實驗四血球凝集和交叉配血實驗

實驗四

血球凝集反應和交叉配血實驗

指導老師：程燕實驗目的1、掌握凝集反應和交叉配血實驗的原理2、掌握玻片凝集試驗的操作方法，了解其特點和用途3、學習玻片凝集試驗結果的觀察方法實驗原理凝集反應：顆粒性抗原(細菌、細胞等)與其特異性抗體[直接凝集]或是可溶性抗原(亦可用抗體)吸附于與免疫無關的載體形成致敏顆粒(免疫微球)與相應的抗體(或抗原)[間接凝集]在有適量電解質存在下，形成肉眼可見的凝集小塊。注：顆粒性抗原稱為凝集原，特異性抗體稱為凝集素凝集反應的特點顆粒性抗原致敏顆粒（可溶性抗原或抗體與載體顆粒結合）電解質的存在肉眼可見的凝集現(xiàn)象凝集反應的類型直接凝集試驗玻片凝集試驗：ABO血型試管凝集試驗：外斐試驗，肥達試驗間接凝集試驗正向間接凝集試驗反向間接凝集試驗間接凝集抑制試驗協(xié)同凝集試驗間接血凝試驗膠乳凝集試驗明膠凝集試驗實驗原理直接凝集反應：是顆粒性抗原又稱凝集原與相應抗體直接結合所呈現(xiàn)的凝集現(xiàn)象，如紅細胞和細菌凝集試驗。主要有玻片法、試管法。玻片法為定性試驗，方法簡便快速，常用已知抗體檢測未知抗原，應用于菌種鑒定，分型及人紅細胞ABO血型測定等；試管法通常為半定量試驗，常用已知抗原檢測待檢血清中有無相應抗體及其相對含量，以幫助臨床診斷和分析病情。常有肥達試驗，外-斐試驗，交叉配血試驗等8血型抗原KDCCKBAD存在于紅細胞表面化學結構：

蛋白質蛋白質上的糖類抗原糖蛋白或脂類（糖脂）9ABO血型RBC上的抗原血清中的抗體基因型OHAnti-A,BO/OAAAnti-BA/AorA/OBBAnti-AB/BorB/OABA&BNoneA/BABO血型系統(tǒng)10ABO以外

重要的血型系統(tǒng)及其抗體2005年，29個紅細胞血型系統(tǒng)274個抗原11除ABO外與輸血有關的最重要的血型系統(tǒng)之一最重要的五種抗原C、c、D、E、e根據(jù)D抗原是否存在，一般將Rh系統(tǒng)定義為Rh陽性：D抗原陽性Rh陰性：D抗原陰性（熊貓血型：AB型、Rh陰性）Rh血型系統(tǒng)ABO血型的鑒定方法。

原理將標準抗A和抗B血型抗體分別與待測紅細胞混合。如果抗原與抗體相對應，則引起紅細胞凝集，反之則不凝集，據(jù)其凝集現(xiàn)象可判斷血型。結果判讀：

1、如混合液由均勻紅色混濁狀逐漸變?yōu)橥该?，并出現(xiàn)大小不等的紅色凝集塊者，即為紅細胞凝集；

2、如混合液仍呈均勻混濁狀，則為不凝集。注：肉眼觀察難于判定是否凝集，可在顯微鏡下用低倍鏡觀察予以確認。

交叉配血試驗1.交叉配血實驗在輸血過程中，要先分別將供血者的RBC與受血者的血清及供血者的血清與受血者的RBC進行的配合試驗，以免發(fā)生溶血。2.交叉配血實驗的意義（1）檢驗血型鑒定是否有誤。（2）檢驗血清中是否有不規(guī)則抗體。3.交叉配血的方法供血者的紅細胞受血者血清受血者的紅細胞供血者血清（主側）（次側）均不凝集：配血相合主側凝集：絕對不可以有凝集或溶血現(xiàn)象主側不凝，次側凝集：供血者血清加受血者紅細胞在允許范圍內，可以有凝集現(xiàn)象，但不可以有溶血。只在應激情況下少量緩慢，或使用洗滌RBC。實驗器材實驗動物：豚鼠、兔實驗試劑：血液抗凝劑（1:500u肝素鈉注射液）實驗器材：注射器、一次性離心管普通吸管、尖吸管、1ml刻度吸管血球凝集板實驗步驟1、分別制備兔血清、兔紅細胞、豚鼠血清、豚鼠紅細胞2、分別制備5％兔紅細胞懸液、5％豚鼠紅細胞懸液3、交叉配血與玻片凝集觀察取血清0.1ml放于玻片上，取5％紅細胞生理鹽水懸液0.1ml，加于血清中混勻并涂成直徑約1cm的圓形，立即記時3分鐘。觀察出現(xiàn)凝集的時間和凝集塊的大小。4、加樣方法兔1紅細胞兔2紅細胞豚鼠1紅細胞豚鼠2紅細胞兔1血清◆◆◆兔2血清◆◆◆豚鼠1血清◆◆◆豚鼠2血清◆◆◆實驗作業(yè)1、什么叫直接凝集反應