2023年食品中蛋白質(zhì)的測定實驗報告

.目的掌握凱氏定氮法測蛋白質(zhì)的原理、操作、條件、注意事項。.原理蛋白質(zhì)是含氮有機化合物。食品與硫酸和催化劑一同加熱消化，使蛋白質(zhì)分解。分解的氨與硫酸結(jié)合生成硫酸核。然后堿化蒸餛使氨游離,用硼酸吸取后在以硫酸或鹽酸標準溶液滴定，根據(jù)酸的消耗量計算含氮量再乘以換算系數(shù)，即為蛋白質(zhì)含量。.試齊IJ濃硫酸、硫酸銅、硫酸鉀，所有試劑均用不含氮的蒸儲水配制混合指示液1份(lg/L)甲基紅乙醇溶液與5份lg/L澳甲酚氯乙醇溶液臨用時混合。也可用2份甲基紅乙醇溶液與1份lg/L次甲基藍乙醇溶液臨用時混合。氫氧化鈉溶液(400g/L)標準滴定溶液硫酸標準溶液［c(l/2H2so4)=0.0500mo1/L］或鹽酸標準溶液［c(HC)0.050Omol/L］硼酸溶液(20g/L).儀器定氮蒸馀裝置.樣品全蛋(2.47g).操作樣品解決準確稱取2-5g半固體樣品，小心移入干燥潔凈的5(X)mL凱氏燒瓶也然后加入研細的硫酸銅0.5g,硫酸鉀10g和濃硫酸20mL,輕輕搖勻后于瓶口放一小漏斗,將瓶以45。角斜放于加有石棉網(wǎng)的電爐上，小火加熱，待內(nèi)容物所有炭化后，泡沫完全消失后，加強火力,并保持瓶內(nèi)液體微沸，至液體呈藍綠色呈請透明后，再繼續(xù)加熱0.5h,取下放冷，慢慢加入20mL水。放冷后,移入100mL容量瓶中,并用少量水洗定氮瓶，洗液并入容量瓶中，再加水至刻度，混勻備用。取與解決樣品相同的硫酸銅、硫酸鉀、硫酸按同一方法做試劑空白實驗。連接裝置裝好定氮裝置，于水蒸氣發(fā)生器內(nèi)裝水至2/3處，加甲基紅指示劑數(shù)滴及少量硫酸，以保持水呈酸性，加入數(shù)滴玻璃珠以防暴沸，用調(diào)壓器控制，加熱至水沸騰。蒸儲、吸取及滴定向接受瓶(錐形瓶)內(nèi)加入1OmL20g/L硼酸溶液及混合指示劑1?2滴，并使冷凝管的下端插入液面下。用移液管移取10.00mL樣品消化稀釋液有小漏斗室流入反映室，在將10mL400g/L氫氧化鈉溶液倒入堿液管中,提起玻璃塞使其緩緩流入反映室，并加水于小漏斗中以防止漏氣。開始蒸儲。蒸氣通入反映室使氨通過冷凝管而進入接受瓶內(nèi)，蒸儲5min,移動接受瓶,是冷凝管下端離開液面,再蒸儲Imin,然后用少量的水沖洗冷凝管下端外部。取下接受瓶，以0.()5mol/L鹽酸標準溶液滴定至由藍色變?yōu)槲⒓t為終點，記錄鹽酸溶液用量。同時吸取10.00mL空白消化液按以上操作為空白實驗，記錄空白實驗消耗鹽酸標準溶液的體積。.數(shù)據(jù)記錄原始數(shù)據(jù)可疑值棄留實驗獲得的數(shù)據(jù)均合理，無可疑值。整理數(shù)據(jù)精滴/mL粗滴/mL平行實驗1平行實驗2平行實驗3空白實驗5.305.505.605.900.45.計算(V標一V。)xCaxO.014X=xl()()xKm樣/V定xV測式中：X—樣品中蛋白質(zhì)含量,％；V標一主實驗(測定用液)消耗硫酸或鹽酸標準溶液的體積,mL;Vl空白實驗消耗硫酸或鹽酸標準溶液的體積,mL;Ca—硫酸或鹽酸標準溶液的物質(zhì)的量濃度，mol/L；0.014—氮的物質(zhì)的量質(zhì)量xl()\g/mol；m樣一樣品的質(zhì)量(體積)，g(mL);V定一消化液定容體積,mL；V測一消化液參與測定(測定用液)的體積,mL;K—氮換算為蛋白質(zhì)的系數(shù)，蛋白質(zhì)中的氮含量一般為1577.6%,按I6%計算乘以6.25即為蛋白質(zhì)，乳制品為6038,面粉為5.70,玉米、高粱為6.24,花生為5.46,米為5.95,大豆及其制品為5.71,肉或肉制品為6025,大麥、小米、燕麥、裸麥為5.83,芝麻、向日葵為5.30O.結(jié)果V標=(v1+V2+V3)/3=(5.30+5.50+5.60)/3=5.47(V標-Vo)xCaxO.014(5.47mL-0.45mL)x0.0500mol/Lx0.014X=x10OxK=m樣/V定xV測2.47g/1OOmLx10mLxl00x6.25=8.89%.結(jié)果可靠性分析精密度平均偏差二(0.17+0.03+0.13)/3=0.11相對平均偏差二(0.11/547)x100%=().()2%誤差分析根據(jù)實際操作情況分析誤差的產(chǎn)生因素在做空白實驗前也許由于定氮瓶未完全清洗干凈，有之前的樣液殘留或者之前樣液產(chǎn)生的氨氣未排空而導(dǎo)致空白實驗消耗的標準溶液過多，使實驗結(jié)果偏低。誤差的方向性本實驗產(chǎn)生誤差為負誤差。.結(jié)論三次平行實驗均吸取10mL消化液，產(chǎn)生的氨氣經(jīng)吸取后以0.05mol/L鹽酸標準溶液滴定,消耗鹽酸濃度依次為5.3OmL、5.50mL、5.60mL（相對平均偏差為0.02%）0取三者平均值5.47mL計算得樣品蛋白質(zhì)含量為8.89%。由于空白實驗前定氮瓶未完全清洗干凈，有之前的樣液殘留或之前樣液產(chǎn)生的氨氣未排空導(dǎo)致空白實驗消耗的標準溶液過多，結(jié)果偏低，產(chǎn)生誤差為負誤差。.思考題為什么叫粗蛋白？樣品中常具有核酸、生物堿、含氮類脂、嚇咻以及含氮色素等非蛋白質(zhì)的含氮化合物，非純蛋白質(zhì)，故稱粗蛋白。試劑及用途？濃硫酸：消化、氧化劑硫酸銅：催化劑、指示消化終點硫酸鉀:使消化溫度升高到400℃混合指示劑：指示滴定終點氫氧化鈉溶液：用于蒸儲,使氨氣溢出。硼酸溶液:吸取液，將氨氣固定于吸取液中,形成硼酸筱。硫酸標準溶液或鹽酸標準溶液：用于滴定，與硼酸鏤反映各步終點？消化終點:溶液由黑色變?yōu)樗{綠色澄清透明。蒸饋終點:凱氏瓶內(nèi)溶液變?yōu)樯钏{色或產(chǎn)生黑色沉淀，然后用表面皿接兒滴飾出液，用奈氏試劑檢查，如無紅棕色物生成，表達蒸飾完畢。滴定終點:用鹽酸標準溶液直接滴定至溶液由藍色變?yōu)槲⒓t色即為終點。注意事項？移液管不可交叉使用，防止酸堿試劑污染;蒸蟒裝置不能漏氣；消化時，火力由弱到強，燒瓶傾斜呈45。;瓶口放一長頸漏斗；蒸鐳與吸取，先進行吸取操作，冷凝管末端必須插入吸取液中，然后再進行蒸儲的操作；蒸馀結(jié)束時,將管離開液面，蒸僧Imin,再用少量蒸儲水洗管外壁；滴定,先粗滴，后精滴。敘述整個實驗中有關(guān)顏色的變化，為什么？消化終點：由黑色變?yōu)樗{綠色澄清透明。由于濃硫酸具有脫水性和氧化性，使有機物炭化呈黑色，待有機物所有被消化完后，不再有硫酸亞銅生成,溶液呈現(xiàn)清澈的藍綠色。蒸譙終點：凱氏瓶