微生物的分離培養(yǎng)方法

一、接種將微生物接到適于它生長(zhǎng)生殖的人工培育基上或活的生物體內(nèi)的過(guò)程叫做接種。１、接種工具和方法同，接種針的針尖部常做成不同的外形，有刀形、耙形等之分。有時(shí)滴管、吸管也可作為接種工具進(jìn)展液體接種。在固體培育基外表要將菌液均勻涂布時(shí)，需要用到涂布棒?！矆D３－３〕圖３－３接種和分別工具2.接種環(huán)34.5.玻璃涂棒678.小解剖刀常用的接種方法有以下幾種：接種的作用。常用的接種工具有接種環(huán)，接種針等。在斜面接種和平板劃線中就常用此法。２〕在爭(zhēng)論霉菌形態(tài)時(shí)常用此法。此法即把少量的微生物接種在平板外表上，成等邊三角形的三點(diǎn)，讓它各自獨(dú)立形成菌落后，來(lái)觀看、爭(zhēng)論它們的形態(tài)。除三點(diǎn)外，也有一點(diǎn)或多點(diǎn)進(jìn)展接種的。３〕在保藏厭氧菌種或爭(zhēng)論微生物的動(dòng)力時(shí)常承受此法。做穿刺接種時(shí)，用的接半固體培育基中心向管底作直線穿刺，如某細(xì)菌具有鞭毛而能運(yùn)動(dòng)，則在穿刺線四周能夠生長(zhǎng)。４〕澆混接種該法是將待接的微生物先放入培育皿中，然后再倒入冷卻至45°C左右的固體培育基，快速輕輕搖勻，這樣菌液就到達(dá)稀釋的目的。待平板凝固之后，置適宜溫度下培育，就可長(zhǎng)出單個(gè)的微生物菌落。５〕與澆混接種略有不同，就是先倒好平板，讓其凝固，然后再將菌液倒入平板６〕從固體培育基中將菌洗下，倒入液體培育基中，或者從液體培育物中，用移中，常見(jiàn)的疫苗預(yù)防接種，就是用注射接種，接入人體，來(lái)預(yù)防某些疾病。８〕活體接種是特地用于培育病毒或其它病原微生物的一種方法，由于病毒必需接種于活的生物體內(nèi)才能生長(zhǎng)生殖。所用的活體可以是整個(gè)動(dòng)物；也可以是某個(gè)離體活組織，例如猴腎等；也可以是發(fā)育的雞胚。接種的方式是注射，也可以是拌料喂養(yǎng)。２、無(wú)菌操作培育基經(jīng)高壓滅菌后，用經(jīng)過(guò)滅菌的工具〔如接種針和吸管等〕在無(wú)菌條件下接種含菌材料〔如樣品、菌苔或菌懸液等〕過(guò)程叫做無(wú)菌接種操作。在試驗(yàn)室檢驗(yàn)中的各種接種必需是無(wú)菌操作。試驗(yàn)臺(tái)面不管是什么材料，一律要求光滑、水平。光滑是便于用消毒劑擦洗；水平是倒瓊脂處理，盡可能地削減雜菌的數(shù)量。紅〔接種柄，一邊轉(zhuǎn)動(dòng)一邊漸漸地來(lái)回通過(guò)火焰三次〕，冷卻，先接觸一下培育基，待接種環(huán)冷〔圖３－４〕然后，上通過(guò)。圖３－４斜面接種時(shí)的無(wú)菌操作(2(3(4(5(6)塞好棉塞二、分別純化含有一種以上的微生物培育物稱為混和培育物〔Mixedculture〕。假設(shè)在一個(gè)菌落中全部細(xì)胞均來(lái)自于一個(gè)親代細(xì)胞，那么這個(gè)菌落稱為純培育〔Pureculture〕所用的微生物一般均要求為純的培育物。得到純培育的過(guò)程稱為分別純化，方法有很多種。１、傾注平板法首先把微生物懸液通過(guò)一系列稀釋，取肯定量的稀釋液與熔化好的保持在40~50°左右的養(yǎng)分恒便可得到純培育物?！矆D３－５，a〕圖３－５傾注平板法〔a〕涂布平板法〔b〕圖解1234.無(wú)菌水２、涂布平板法落?！矆D３－５，b〕３、平板劃線法最簡(jiǎn)潔的分別微生物的方法是平板劃線法。用無(wú)菌的接種環(huán)取培育物少許在平板上進(jìn)展劃線。劃線的方法很多，常見(jiàn)的比較簡(jiǎn)潔消滅單個(gè)菌落的劃線方法有斜線法、曲線法、方格法、放〔圖３－６〕當(dāng)接種環(huán)在培育基外表上往后移動(dòng)時(shí)，接種環(huán)上的菌液漸漸稀釋，最終在所劃的線上分散著單個(gè)細(xì)胞，經(jīng)培育，每一個(gè)細(xì)胞長(zhǎng)成一個(gè)菌落?！矆D３－７〕４、富集培育法pH、滲透壓和氫受體等。在一樣的培育基重復(fù)移種便可以得到純的寄生菌。圖３－６平板劃線分別法2345.四格法５、厭氧法管放在沸水0，參加無(wú)菌的石蠟于培育基外表，使培育基與空氣隔絕。另一種方法是，在接種后，利用N2或CO2可以把所分別的樣品接種于培育基上，然后再把培育皿放在完全密封的厭氧培育裝置中。三、培育微生物的生長(zhǎng)溫度、水分、氧氣、ＰＨ等。微生物的種類不同，培育的方式和條件也不盡一樣。１、影響微生物生長(zhǎng)的因素微生物的生長(zhǎng)長(zhǎng)的因素很多，簡(jiǎn)要介紹如下。1)養(yǎng)分物濃度細(xì)菌的生長(zhǎng)率與養(yǎng)分物的濃度有關(guān):μ=μmax*C/(K+C)養(yǎng)分物濃度與生長(zhǎng)率的關(guān)系曲線是典型的雙曲線。K所以在自然界中，它們處處生長(zhǎng)。然而養(yǎng)分太低時(shí)，細(xì)菌生長(zhǎng)就會(huì)遇到困難，甚至還會(huì)死亡。這面，隨著養(yǎng)分物濃度的增加，生長(zhǎng)率愈接近最大值。２〕溫度于最適生長(zhǎng)溫度時(shí)，生長(zhǎng)速度才最快，代時(shí)最短。超過(guò)最低生長(zhǎng)溫度，微生物不會(huì)生長(zhǎng)，溫度太低，甚至?xí)劳?。超過(guò)最高生長(zhǎng)溫度，微生物也要停頓生長(zhǎng)，溫度過(guò)高。也會(huì)死亡。一般狀況下，每種微生物的生長(zhǎng)溫度三基點(diǎn)是恒定的。但也常受其它環(huán)境條件的影響而發(fā)生變化。依據(jù)微生物最適生長(zhǎng)溫度的不同，可將它們分為三個(gè)類型：a.嗜冷微生物：其是適生長(zhǎng)溫度多數(shù)在-10℃－20℃之間b20℃－45℃之間c.嗜熱微生物：生長(zhǎng)溫度在45℃以上。３〕水分而生存的。但是微生物只能在水溶液中生長(zhǎng)，而不能生活在純水中。各種微生物在不能生長(zhǎng)發(fā)育的水分活性范圍內(nèi)，均具有狹小的適當(dāng)?shù)乃只钚詤^(qū)域。４〕氧氣依據(jù)微生物對(duì)氧氣的需要狀況，可將它們分為以下五個(gè)類型。a.需氧微生物這類微生物需要氧氣供呼吸之用。沒(méi)有氧氣，便不能生長(zhǎng)，但是高濃度的氧氣對(duì)需氧微生物物都屬于這個(gè)類型。兼性需氧微生物了。在無(wú)氧氣存在的條件下，它進(jìn)展發(fā)酵作用，例如酵母菌的無(wú)氧乙醇發(fā)酵。微量需氧微生物0.2下失活的酶，因而只有在低壓下作用。耐氧微生物這類微生物在生長(zhǎng)過(guò)程中，不需要氧氣，但也不怕氧氣存在，不會(huì)被氧氣所殺死。c.厭氧微生物這類微生物在生長(zhǎng)過(guò)程中，不需要分子氧。分子氧存在對(duì)它們生長(zhǎng)產(chǎn)生毒害，不是被抑制，就是被殺死。２、培育方法1〕依據(jù)培育時(shí)是否需要氧氣，可分為好氧培育和厭氧培育兩大類。生長(zhǎng)良好。在試驗(yàn)室中，斜面培育是通過(guò)棉花塞從外界獲得無(wú)菌的空氣。三角燒瓶液體培育多數(shù)是通過(guò)搖床振蕩，使外界的空氣源源不斷地進(jìn)入瓶中。養(yǎng)過(guò)程中，最重要的一點(diǎn)就是要除去培育基中的氧氣。一般可承受以下幾種方法：菌的生長(zhǎng)?；先パ酰哼@也有很多方法，主要有：用焦性沒(méi)食子酸吸取氧氣；用磷吸取氧氣；用好氧