斷，經(jīng)過(guò)過(guò)大量的的臨床活活檢對(duì)照照有很好好的一致致性，該該方法的的最佳反反應(yīng)條件件也已基基本建立立，目前前只需制制備出通通用檢測(cè)測(cè)試劑盒盒生產(chǎn)所所需的原原材料即即可進(jìn)行行產(chǎn)品的的大規(guī)模模生產(chǎn)。該該項(xiàng)目的的成功填填補(bǔ)了世世界器官官移植領(lǐng)領(lǐng)域的空空白，對(duì)對(duì)急性排排斥反應(yīng)應(yīng)的早發(fā)發(fā)現(xiàn)、早早診斷、早早治療，明明顯提高高移植患患者的生生存質(zhì)量量，延長(zhǎng)長(zhǎng)存活期期限均具具有革命命性的重重要作用用。不但但具有廣廣泛的社社會(huì)效益益，而且且還具有有巨大的的經(jīng)濟(jì)效效益。該該試劑盒盒的出現(xiàn)現(xiàn)會(huì)大力力推動(dòng)器器官移植植領(lǐng)域的的發(fā)展，終終將使全全球器官官移植的的總體水水平有明明顯提高高。本項(xiàng)目原材材料的制制備使用用的技術(shù)術(shù)是目前前最先進(jìn)進(jìn)的基因因工程技技術(shù)；其其所用的的混合淋淋巴細(xì)胞胞培養(yǎng)方方法是目目前免疫疫學(xué)專家家公認(rèn)的的，反映映機(jī)體細(xì)細(xì)胞免疫疫狀態(tài)最最好的體體外模型型；所用用的混合合淋巴細(xì)細(xì)胞反應(yīng)應(yīng)抑制試試驗(yàn)是我我們近期期才新建立的的一個(gè)細(xì)細(xì)胞免疫疫學(xué)檢測(cè)測(cè)的新方方法，并并已申請(qǐng)請(qǐng)專利，故故本項(xiàng)目目產(chǎn)品短短期內(nèi)被被其他更更先進(jìn)的的技術(shù)和和方法所所取代的的可能性性不大。所所使用的的主要原原材料和和主要技技術(shù)均立立足國(guó)內(nèi)內(nèi)，采購(gòu)購(gòu)渠道通通暢。器官移植排排斥反應(yīng)應(yīng)預(yù)測(cè)、診診斷、監(jiān)監(jiān)測(cè)領(lǐng)域域在世界界上屬于于一個(gè)尚尚未開發(fā)發(fā)的領(lǐng)域域,尚未未有與排排斥反應(yīng)應(yīng)診斷有有關(guān)的試試劑盒推推出,我們申申請(qǐng)國(guó)內(nèi)內(nèi)外專利利后可保保護(hù)200年。目目前排斥斥反應(yīng)預(yù)預(yù)測(cè)試劑劑盒已獲獲國(guó)家發(fā)發(fā)明專利利，正在在申請(qǐng)美美、日、德德、英、印印五國(guó)的的專利；；排斥反反應(yīng)診斷斷試劑盒盒已申請(qǐng)請(qǐng)國(guó)家發(fā)發(fā)明專利利。本產(chǎn)產(chǎn)品的出出現(xiàn)將搶搶占全球球器官移移植領(lǐng)域域產(chǎn)品的的至高點(diǎn)點(diǎn)。本項(xiàng)目產(chǎn)品品以出口口為主，市市場(chǎng)約44-5億億美元//年（市市場(chǎng)上無(wú)無(wú)同類競(jìng)競(jìng)爭(zhēng)產(chǎn)品品）。預(yù)預(yù)計(jì)總投投資約550000萬(wàn)元人人民幣，首首期投資資需10000--15000萬(wàn)元元人民幣幣。投資資到位后后18--24個(gè)個(gè)月可具具備批量量投產(chǎn)條條件，生生產(chǎn)能力力為年產(chǎn)產(chǎn)80萬(wàn)萬(wàn)套，投投產(chǎn)一年年后年產(chǎn)產(chǎn)1500萬(wàn)套。屆屆時(shí)，年年銷售收收入200億元人人民幣，稅稅收3億億元人民民幣，凈凈利潤(rùn)88億元人人民幣。產(chǎn)產(chǎn)品上市市后一年年可收回回全部投投資。二、項(xiàng)目情情況1、研究的的目的及及意義、應(yīng)應(yīng)用需求求、研究究開發(fā)的的必要性性（不限限字?jǐn)?shù)）1.1項(xiàng)目目研究的的目的、意意義針對(duì)危害人人類健康康的各器器官的終終末期疾疾病，器器官移植植是目前前唯一的治療手手段。器官移移植術(shù)前前排斥反反應(yīng)的預(yù)預(yù)測(cè)、術(shù)術(shù)后排斥斥反應(yīng)的的監(jiān)測(cè)與與診斷，以以及最大大限度地地減少甚甚至避免免病理排排斥反應(yīng)應(yīng)的發(fā)生生等是臨臨床器官官移植急急需解決決的問(wèn)題題，也是是國(guó)內(nèi)外外共同關(guān)關(guān)注的熱熱點(diǎn)和難難點(diǎn)問(wèn)題題。本項(xiàng)項(xiàng)目通過(guò)過(guò)基因工工程技術(shù)術(shù)和細(xì)胞胞工程技技術(shù)，建建立HLLA抗原原標(biāo)準(zhǔn)細(xì)細(xì)胞檢測(cè)測(cè)平臺(tái)，為為器官移移植前的的供受體體搭配、移移植后排排斥反應(yīng)應(yīng)的預(yù)測(cè)測(cè)、監(jiān)測(cè)測(cè)、診斷、預(yù)預(yù)防和技技術(shù)服務(wù)務(wù)保障提提供快捷捷、敏感感、特異異、可靠靠、無(wú)創(chuàng)的科科學(xué)檢測(cè)測(cè)方法。該項(xiàng)目目的成功功填補(bǔ)了了世界器官官移植領(lǐng)領(lǐng)域的空空白，對(duì)對(duì)排斥反反應(yīng)的早早發(fā)現(xiàn)、早早診斷、早早治療，明明顯提高高移植患患者的生生存質(zhì)量量，延長(zhǎng)長(zhǎng)存活期期限均具具有革命命性的重重要作用用。不但但具有廣廣泛的社社會(huì)效益益，而且且還具有有巨大的的經(jīng)濟(jì)效效益。該該試劑盒盒的出現(xiàn)現(xiàn)會(huì)大力力推動(dòng)器器官移植植領(lǐng)域的的發(fā)展，終終將使全全球器官官移植的的總體水水平有明明顯提高高。由于該項(xiàng)目目填補(bǔ)了了世界器官官移植領(lǐng)領(lǐng)域的空空白，它它的出現(xiàn)現(xiàn)將搶占占全球器器官移植植領(lǐng)域產(chǎn)產(chǎn)品的至至高點(diǎn)。將使我國(guó)在世界生物技術(shù)產(chǎn)品領(lǐng)域擁有一席之地。為我國(guó)生物技術(shù)的產(chǎn)業(yè)化發(fā)展開辟一個(gè)新領(lǐng)域，對(duì)促進(jìn)我國(guó)生物技術(shù)產(chǎn)業(yè)向多元化發(fā)展具有重要意義。1.2應(yīng)用用需求及及研究開開發(fā)的必必要性器官移植是是目前臨臨床上發(fā)發(fā)展最迅迅速的一一個(gè)領(lǐng)域域,有有人預(yù)測(cè)測(cè),到到二十一一世紀(jì)中中葉,外科手手術(shù)的一一半都將將是器官官置換..目前前世界上上已有770多萬(wàn)萬(wàn)人接受受了器官官移植,,而且且這個(gè)數(shù)數(shù)字還在在以每年年近5萬(wàn)的的速度增增加,但目前前臨床上上對(duì)器官官移植病病人的選選擇都是是通過(guò)HHLA抗抗原配型型來(lái)比較較供受體體差異的的大小，這這種比較較只是對(duì)對(duì)供受體體HLAA抗原的的客觀存存在的差差異性進(jìn)進(jìn)行比較較，不能能反映他他們各自自HLAA抗原組組合的功功能狀況況，而不不同的抗抗原組合合具有不不同的免免疫反應(yīng)應(yīng)性，所所以，原原來(lái)的方方法不能能反映一一個(gè)人的的HLAA抗原組組合對(duì)人人類某一一個(gè)HLLA抗原原的免疫疫反應(yīng)性性。而本本方法是是一個(gè)功功能性檢檢測(cè)方法法，是了了解一個(gè)個(gè)人的HHLA抗抗原組合合對(duì)各種種不同特特定抗原原反應(yīng)性性的方法法。這一一方法所所得結(jié)果果更接近近人體內(nèi)內(nèi)實(shí)際的的免疫反反應(yīng)狀況況。目前前對(duì)移植植后排斥斥反應(yīng)的的確定主主要是通通過(guò)有創(chuàng)創(chuàng)，痛苦苦、非特特異的活活檢穿刺刺方法。臨臨床上急急需的快快捷、敏敏感、特特異、可可靠、無(wú)創(chuàng)的科科學(xué)手段段尚未建建立。再再者器官官移植后后,受體體需終生生使用免免疫抑制制劑,但服用用該藥的的劑量過(guò)過(guò)大不僅僅導(dǎo)致費(fèi)費(fèi)用增加加(一般般一年需需數(shù)萬(wàn)元人人民幣)),且且受體易易患感染染性疾病病及惡性性腫瘤等等,服服用劑量量過(guò)小又又會(huì)導(dǎo)致致移植器器官被排排斥而失失去功能能,如如何對(duì)具具體的個(gè)個(gè)體選擇擇合適的的用藥劑劑量是長(zhǎng)長(zhǎng)期以來(lái)來(lái)困擾臨臨床醫(yī)生生的一個(gè)個(gè)難題。多多年來(lái)指指導(dǎo)用藥藥的“金指標(biāo)標(biāo)”一直是是上述的的活檢穿穿刺,但由于于活檢穿穿刺費(fèi)用用高且有有創(chuàng)、痛痛苦,不易為為病人接接受,而且穿穿刺本身身具有危危險(xiǎn)性,,不宜宜多做,,故移移植后在在醫(yī)生未未察覺(jué)的的情況下下突然因因排斥反反應(yīng)使移移植器官官失去功功能而導(dǎo)導(dǎo)致病人人死亡情情況屢有有發(fā)生。再再如,許多病病人在移移植后,,由于于經(jīng)濟(jì)原原因而停停用免疫疫抑制劑劑,結(jié)結(jié)果發(fā)現(xiàn)現(xiàn)其中有有些病人人停藥后后并不發(fā)發(fā)生排斥斥反應(yīng),,也就就是說(shuō)這這些病人人對(duì)供體體器官產(chǎn)產(chǎn)生了免免疫耐受受，在未未停藥的的患者中中，實(shí)際際上可能能有不少少患者已已對(duì)供體體器官產(chǎn)產(chǎn)生了耐耐受。然然而，由由于沒(méi)有有一個(gè)科科學(xué)的指指標(biāo)去檢檢測(cè)并說(shuō)說(shuō)明該患患者已對(duì)對(duì)供體器器官產(chǎn)生生了耐受受，所以以，醫(yī)生生很難確確定停用用免疫抑抑制劑的的時(shí)機(jī)，從從而，使使移植后后停用免免疫抑制制劑成為為一種冒冒險(xiǎn)。因因此，本本方法將將對(duì)器官官移植前前的供受受體選擇擇、移植植后的排排斥反應(yīng)應(yīng)的確定定以及停停用免疫疫抑制劑劑時(shí)機(jī)的的掌控有有革命性性的貢獻(xiàn)獻(xiàn)。器官移植是是治療許許多器官官終末期期疾病的的唯一方方法。在在器官移移植后，供供受體間間HLAA抗原的的差異將將引起排排斥反應(yīng)應(yīng)，排斥斥反應(yīng)仍仍是目前前影響心心、肝、腎腎、骨髓髓等器官官或細(xì)胞移植后11年、55年、110年存存活率的的主要因因素，如果有有一個(gè)在在移植以以前可以以挑選供供受體使使之合理理搭配((即挑選選那些移移植后可可能發(fā)生生排斥反反應(yīng)較輕輕或不發(fā)發(fā)生排斥斥反應(yīng)的的供受體體進(jìn)行移移植,這一點(diǎn)點(diǎn)對(duì)骨髓髓移植尤尤為重要要)、在在移植后后能檢測(cè)測(cè)有無(wú)排排斥反應(yīng)應(yīng)發(fā)生、移移植器官官有無(wú)淋淋巴細(xì)胞胞慢性浸浸潤(rùn)及受受體對(duì)供供體器官官有無(wú)免免疫耐受受發(fā)生等等的無(wú)創(chuàng)創(chuàng)檢測(cè)方法法,對(duì)對(duì)指導(dǎo)臨臨床醫(yī)生生合理調(diào)調(diào)整免疫疫抑制劑劑用量、使之適適時(shí)停藥藥(將大大大減輕輕病人的的經(jīng)濟(jì)負(fù)負(fù)擔(dān)),,提高高病人生生存質(zhì)量量，降低低移植病病人的死死亡率,,延長(zhǎng)長(zhǎng)移植器器官的存存活時(shí)間間具有重重要意義義,這將將有力推推動(dòng)器官官移植事事業(yè)的發(fā)發(fā)展。所以,隨隨著接受受器官移移植的患患者的不不斷增加加及移植植免疫學(xué)學(xué)的迅速速發(fā)展,,建立立一套完完善的移移植前對(duì)對(duì)供受體體選擇,,移植植后監(jiān)測(cè)測(cè)受體對(duì)對(duì)供體特特異性免免疫狀態(tài)態(tài)的無(wú)創(chuàng)創(chuàng)檢測(cè)方方法,對(duì)供體體器官的的長(zhǎng)期存存活已變變得越來(lái)來(lái)越重要要。但在在本方法法出現(xiàn)以以前,臨床上上尚沒(méi)有有一個(gè)快快捷、敏敏感、特特異、可可靠、無(wú)創(chuàng)的科科學(xué)的指指標(biāo)來(lái)指指導(dǎo)移植植前供體體的挑選選,移移植后排排斥反應(yīng)應(yīng)和免疫疫耐受的的診斷,,及免疫疫抑制劑劑用量調(diào)調(diào)整的方方法。2．主要研研究開發(fā)發(fā)內(nèi)容、擬擬解決的的技術(shù)難難點(diǎn)、創(chuàng)創(chuàng)新突破破點(diǎn)以及及預(yù)期達(dá)達(dá)到的目目標(biāo)、主主要經(jīng)濟(jì)濟(jì)技術(shù)指指標(biāo)和水水平（不不限字?jǐn)?shù)數(shù)）2.1本項(xiàng)項(xiàng)目研究究開發(fā)的的主要內(nèi)內(nèi)容：將傳統(tǒng)免疫疫學(xué)檢測(cè)測(cè)方法和和現(xiàn)代分分子生物物學(xué)技術(shù)術(shù)有機(jī)結(jié)結(jié)合，建建立一套套可應(yīng)用用于臨床床器官移移植排斥斥反應(yīng)預(yù)預(yù)測(cè)的快快捷、敏敏感、特特異、可可靠、無(wú)創(chuàng)的科科學(xué)方法法；在進(jìn)進(jìn)行傳統(tǒng)統(tǒng)免疫學(xué)學(xué)研究過(guò)過(guò)程中建建立一個(gè)個(gè)全新的的免疫學(xué)學(xué)方法，應(yīng)應(yīng)用于排排斥反應(yīng)應(yīng)的臨床床診斷。主主要研究究?jī)?nèi)容有有：(1)排斥斥反應(yīng)預(yù)預(yù)測(cè)：它是運(yùn)用分分子生物物學(xué)技術(shù)術(shù)，建立立表達(dá)HHLA--Ⅰ類和Ⅱ類抗原原的標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)細(xì)胞株株，使每每株細(xì)胞胞上只表表達(dá)一個(gè)個(gè)HLAA抗原。再再把這些些幾乎包包含了人人類全部部HLAA抗原的的細(xì)胞株株的細(xì)胞胞分別放放入細(xì)胞胞培養(yǎng)板板各孔之之中，制制成標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)細(xì)胞板板作為抗抗原板，用用該抗原原板通過(guò)過(guò)混合淋淋巴細(xì)胞胞培養(yǎng)方方法來(lái)檢檢測(cè)受體體對(duì)哪些些HLAA抗原反反應(yīng)強(qiáng)、對(duì)對(duì)哪些HHLA抗抗原反應(yīng)應(yīng)弱，從從而指導(dǎo)導(dǎo)我們?yōu)闉槭荏w挑挑選合適適的供體體器官，以以減少移移植后排排斥反應(yīng)應(yīng)的發(fā)生生。其主主要研究究?jī)?nèi)容包包括：A、HLAA抗原缺缺失細(xì)胞胞系（作作為HLLA抗原原表達(dá)的的空白細(xì)細(xì)胞載體體）的選選擇與鑒鑒定，已已完成。B、通過(guò)EEB病毒毒感染的的方法建建立包含含已知人類類全部HHLA抗抗原的幾幾十個(gè)細(xì)細(xì)胞系（該該項(xiàng)工作作已經(jīng)基基本完成成），并并分別從從這些細(xì)細(xì)胞中提提取mRRNA進(jìn)進(jìn)行反轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)錄，再再通過(guò)PPCR方方法從反反轉(zhuǎn)錄的的cDNNA中克克隆出目目的基因因進(jìn)行測(cè)測(cè)序，該該項(xiàng)工作作正在進(jìn)進(jìn)行中，已已經(jīng)完成成了其中中一部分分。C、選擇一一種能在在真核細(xì)細(xì)胞中表表達(dá)、并并且能整整合到宿宿主細(xì)胞胞基因組組中的逆逆轉(zhuǎn)錄病毒表表達(dá)載體體，構(gòu)構(gòu)建HLLA抗原原表達(dá)載載體，該該項(xiàng)工作作正在進(jìn)進(jìn)行中（已已構(gòu)建出出10余余個(gè)抗原原表達(dá)載載體）。D、把HLLA抗原原表達(dá)載載體經(jīng)包包裝后轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)染入細(xì)細(xì)胞中表表達(dá)（正正在進(jìn)行行中）。E、篩選穩(wěn)穩(wěn)定表達(dá)達(dá)某一個(gè)個(gè)HLAA抗原的的細(xì)胞建建株、并并進(jìn)行鑒鑒定。F、重復(fù)上上述工作作，建立立分別表表達(dá)不同同HLAA抗原近近1000個(gè)亞型型抗原的的細(xì)胞株株。G、探索用用這些細(xì)細(xì)胞株作作為刺激激細(xì)胞進(jìn)進(jìn)行混合合淋巴細(xì)細(xì)胞反應(yīng)應(yīng)的最佳佳條件。H、建立這這些細(xì)胞胞株的大大規(guī)模培培養(yǎng)條件件，用這這些細(xì)胞胞制備包包含人類類全部HHLA抗抗原的檢檢測(cè)板。I、用這種種HLAA抗原檢檢測(cè)板，通通過(guò)混合合淋巴細(xì)細(xì)胞反應(yīng)應(yīng)為器官官移植受受者挑選選供體，同同時(shí)對(duì)移移植后的的患者進(jìn)進(jìn)行監(jiān)測(cè)測(cè)，發(fā)現(xiàn)現(xiàn)已對(duì)供供體器官官產(chǎn)生免免疫耐受受的患者者，并指指導(dǎo)其逐逐漸停用用免疫抑抑制劑。J、建立用用這些細(xì)細(xì)胞株作作為刺激激細(xì)胞進(jìn)進(jìn)行混合合淋巴細(xì)細(xì)胞反應(yīng)應(yīng)抑制試試驗(yàn)的最最佳條件。(2)排斥斥反應(yīng)等等的診斷斷：在進(jìn)行移植植免疫學(xué)學(xué)的研究究過(guò)程中中，我們們又建立立了一個(gè)個(gè)全新的的免疫學(xué)學(xué)方法，由由于其實(shí)實(shí)驗(yàn)方法法與混合合淋巴細(xì)細(xì)胞反應(yīng)應(yīng)相似，反反應(yīng)結(jié)果果和混合合淋巴細(xì)細(xì)胞反應(yīng)應(yīng)結(jié)果完全全相反，暫暫時(shí)我們們把它叫叫做混合合淋巴細(xì)細(xì)胞反應(yīng)應(yīng)抑制試試驗(yàn)，該該實(shí)驗(yàn)可可以用來(lái)來(lái)檢測(cè)外外周血中中活化淋淋巴細(xì)胞胞的特異異性，故故使用上上述HLLA抗原原板即可可檢測(cè)器器官移植植受者體體內(nèi)有無(wú)無(wú)HLAA抗原活活化的淋淋巴細(xì)胞胞，從而而判斷體體內(nèi)有無(wú)無(wú)排斥反反應(yīng)發(fā)生生。該方方法不但但可以用用于診斷斷排斥反反應(yīng)，也也可能用用于各種種傳染病病的診斷斷和預(yù)防防。⑴挑選上述述已被EEB病毒毒轉(zhuǎn)化的的細(xì)胞株株中相互互不具有有相同抗抗原的細(xì)細(xì)胞株，以以他們?yōu)闉檩d體，通通過(guò)上述述基因工工程的方方法，把把其它的的未包含含在所挑挑選的載載體中的的HLAA抗原分分別轉(zhuǎn)入入其中并并表達(dá)，使使一個(gè)細(xì)細(xì)胞表達(dá)達(dá)盡可能能多的HLAA抗原。從從而使這這些細(xì)胞胞株表達(dá)達(dá)幾乎人人類全部部的HLLA抗原原。⑵用這些表表達(dá)較多多HLAA抗原的的細(xì)胞株株制備HHLA抗抗原板，通通過(guò)混合合淋巴細(xì)細(xì)胞反應(yīng)應(yīng)抑制試試驗(yàn)對(duì)器器官移植植病人進(jìn)進(jìn)行排斥斥反應(yīng)監(jiān)監(jiān)測(cè),并并探索其其最佳反反應(yīng)條件件。⑶選擇上述述兩種細(xì)細(xì)胞板中中的一種種細(xì)胞板板進(jìn)行混混合淋巴巴細(xì)胞反反應(yīng)抑制制試驗(yàn)，對(duì)對(duì)器官移移植后的的患者進(jìn)進(jìn)行排斥斥反應(yīng)監(jiān)監(jiān)測(cè)、診斷和預(yù)預(yù)防。⑷對(duì)混合淋淋巴細(xì)胞胞反應(yīng)抑抑制試驗(yàn)驗(yàn)方法在在臨床感感染性疾疾病診斷斷方面的的應(yīng)用進(jìn)進(jìn)行探索索性研究究，爭(zhēng)取取早日把把該方法法應(yīng)用到到流腦、乙乙腦病毒毒、出血血熱病毒毒、水痘痘病毒、麻麻疹病毒毒、腮腺腺炎病毒毒、呼吸吸道合胞胞病毒、SSARSS病毒等等疾病的的診斷和和感染性性疾病疫疫苗接種種后的免免疫效果果評(píng)價(jià)方方面。2.2擬擬解決的的技術(shù)難難點(diǎn)：建立、篩選選穩(wěn)定表表達(dá)單一一HLAA抗原的的各種細(xì)細(xì)胞株。表達(dá)HLAA抗原的的細(xì)胞株株的大規(guī)規(guī)模培養(yǎng)養(yǎng)技術(shù)。2.3創(chuàng)新新突破點(diǎn)點(diǎn)：（1）利用用基因工工程技術(shù)術(shù)建立百百余種分分別只表表達(dá)一種種HLAA抗原的的標(biāo)準(zhǔn)細(xì)細(xì)胞株，把把這些細(xì)細(xì)胞株和和傳統(tǒng)免免疫學(xué)技技術(shù)結(jié)合合建立人人類混合合淋巴細(xì)細(xì)胞反應(yīng)應(yīng)板，在在世界上上首次建建立一個(gè)個(gè)世界通通用的、體體外檢測(cè)測(cè)一個(gè)個(gè)個(gè)體對(duì)每每個(gè)HLLA抗原原反應(yīng)性性的方法法。該方方法已獲獲國(guó)家發(fā)發(fā)明專利利（見附附件）。（2）建立立了一個(gè)個(gè)全新的的、可以以用來(lái)檢檢測(cè)機(jī)體體內(nèi)活化化淋巴細(xì)細(xì)胞特異異性的免免疫學(xué)方方法（目目前世界界上還沒(méi)沒(méi)有一個(gè)個(gè)檢測(cè)體體內(nèi)活化化淋巴細(xì)細(xì)胞特異異性的方方法），并并在世界界上推廣廣該方法法用于排排斥反應(yīng)應(yīng)的診斷斷和預(yù)防防。2.4預(yù)期期達(dá)到的的目標(biāo)2.4.11過(guò)22-3年年的工作作，完成成上述HHLA--Ⅰ類抗原原、HLLA-‖‖類抗原原近1000個(gè)亞亞型抗原原的表達(dá)達(dá)、并使使之具備備生產(chǎn)條條件。通過(guò)3-44年的工作作，用于于移植前前挑選供供、受體使之之合理搭搭配的檢測(cè)試劑劑盒，用用于移植植后排斥斥反應(yīng)監(jiān)監(jiān)測(cè)、診診斷的試試劑盒均均拿到生生產(chǎn)批號(hào)號(hào)，投放放并滿足足國(guó)內(nèi)市市場(chǎng)的需需求，同同時(shí)開始始進(jìn)軍國(guó)國(guó)外市場(chǎng)場(chǎng)。2.5主要要技術(shù)指指標(biāo)和水水平：2.5.11主要技技術(shù)指標(biāo)標(biāo)：（1）表達(dá)達(dá)10多多種和表表達(dá)單種種HLAA抗原的的細(xì)胞株株，具有有穩(wěn)定表表達(dá)、傳代能能力。（2）移植植前用于于預(yù)測(cè)，可可以了解解一個(gè)個(gè)個(gè)體對(duì)每每個(gè)HLLA抗原原分子的的反應(yīng)性性；移植植后用于于診斷，可可以確定定受體對(duì)對(duì)供體所所含抗原原有無(wú)免免疫耐受受發(fā)生。（3）移植植后用于于診斷，不不但可以以確定排排斥反應(yīng)應(yīng)的發(fā)生生與否，而而且還可可以確定定受體對(duì)對(duì)哪一個(gè)個(gè)HLAA抗原產(chǎn)產(chǎn)生了排排斥反應(yīng)應(yīng)，精確確到每一一種抗原原亞型。（4）建立立哺乳動(dòng)動(dòng)物細(xì)胞胞大規(guī)模模培養(yǎng)的的技術(shù)平平臺(tái)，建建立和掌掌握500升、3300升升動(dòng)物細(xì)細(xì)胞大規(guī)規(guī)模培養(yǎng)養(yǎng)的技術(shù)術(shù)條件。2.5.22水平：：①預(yù)測(cè)、診診斷排斥斥反應(yīng)的的試劑盒盒達(dá)到世世界領(lǐng)先先水平。②有關(guān)細(xì)胞胞大規(guī)模模培養(yǎng)的的技術(shù)達(dá)達(dá)到國(guó)內(nèi)內(nèi)先進(jìn)水水平。2.6經(jīng)經(jīng)濟(jì)指標(biāo)標(biāo)：①預(yù)測(cè)、診診斷排斥斥反應(yīng)的的試劑盒盒國(guó)內(nèi)上上市后年年利稅達(dá)達(dá)到一億億元人民民幣。出出口年創(chuàng)創(chuàng)匯4-6億美金金。②各種傳染染性疾病病檢測(cè)試試劑盒投投放市場(chǎng)場(chǎng)后，可可創(chuàng)造不不少于排排斥反應(yīng)應(yīng)檢測(cè)試試劑盒所所能創(chuàng)造造的效益益。綜上分分折，本本項(xiàng)目預(yù)預(yù)計(jì)投資資50000萬(wàn)元元，首期期投資需需10000-115000萬(wàn)元人人民幣。投投資到位位后188-244個(gè)月可可具備批批量投產(chǎn)產(chǎn)條件，生生產(chǎn)能力力為年產(chǎn)產(chǎn)80萬(wàn)萬(wàn)套，投投產(chǎn)一年年后年產(chǎn)產(chǎn)1500萬(wàn)套。屆屆時(shí)，年年銷售收收入200億元人人民幣，稅稅收3億億元人民民幣，凈凈利潤(rùn)88億元人人民幣。產(chǎn)產(chǎn)品上市市后一年年可收回回全部投投資。33、預(yù)期期可獲得得的發(fā)明明專利等等知識(shí)產(chǎn)產(chǎn)權(quán)情況況（不限限字?jǐn)?shù)）①目前已獲獲得國(guó)內(nèi)內(nèi)發(fā)明專專利一個(gè)個(gè)，專利利號(hào)為：：0011137747..6(見見符件))，其在美、英英、德、日日、印度度的專利利申請(qǐng)正正在進(jìn)行行中。②我們建立立的免疫疫學(xué)新方方法的也也已申請(qǐng)請(qǐng)專利。44、項(xiàng)目目國(guó)內(nèi)外外發(fā)展現(xiàn)現(xiàn)狀與趨趨勢(shì)，國(guó)國(guó)內(nèi)現(xiàn)有有技術(shù)基基礎(chǔ)，與與項(xiàng)目有有關(guān)的技技術(shù)領(lǐng)域域的國(guó)內(nèi)內(nèi)外專利利申請(qǐng)和和授權(quán)情情況以及及其他知知識(shí)產(chǎn)權(quán)權(quán)情況((附有關(guān)關(guān)查新結(jié)結(jié)論)（不不限字?jǐn)?shù)數(shù)）4.1國(guó)內(nèi)內(nèi)外技術(shù)術(shù)現(xiàn)狀及及發(fā)展趨趨勢(shì)目前,臨臨床器官官移植后后對(duì)移植植排斥反反應(yīng)的最最終診斷斷主要靠靠活組織織穿刺檢檢查來(lái)確確定,如如心臟移移植，目目前急性性排斥反反應(yīng)仍然然是影響響心臟移移植病人人長(zhǎng)期存存活的主主要因素素，病人人接受心心臟移植植后，世世界上各各移植中中心的普普遍做法法是通過(guò)過(guò)心內(nèi)膜膜活檢來(lái)來(lái)監(jiān)測(cè)或或診斷排排斥反應(yīng)應(yīng)，尤其其是移植植后第一一年內(nèi)，可可能要進(jìn)進(jìn)行多次次心內(nèi)膜膜活檢，由由于活檢檢穿刺具具有一定定的創(chuàng)傷傷和危險(xiǎn)險(xiǎn)，而且且還要昂昂貴的費(fèi)費(fèi)用，病病人比較較痛苦，不不易為醫(yī)醫(yī)生和病病人所接接受，所所以國(guó)內(nèi)內(nèi)大多數(shù)數(shù)心臟移移植單位位都很少少正規(guī)地地給患者者做定期期活檢。為為建立一一個(gè)風(fēng)險(xiǎn)險(xiǎn)小，快快捷、敏敏感、特特異、可可靠、無(wú)創(chuàng)、費(fèi)用低低、醫(yī)生生和病人人都樂(lè)于于接受的的排斥反反應(yīng)的監(jiān)監(jiān)測(cè)、診診斷的科學(xué)方法法，國(guó)內(nèi)內(nèi)外研究究人員都都進(jìn)行了了大量工工作。他他們先后后對(duì)心肌肌鈣蛋白白T、心心肌鈣蛋蛋白I[[1,22,3,,4]，降降鈣素前前體，腫腫瘤壞死死因子、IIL－22、ILL－6[[5,66]、nntoppterrin[[7]、CC反應(yīng)蛋蛋白[88]及eechoocarrdioograaphiicffuncctioonallinndiccesorstrresss-veeloccityyreelattionnlooopss[9,,10,,11]]、bbraiinnnatrriurretiicppepttidee[122]等等在器官官移植排排斥反應(yīng)應(yīng)診斷中中的意義義進(jìn)行了了大量研研究，結(jié)結(jié)果均不不理想。目目前，臨臨床移植植排斥反反應(yīng)的診診斷主要要靠臨床床醫(yī)生的的經(jīng)驗(yàn)、一一些移植植器官的的功能性性指標(biāo)((一旦發(fā)發(fā)現(xiàn)器官官功能有有改變,,就表明明器官的的損傷已已相當(dāng)嚴(yán)嚴(yán)重了，時(shí)機(jī)太晚！)和一些非特異的免疫學(xué)指標(biāo)(如白細(xì)胞移動(dòng)抑制試驗(yàn),C反應(yīng)蛋白檢測(cè),淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn),淋巴細(xì)胞亞群分析及一些細(xì)胞因子監(jiān)測(cè)等的結(jié)果)。雖然一些大的移植中心試圖把混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)、CTL殺傷實(shí)驗(yàn)等細(xì)胞免疫的特異性指標(biāo)引入器官移植后排斥反應(yīng)的臨床診斷,但由于他們未建立標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞株,所以他們只能把一個(gè)一個(gè)供體的脾細(xì)胞凍存起來(lái)作為刺激細(xì)胞或靶細(xì)胞,而且只能做一對(duì)一的檢查,即一個(gè)供體對(duì)一個(gè)受體做檢查,由于每一個(gè)凍存脾細(xì)胞中B淋巴細(xì)胞的比例不同(只有B淋巴細(xì)胞表面才表達(dá)二類抗原)及他們凍存的細(xì)胞各自的狀態(tài)不同，還有人們對(duì)活化淋巴細(xì)胞對(duì)抗原再刺激的反應(yīng)增強(qiáng)、減弱的條件了解不足（對(duì)反應(yīng)原理不清楚）等,使他們的結(jié)果也不相同,缺少可比性和穩(wěn)定性。有時(shí)即使是對(duì)同一個(gè)人的檢測(cè)，同一中心不同時(shí)間做的結(jié)果也不一樣，所以，對(duì)于把混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)方法用于診斷器官移植排斥反應(yīng)的研究也越來(lái)越少。到目前為止，世界上其他研究單位尚未建立一個(gè)合適的排斥反應(yīng)診斷方法。4.2國(guó)內(nèi)內(nèi)現(xiàn)有的的技術(shù)基基礎(chǔ)：生物技術(shù)可可能是國(guó)國(guó)內(nèi)少數(shù)數(shù)幾個(gè)接接近于國(guó)國(guó)外技術(shù)術(shù)水平的的領(lǐng)域之之一，基基礎(chǔ)較好好；本項(xiàng)目目所使用用的技術(shù)術(shù)均為生生物工程程領(lǐng)域的的成熟技技術(shù)，現(xiàn)現(xiàn)有技術(shù)術(shù)基礎(chǔ)已已完全滿滿足該項(xiàng)項(xiàng)目的要要求；研研究組大大部分技技術(shù)人員員都是相相關(guān)領(lǐng)域域的專家家，如有足足夠資金金支持，完成該項(xiàng)目無(wú)大的困難。1.HowwarddJ，SSmevvenB，JJefrreyE,etal..Nooninnvassiveedeetecctioonoofrrejeectiionoftraanspplannteddheearttswwithhinndiuum-1111--labbeleedllympphoccytee.Ciircuulattionn,119877,775:8868--8766．2.NaarullaJJ,AAciooERR,NNaruulaN,AAnneexinn-Vimaaginngffornonninvvasiivedettecttionnoffcaardiiacalllogrrafttreejecctioon.NattMeed220011Deec;77(122):113477-5223.PattrciiaKK，DoonalldWW，AnnnaMorriarrty,,etal．．Immmunoologgicaalmmoniitorringgoffthhecardiiactraanspplanntppatiientt.Chhestt,19988,,94：：8344-8336.4.ReaaderrJAA,BBurkkeMMM，CouunihhamP，etal．．Nonninvvasiivemonnitoorinngoofhhuammncardiiacalllogrrafttreejecctioon.TTrannspllanttatiion,,19990,550:229-330.5.VallenttineeHAA、Foowl航航MB，HHunttSAA,ettall．ChhanggesinDopppleereechoocarrdioograaphiiciindeexessoffleeftvenntriicullarfunnctiionaspottenttiallmaarkeersofacuutecarrdiaacrrejeectiion..CCircculaatioon.19887，776(ssupppl.55)v--86．．6.AueerTTH，SSchrreieerGG,HuutteenHH,ettall.Affterrheeartttrranssplaantaatiooniintrramyyocaardiialeleectrrogrramforrmoonittoriingofalllogrrafttreejecctioon.TraanspplanntPProcc，19995,,27((3)：：19883-119855．7.F..Ibeererr,B..Graasseer,eetaal.Inttradduciingannewcliiniccalmetthoddfoornnoniinvaasivverrejeectiionmonnitoorinngaafteerhhearrtttrannslllanttatiiontocliiniccalpraactiice::Annalyysissoffpaaceddinntraamyeecarrdiaaleelettroggramm.TTrannspllanttPrroc,,19998,330,8895--89998.AnngerrmannnCCE,NNasssanK,eetaal.rrecoogniitioonoofaacutteccarddiaccallloggrafftrrejeectiionfroomsseriialinttegrreteedbaccksscattterranaalyssisinhummanheaarttraanspplanntrreciipieentss.CComppariisonnwiithconnvenntioonallecchoccarddioggrapphy..Ciircuulattionn.119977,955(1))：14409.MaarieePYY,AAngiioiM,CarrteaauxJP,,etal..DeetecctioonaandpreedicctioonoofaacuttehhearrtttrannspllanttreejecctioonwwithhthhemmyoccarddiallT22deeterrminnatiionprooviddedbyabblacck-bblooodmmagnnetiicrresoonannceimaaginngssequuencce.JAAmCColllCaardiiol20001MMar1;337(33):8825--31..10.MMulllenJC,,BeentlleyMJ,,SccherrrKKD,eetaal.TTropponiinTTanndIIarrennotrelliabblemarrkerrsoofccarddiacctrranssplaantrejjecttionn.EEurJCCarddiotthorracSurrg220022Auug;222(22):2233--711.WaahlaandeerHH,KKjelllsttrommC,,HoolmggrennD，eetaal.SSusttainnedeleevattedconncenntraatioonsofcarrdiaacttropponiinTTduurinngaacutteaalloograaftrejjecttionnaffterrheeartttrranssplaantaatiooniincchilldreen.Traanspplanntattionn20002Octt277;744(8)):11130--512.CChannceJJ,,SeegallJBB,WWalllerssonG,eetaal.CCarddiacctrropooninnTanddC--reaactiiveprooteiinaasmmarkkerssoffaccuteecaardiiacalllogrrafttreejecctioon.CliinCChimmAccta20001OOct;;3122(1--2)::31--95、項(xiàng)目擬擬采取的的研究方方法（或或技術(shù)路路線、實(shí)實(shí)施方案案）及其其可行性性和風(fēng)險(xiǎn)險(xiǎn)分析（不不限字?jǐn)?shù)數(shù)）5.1研究究方法：：⑴細(xì)胞培培養(yǎng)技術(shù)術(shù)⑵基因工工程技術(shù)術(shù)⑶病原微生生物培養(yǎng)養(yǎng)及純化化技術(shù)⑷單克隆隆抗體技技術(shù)⑸蛋白質(zhì)純純化技術(shù)術(shù)⑹⑹免疫組組化技術(shù)術(shù)⑺混合淋巴巴細(xì)胞反反應(yīng)⑻混合淋淋巴細(xì)胞胞反應(yīng)抑抑制試驗(yàn)驗(yàn)5.2技術(shù)術(shù)路線圖圖1：篩選具有不同HLA抗原的個(gè)體，并用EB病毒轉(zhuǎn)化其B淋巴細(xì)胞利用基因工程技術(shù)、構(gòu)建表達(dá)HLA抗原的雙順?lè)醋拥哪孓D(zhuǎn)錄病毒載體篩選具有不同HLA抗原的個(gè)體，并用EB病毒轉(zhuǎn)化其B淋巴細(xì)胞利用基因工程技術(shù)、構(gòu)建表達(dá)HLA抗原的雙順?lè)醋拥哪孓D(zhuǎn)錄病毒載體細(xì)胞載體細(xì)胞載體從EB病毒轉(zhuǎn)化的B淋巴細(xì)胞中挑選出幾個(gè)彼此不具相同HLA抗原的細(xì)胞株作抗原載體從EB病毒轉(zhuǎn)化的B淋巴細(xì)胞中挑選出幾個(gè)彼此不具相同HLA抗原的細(xì)胞株作抗原載體轉(zhuǎn)染抗原空白載體細(xì)胞使一個(gè)細(xì)胞上只表達(dá)一種HLA抗原細(xì)胞轉(zhuǎn)染，增加HLA抗原表達(dá)的種類轉(zhuǎn)染抗原空白載體細(xì)胞使一個(gè)細(xì)胞上只表達(dá)一種HLA抗原細(xì)胞轉(zhuǎn)染，增加HLA抗原表達(dá)的種類篩選得到分別穩(wěn)定表達(dá)各種HLA抗原的細(xì)胞株篩選得到穩(wěn)定表達(dá)10種以上HLA抗原的細(xì)胞株篩選得到分別穩(wěn)定表達(dá)各種HLA抗原的細(xì)胞株篩選得到穩(wěn)定表達(dá)10種以上HLA抗原的細(xì)胞株兩類細(xì)胞分別進(jìn)行大規(guī)模培養(yǎng)，并制備成相應(yīng)的試劑盒兩類細(xì)胞分別進(jìn)行大規(guī)模培養(yǎng)，并制備成相應(yīng)的試劑盒用混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)：1、挑選供、受體使之合理搭配。用混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)：1、挑選供、受體使之合理搭配。2、免疫耐受的診斷用混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)抑制實(shí)驗(yàn)監(jiān)測(cè)診斷排斥反應(yīng)美、歐歐臨床試試驗(yàn)及市市場(chǎng)準(zhǔn)入入、FDDA申請(qǐng)請(qǐng)5.3可行行性研究究：⑴基因的克克隆表達(dá)達(dá)是基因因工程的的基本技技術(shù)，研研究組有有一位基基因工程程專家專專門負(fù)責(zé)責(zé)該項(xiàng)工工作，無(wú)無(wú)大的技技術(shù)問(wèn)題題；穩(wěn)定定表達(dá)某某一HLLA抗原原細(xì)胞株株的篩選選也無(wú)大大的技術(shù)術(shù)難點(diǎn)，所所有的困困難就是是工作量量大；⑵項(xiàng)目研究究所使用用的混合合淋巴細(xì)細(xì)胞反應(yīng)應(yīng)方法是是經(jīng)過(guò)幾幾十年驗(yàn)驗(yàn)證的、反反映體內(nèi)內(nèi)細(xì)胞免免疫狀態(tài)態(tài)的最好好的體外外模型，對(duì)對(duì)該方法法研究組組有多個(gè)個(gè)成員都都有豐富富的試驗(yàn)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)；；⑶混合淋巴巴細(xì)胞反反應(yīng)抑制制試驗(yàn)為為本研究究組自己己所建立立，其建建立時(shí)間間雖然較較短，但但經(jīng)1000余人人次臨床床應(yīng)用，550余人人次活檢檢病理對(duì)對(duì)照檢查查，二者者有很好好的一致致性。5.4風(fēng)險(xiǎn)險(xiǎn)分析：：排斥反應(yīng)的的預(yù)測(cè)和和診斷方方面的試試劑盒原原材料的的制備，其其所用技技術(shù)均為為基因工工程的常常用技術(shù)術(shù)，理論論上本研研究沒(méi)有有太大的的、意想想不到的的困難和和技術(shù)風(fēng)風(fēng)險(xiǎn)。其其所用的的檢測(cè)方方法：一一個(gè)是混混合淋巴巴細(xì)胞培培養(yǎng)，一一個(gè)是混混合淋巴巴細(xì)胞反反應(yīng)抑制制試驗(yàn)。前前一個(gè)已已建立近近30年年，是免免疫學(xué)界界公認(rèn)的的、能夠夠反映機(jī)機(jī)體內(nèi)細(xì)細(xì)胞免疫疫狀態(tài)的的最好的的方法；；后一個(gè)個(gè)雖然建建立時(shí)間間較短，但但用于臨臨床排斥斥反應(yīng)檢檢測(cè)與目目前公認(rèn)認(rèn)的活檢檢對(duì)照具具有很好好的一致致性，而而且其體體外模型型也已建建立成功功，其反反應(yīng)發(fā)生生的內(nèi)部部機(jī)理也也已基本本清楚。6、預(yù)期研研究成果果應(yīng)用轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)化的前前景預(yù)測(cè)測(cè)及分析析（包括括國(guó)內(nèi)外外應(yīng)用或或市場(chǎng)現(xiàn)現(xiàn)狀、潛潛在用戶戶、市場(chǎng)場(chǎng)前景及及風(fēng)險(xiǎn)預(yù)預(yù)測(cè)，經(jīng)經(jīng)濟(jì)效益益和社會(huì)會(huì)作用、影影響分析析等）6.1市場(chǎng)場(chǎng)對(duì)該試試劑盒的的需求來(lái)來(lái)源①移植前對(duì)對(duì)供受體體進(jìn)行挑挑選:每年年全世界界大約要要進(jìn)行55萬(wàn)例器器官移植植和骨髓髓移植,,除這這些受者者需檢查查外,每個(gè)受受者需從從多個(gè)有有意貢獻(xiàn)獻(xiàn)器官和和骨髓的的被選供供者中選選擇一個(gè)個(gè)合適的的供者,,故做做一例器器官移植植或骨髓髓移植需需作多個(gè)個(gè)檢查,,此項(xiàng)項(xiàng)每年大大約需110萬(wàn)多多個(gè)試劑劑盒,共約330000萬(wàn)美元元的市場(chǎng)場(chǎng).②PRAA檢測(cè)::目目前每年年全世界界大約進(jìn)進(jìn)行5萬(wàn)萬(wàn)例器官官移植,,每個(gè)個(gè)受體移移植前均均需做PPRA檢檢測(cè),此項(xiàng)每每年大約約需5萬(wàn)萬(wàn)個(gè)PRRA檢測(cè)測(cè)試劑盒盒,共共約2000萬(wàn)美美元的市市場(chǎng).但該項(xiàng)項(xiàng)檢測(cè)有有兩個(gè)公公司的產(chǎn)產(chǎn)品已經(jīng)經(jīng)投放市市場(chǎng).③排斥反應(yīng)應(yīng)的診斷斷:目前全全世界已已有存活活移植患患者約550萬(wàn)人,而而且每年年還在以以近5萬(wàn)萬(wàn)例的速速度增加加,按按常規(guī)使使用,接受器器官移植植1年以以內(nèi)每年年需檢查查4次,,1年年以上每每年需檢檢查2次次,此此項(xiàng)每年年大約需需1200萬(wàn)個(gè)試試劑盒,,共約約360000萬(wàn)萬(wàn)美元的的市場(chǎng)..④免疫耐受受檢測(cè)::服服用免疫疫抑制劑劑兩年以以后均可可檢測(cè),,一年年檢測(cè)一一次,此項(xiàng)每每年大約約需檢測(cè)測(cè)試劑盒盒50萬(wàn)萬(wàn)個(gè),共約1150000萬(wàn)美美元的市市場(chǎng).⑤自身免疫疫性疾病病的診斷斷需要。⑥臨床科研研工作的的需要。⑦腫瘤，乙乙肝等疾疾病患者者的細(xì)胞胞免疫功功能評(píng)價(jià)價(jià)等。⑧各種病毒毒性疾病病診斷的的需要。其市場(chǎng)也在5億美元左右。綜上分析，器器官移植植排斥反反應(yīng)市場(chǎng)場(chǎng)預(yù)測(cè)診診斷市場(chǎng)場(chǎng)約為55億美元元，各種種病毒性性疾病診診斷試劑劑盒的市市場(chǎng)也有有約5億億美元，總總計(jì)該項(xiàng)項(xiàng)目所涵涵蓋的市市場(chǎng)在110億美美元以上上。6.2風(fēng)險(xiǎn)險(xiǎn)分析：：①本項(xiàng)目所所使用的的技術(shù)是是目前最最先進(jìn)的的基因工工程技術(shù)術(shù)；其所所用的混混合淋巴巴細(xì)胞培培養(yǎng)方法法是目前前免疫學(xué)學(xué)專家公公認(rèn)的，反映機(jī)體細(xì)胞免疫狀態(tài)最好的體外模型；所用的混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)抑制試驗(yàn)是我們近期才建立的一個(gè)免疫學(xué)方法，故本項(xiàng)目產(chǎn)品短期內(nèi)被其他更先進(jìn)的技術(shù)和方法所取代的可能性不大。②本項(xiàng)目研研究所涉涉及的基基礎(chǔ)技術(shù)術(shù)和研究究方法均均已成熟熟，足以以支撐本本項(xiàng)的實(shí)實(shí)施。③本項(xiàng)目所所使用的的主要原原材料立立足國(guó)內(nèi)內(nèi)，采購(gòu)購(gòu)渠道通通暢。④目前器官官移植排排斥反應(yīng)應(yīng)預(yù)測(cè)、診診斷、監(jiān)監(jiān)測(cè)領(lǐng)域域在世界界上屬于于一個(gè)尚尚未開發(fā)發(fā)的領(lǐng)域域,尚尚未有其其他有關(guān)關(guān)的試劑劑盒推出出,我我們申請(qǐng)請(qǐng)國(guó)內(nèi)外外專利后后可保護(hù)護(hù)20年年。綜上所述，目目前在器器官移植植前的供供受體挑挑選，移移植后的的排斥反反應(yīng)和免免疫耐受受性診斷斷方面尚尚無(wú)相應(yīng)應(yīng)產(chǎn)品出出售，本本項(xiàng)目產(chǎn)產(chǎn)品推向向市場(chǎng)后后屬獨(dú)家家經(jīng)營(yíng)，無(wú)無(wú)競(jìng)爭(zhēng)產(chǎn)產(chǎn)品。6.3經(jīng)濟(jì)濟(jì)效益：：6.3.11產(chǎn)品成成本分析析以下產(chǎn)品成成本分析析按500萬(wàn)套/年年生產(chǎn)能能力計(jì)算算。制造成成本:全年制造成成本1224055萬(wàn)萬(wàn)元，其其中：直接材料774311.5萬(wàn)元（按按小試階階段平均均耗用材材料計(jì)算算）((約占660%))直接工資118600.8萬(wàn)元(約占占15%%)制造費(fèi)用331122.7萬(wàn)元(約占占25%%)其中：折舊舊及攤銷銷15112.77萬(wàn)元((按新增增30776萬(wàn)元元固定資資產(chǎn)計(jì)，折折舊按66年平均均攤銷))廠房租賃1160萬(wàn)元燃料動(dòng)力3320萬(wàn)萬(wàn)元運(yùn)輸包裝3300萬(wàn)萬(wàn)元外出考察880萬(wàn)元元其它5000萬(wàn)元元期間費(fèi)費(fèi)用期間費(fèi)用包包括管理理費(fèi)用、財(cái)財(cái)務(wù)費(fèi)用用、銷售售費(fèi)用,,全年共共計(jì)4226733萬(wàn)元管理費(fèi)用：：參照本本企業(yè)實(shí)實(shí)際情況況按銷售售收入115%計(jì)計(jì)算，全全年計(jì)1148886萬(wàn)元元；財(cái)務(wù)費(fèi)用：：約為銷銷售收入入3%計(jì)計(jì)算,全全年約229777萬(wàn)元銷售費(fèi)用::(含含廣告推推廣費(fèi)用用)參參照本企企業(yè)實(shí)際際情況按按銷售收收入255%計(jì)算算,全年年約2448100萬(wàn)元6.3.22經(jīng)濟(jì)濟(jì)效益分分析試劑劑盒項(xiàng)目目經(jīng)濟(jì)效效益分析析表年度單位2007年2008年年生產(chǎn)能力套500000800000產(chǎn)銷率%%80%90%年銷售量套400000720000銷售收入萬(wàn)元99240178632銷售成本萬(wàn)元3721564506其中生產(chǎn)成本萬(wàn)元1240519848銷售費(fèi)用萬(wàn)元2481044658銷售單價(jià)元24812481增值稅15%萬(wàn)元1488626795銷售利潤(rùn)萬(wàn)元4713987331管理費(fèi)用萬(wàn)元1488626795財(cái)務(wù)費(fèi)用萬(wàn)元29775359利潤(rùn)總額萬(wàn)元2927655177企業(yè)所得稅萬(wàn)元790514898凈利潤(rùn)萬(wàn)元21371402796.3.33項(xiàng)目投投資評(píng)價(jià)價(jià)本項(xiàng)目在提提出申請(qǐng)請(qǐng)之前,,即前期期研究階階段已投投入2440萬(wàn)元元研發(fā)經(jīng)經(jīng)費(fèi),完完成中試試時(shí)的生生產(chǎn)能力力為800萬(wàn)套//年,此此后,將將通過(guò)增增加資金金投入等等方式擴(kuò)擴(kuò)大生產(chǎn)產(chǎn)規(guī)模,,2年后后年達(dá)到到年生產(chǎn)產(chǎn)能力1150萬(wàn)萬(wàn)套/年年,投資資評(píng)價(jià)計(jì)計(jì)算期,,年計(jì)算算(固定定資產(chǎn)佘佘值為零零),則則本項(xiàng)目目投資評(píng)評(píng)價(jià)如下下:本項(xiàng)目的財(cái)財(cái)務(wù)內(nèi)部部收益率率較高,,投資回回收期短短,經(jīng)濟(jì)濟(jì)效益明明顯,是是見效快快、回報(bào)報(bào)高的好好項(xiàng)目,,項(xiàng)目的的投產(chǎn),,既可以以給國(guó)家家稅源做做出較大大貢獻(xiàn),,同時(shí)又又能出口口創(chuàng)匯..因此,,本項(xiàng)目目在經(jīng)濟(jì)濟(jì)上是可可行的。6.4社會(huì)會(huì)效益分分析該項(xiàng)目屬生生物高技技術(shù)領(lǐng)域域，是傳傳統(tǒng)免疫疫學(xué)方法法和現(xiàn)代代分子生生物學(xué)技技術(shù)結(jié)合合的產(chǎn)物物；其產(chǎn)產(chǎn)品投入入市場(chǎng)將將大大延延長(zhǎng)接受受器官移移植病人人的生存存時(shí)間，提提高生存存質(zhì)量，將將產(chǎn)生巨巨大的經(jīng)經(jīng)濟(jì)效益益和社會(huì)會(huì)效益。該該項(xiàng)目開開發(fā)的成成功除每每年可為為國(guó)家增增加數(shù)億億美元的的利稅外外，更重重要的是是它將使使我國(guó)在世界界生物高高技術(shù)產(chǎn)產(chǎn)品開發(fā)發(fā)領(lǐng)域填填補(bǔ)空白白和占有有領(lǐng)先地地位；使使器官移移植技術(shù)術(shù)和水平平獲得突突破性發(fā)發(fā)展，使使我國(guó)器器官移植植產(chǎn)品占占領(lǐng)全球球同類產(chǎn)產(chǎn)品的至至高點(diǎn)；；作為我我國(guó)首個(gè)個(gè)出口歐歐美的生生物高技技術(shù)產(chǎn)品品，也將將對(duì)我省省生物高高技術(shù)產(chǎn)產(chǎn)業(yè)的發(fā)發(fā)展將具具有巨大大的推動(dòng)動(dòng)作用。本項(xiàng)目技術(shù)術(shù)高新，工工藝流程程長(zhǎng)，對(duì)對(duì)上游生生物儀器器、生物物儀表、生生物設(shè)備備及生物物材料、高高分子材材料、包包裝材料料、運(yùn)輸輸業(yè)有著著極大的的需求,,對(duì)上游游各產(chǎn)業(yè)業(yè)的發(fā)展展起著積積極的推推動(dòng)作用用。對(duì)下下游器官官移植產(chǎn)產(chǎn)業(yè)提供供快捷、簡(jiǎn)簡(jiǎn)便、準(zhǔn)準(zhǔn)確、價(jià)價(jià)謙的預(yù)預(yù)測(cè)、診診斷試濟(jì)濟(jì)，提高高器官移移植反應(yīng)應(yīng)成活率率，降低低移植監(jiān)監(jiān)控的費(fèi)費(fèi)用，對(duì)對(duì)器官移移植事業(yè)業(yè)的發(fā)展展起到積積極的推推動(dòng)作用用。同時(shí)時(shí)，由于于本項(xiàng)目目的產(chǎn)業(yè)業(yè)化，需需要高質(zhì)質(zhì)量的設(shè)設(shè)備、設(shè)設(shè)施，引引入人才才，招攬攬員工，對(duì)對(duì)本地的的經(jīng)濟(jì)發(fā)發(fā)展和對(duì)對(duì)本地文文化的發(fā)發(fā)展起到到積極的的帶動(dòng)作作用。投資計(jì)劃書書本項(xiàng)目計(jì)劃劃總投資資50000萬(wàn)元元，投資資完成后后將擁有有一個(gè)全全國(guó)一流流的現(xiàn)代代化的生生物工程程研究所所（總面面積約115000平方米米）和一一個(gè)符合合美國(guó)FFDA要要求的GGMP生生物工程程產(chǎn)品生生產(chǎn)車間間（總面面積約550000平方米米）。其其投資擬擬分兩次次到位，第第一批110000萬(wàn)元，建建立生物物工程研研究所；；第二批批40000萬(wàn)元元，建立立生物工工程產(chǎn)品品生產(chǎn)廠廠。首期投入110000萬(wàn)元，經(jīng)經(jīng)費(fèi)主要要使用如如下：建立生物工工程研究究所：租租房15500平平方米；；地點(diǎn)：：佛山市市高新技技術(shù)產(chǎn)業(yè)業(yè)園；租租金：約約25萬(wàn)萬(wàn)元/年年；租期期：200年。人人員約330人。裝修：1550萬(wàn)元元。購(gòu)買設(shè)備（見見計(jì)劃購(gòu)購(gòu)置的重重要儀器器設(shè)備表表）：3350萬(wàn)萬(wàn)元-4450萬(wàn)萬(wàn)元；包包括基因因工程實(shí)實(shí)驗(yàn)室：：1000萬(wàn)元，細(xì)細(xì)胞工程程實(shí)驗(yàn)室室50萬(wàn)萬(wàn)元，蛋蛋白質(zhì)純純化實(shí)驗(yàn)驗(yàn)室1000萬(wàn)元元，通用用儀器設(shè)設(shè)備1000萬(wàn)元元-2000萬(wàn)元元。申報(bào)國(guó)外專專利約880萬(wàn)元元?？蒲薪?jīng)費(fèi)2275萬(wàn)萬(wàn)元。研究所人員員工資及及辦公、運(yùn)運(yùn)轉(zhuǎn)費(fèi)用用每年約約1200萬(wàn)元。其其中聘請(qǐng)請(qǐng)的技術(shù)術(shù)人員基因工程實(shí)實(shí)驗(yàn)室約約6人，年年需工資資約188萬(wàn)（其其中一個(gè)個(gè)博士約約需工資資12萬(wàn)萬(wàn)元）。細(xì)胞生物學(xué)學(xué)、免疫疫學(xué)、蛋蛋白質(zhì)純純化實(shí)驗(yàn)驗(yàn)室約88人，年年需工資資約300萬(wàn)元（其其中3個(gè)個(gè)博士約約為244萬(wàn)元）?；鹕暾?qǐng)、國(guó)國(guó)內(nèi)外生生物科技技信息搜搜集、信信息管理理約5人人，年需需工資約約12萬(wàn)萬(wàn)元（其其中一個(gè)個(gè)博士約約需工資資8萬(wàn)元元）?？偨?jīng)理、副副總經(jīng)理理、辦公公室主任任、財(cái)務(wù)務(wù)、打字字、司機(jī)機(jī)、人事事、勤雜雜等人員員工資每每年約225萬(wàn)元元?？傆?jì)每年約約需工資資85萬(wàn)萬(wàn)元，辦辦公經(jīng)費(fèi)費(fèi)約355萬(wàn)元，共共計(jì)1220萬(wàn)元元。研究所三年年建設(shè)計(jì)計(jì)劃及目目標(biāo)第一年，資資金到位位后購(gòu)買買儀器、設(shè)設(shè)備、租租房、裝裝修；同同時(shí)招聘聘四醫(yī)大大的研究究人員開開始HLLA-‖‖類抗原原20個(gè)個(gè)DR亞亞型抗原原的表達(dá)達(dá)工作。半半年后儀儀器、設(shè)設(shè)備全部部到位，研研究所建建成，研研究人員員移入研研究所工工作；通通過(guò)一年年的工作作，初步步建立起起一支具具有較強(qiáng)強(qiáng)技術(shù)實(shí)實(shí)力的產(chǎn)產(chǎn)品開發(fā)發(fā)、生產(chǎn)產(chǎn)隊(duì)伍。第二年，完完善內(nèi)部部管理；；理順各各方關(guān)系系；完善善資金申申請(qǐng)、信信息收集集、產(chǎn)品品開發(fā)、生生產(chǎn)隊(duì)伍伍的建設(shè)設(shè)；至少少完成HHLA--‖類抗原原20個(gè)個(gè)DR亞亞型抗原原的表達(dá)達(dá)、鑒定定工作，使使之達(dá)到到可進(jìn)行行生產(chǎn)的的水平。至至少拿到到一項(xiàng)國(guó)國(guó)家的如如中小型型高新技技術(shù)企業(yè)業(yè)創(chuàng)新基基金等的的國(guó)家資資助。第三年，把把HLAA-‖類抗原原20個(gè)個(gè)DR亞亞型抗原原制成檢檢測(cè)試劑劑盒推向向市場(chǎng)，同同時(shí)申請(qǐng)請(qǐng)國(guó)家產(chǎn)產(chǎn)業(yè)化資資助；完完成HLLA-ⅠⅠ類抗原原約600個(gè)亞型型抗原的的表達(dá)、鑒鑒定工作作使之達(dá)達(dá)到可以以進(jìn)行生生產(chǎn)的水水平；至至少拿到到一項(xiàng)國(guó)國(guó)家基金金資助。第第二批資資金開始始進(jìn)入，