微生物基礎知識培訓

微生物基礎知識培訓武漢生命科技股份有限公司培訓人：陳蕊微生物基礎知識培訓

什么是微生物微生物的存在微生物的益處微生物的危害藥品生產(chǎn)中的微生物控制微生物污染的污染途經(jīng)藥品微生物污染的特殊性主要的微生物污染源幾個問題？什么是微生物

它們是非常小的單細胞或多細胞生物，肉眼無法看到。它們對營養(yǎng)的要求非常低。它們是一類繁殖非?？斓纳?。它們非常容易發(fā)生變異。它們無處不在。大多數(shù)微生物對人類有益。有些微生物對人類有害。微生物(microorganism)

是指存在于自然界的一大群形體微小、結(jié)構(gòu)簡單、進化低級、肉眼直接看不見，必須借助光學顯微鏡或電子顯微鏡放大數(shù)百倍、數(shù)千倍，甚至數(shù)萬倍才能觀察到的微小生物。微生物的特征?。ㄐ误w微?。害蘭（微米）級在光學顯微鏡下可見、nm

（納米）級在電子顯微鏡下可見簡（結(jié)構(gòu)簡單）：單細胞、簡單的多細胞、非細胞低（進化低級）：原核類、真核類、非細胞類微生物的五大共性1、體積小，面積大為五大共性的基礎。小體積大面積系統(tǒng)必然有一個巨大的營養(yǎng)物吸收面、代謝廢物的排泄面、環(huán)境信息的接收面。2、吸收多，轉(zhuǎn)化快為其高速生長繁殖和產(chǎn)生大量代謝產(chǎn)物提供了充分的物質(zhì)基礎。3、生長旺，繁殖快微生物具有極高的生長和繁殖速度。

4、適應強，易變異微生物對環(huán)境條件尤其是惡劣的“極端環(huán)境”有驚人的適應能力，堪稱生物界之最。微生物的個體一般都是單細胞、簡單多細胞或非細胞，通常都是單倍體，繁殖快與外界環(huán)境直接接觸，即使變異的頻率特別低，也可在短時間內(nèi)產(chǎn)生大量變異的后代。最常見的變異形式是基因突變。

5、分布廣，種類多地球上除了火山的中心區(qū)域外，從土壤圈、水圈、大氣圈直至巖石圈，到處都有微生物的蹤跡。地球上有200萬種生物，其中微生物有20萬種之多。微生物的種類微生物根據(jù)其不同的進化水平和性狀上的明顯差別可分為原核微生物、真核微生物和非細胞微生物三大類群。原核微生物：細菌(Bacteria)、放線菌(Actinomyces)、藍細菌(Cyanobacteria)、立克次氏體(Rickettsia)、支原體(Mycoplasm)、衣原體(Chlamydia)、螺旋體(Spirochaeta)、蛭弧菌(Bdellovibrio)等真核微生物：霉菌(Mold)、酵母菌(Yeast)等非細胞類微生物：病毒(Virus)[個體微小，可通過細菌濾器]等微生物的形態(tài)細菌的形態(tài)：球狀、桿狀、螺旋狀酵母菌的形態(tài)：球狀、卵圓狀、橢圓狀、柱狀或香腸狀等霉菌的形態(tài)：絲狀病毒的形態(tài)：球狀、卵圓形、磚形、桿狀、絲狀、蝌蚪狀等微生物的主要類群：桿菌(大腸桿菌)

大腸桿菌(帶鞭毛)

微生物的主要類群：桿菌(碳疽)

沙門氏菌

微生物的主要類群：葡萄球菌

微生物的主要類群：鏈球菌

微生物的主要類群：弧狀菌

微生物的主要類群：四疊球菌

細菌的繁殖：二分裂繁殖

酵母菌的繁殖：出芽生殖

微生物的主要類群：黑曲霉菌

微生物的主要類群：絲狀真菌

真菌的繁殖：分生孢子

微生物的結(jié)構(gòu)細菌

基本結(jié)構(gòu)：細胞壁、細胞膜、細胞質(zhì)、細胞核特殊結(jié)構(gòu)：莢膜、芽孢等細胞壁：位于細胞表面，是一層較為堅韌、略具彈性的結(jié)構(gòu)。其功能是可以保護細胞免受機械或滲透壓的破壞，維持細胞的外形。細胞壁是多孔性的，具有一定的屏障作用，水和某些化學物質(zhì)可以通過，但對大分子物質(zhì)有阻攔作用。細胞膜：是外側(cè)緊貼于細胞壁而內(nèi)側(cè)包圍細胞質(zhì)的一層柔軟而富有彈性的半透性薄膜。它是一個重要的代謝活動中心，具有多種新陳代謝所需的酶。細胞質(zhì)：無色透明，呈粘液狀。其內(nèi)含有某些結(jié)構(gòu)和內(nèi)含物。細胞核：細菌的核位于細胞質(zhì)內(nèi)，沒有核膜、核仁，沒有固定形態(tài)，結(jié)構(gòu)也很簡單，因而稱之為原核。莢膜：有些細菌在一定營養(yǎng)條件下，可向細胞壁表面分泌一層松散透明、粘度極大、粘液狀或膠質(zhì)狀的物質(zhì)稱為莢膜。芽孢：細菌在一定環(huán)境條件下或處在一定的生活階段，細胞質(zhì)脫水濃縮，在菌體內(nèi)形成一個折光性圓形或橢圓形的個體。其對熱力、干燥、輻射、化學消毒等理化因素有強大的抵抗力。病毒

基本結(jié)構(gòu)：核、衣殼特殊結(jié)構(gòu)：包膜炭疽桿菌（芽孢形成）微生物的分布水土壤空氣衣服地板海水油膜廢水排水口洗手池汽油罐嘴頭發(fā)皮膚鼻子腸道食物昆蟲動物南極(<00C)火山口(>2500C)部位常見菌種皮膚表皮葡萄球菌、類白喉桿菌、綠膿桿菌、恥垢桿菌等口腔鏈球菌（甲型或乙型）、乳酸桿菌、螺旋體、梭形桿菌、白色念球菌、（真菌）表皮葡萄球菌、肺炎球菌、奈瑟氏球菌、類白喉桿菌等胃正常一般無菌腸道類桿菌、雙歧桿菌、大腸桿菌、厭氧性鏈球菌、糞鏈球菌、葡萄球菌、白色念球菌、乳酸桿菌、變形桿菌、破傷風桿菌、鼻咽腔甲型鏈球菌、奈氏球菌、肺炎球菌、流感桿菌、乙型鏈球菌、葡萄球菌、綠膿桿菌、大腸桿菌、變形桿菌等眼結(jié)膜皮表葡萄球菌、結(jié)膜干燥桿菌、類白喉桿菌等人體中的微生物微生物的益處啤酒，葡萄酒的生產(chǎn)面包酵母的生產(chǎn)奶酪的生產(chǎn)醋的生產(chǎn)酸奶的生產(chǎn)維生素的生產(chǎn)類固醇的生產(chǎn)抗菌素、干擾素的生產(chǎn)分解廢物，循環(huán)利用幫助腸道中的食物消化除蟲微生物的害處導致傷口感染導致胃腸不適引起感冒，咳嗽尿道感染敗血癥癌癥腦脊膜炎破傷風艾滋病五個基本概念消毒：是指應用物理或化學方法殺死物體表面和內(nèi)部的病原微生物，而對非病原微生物及其芽孢、孢子并不嚴格要求全部殺死。用于消毒的化學物質(zhì)，稱為消毒劑。滅菌：是指殺死一切病原菌和非病原菌及其芽孢和孢子，使物體上無任何存活的微生物。抑菌：抑制體內(nèi)或體外細菌的生長繁殖。防腐：防止或抑制體外細菌生長繁殖的方法。細菌一般不死亡。使用同一種化學藥品在低濃度時為防腐劑，在高濃度時為消毒劑。無菌：不存在活菌。微生物的控制滅菌和消毒的比較：

共性：殺滅微生物以控制其污染和防止傳染。區(qū)別：1.殺滅微生物完全性的差異。滅菌要求完全殺滅微生物，滅菌后的藥品不應含有活的微生物。而消毒不完全殺滅微生物，只能殺滅一部分微生物即病原微生物。這是相對的。因為強效消毒劑在適宜條件下可能達到滅菌效果；在不適宜條件下滅菌，有不完全殺滅微生物的可能。2.方法上的差異：滅菌方法具有多樣性，消毒常借助化學物質(zhì)。3.效果檢查的差異：滅菌效果用無菌檢查法檢測，而消毒效果以消毒劑的效價來評定。一、微生物影響因素

1.溫度、水分、營養(yǎng)等

1.1溫度：溫度是微生物生長的重要因素，合適的溫度范圍內(nèi)，微生物能進行正常的生命活動，過高或過低的溫度微生物的活動會降低甚至停止，乃至死亡。由于長期的自然選擇的結(jié)果，微生物適應外界環(huán)境的變化，有的能夠耐受低溫，稱為嗜冷菌，有的能耐高溫，稱為嗜熱菌，界于兩者之間的，稱為嗜溫菌(最適生長溫度一般在20℃－45℃之間)。1.2食品中的大多數(shù)細菌都是嗜溫菌在30~40℃時迅速繁殖；0℃以下、60℃以上幾乎不繁殖；

2.水分如果沒有水，細菌不會繁殖。

生產(chǎn)食品使用的器具、容器、抹布等洗干凈、干燥很重要

3.營養(yǎng)食品中營養(yǎng)萬分豐富，細菌容易繁殖。器具容器等使用完后，好好刷洗是很重要的。

4.化學物質(zhì)對微生物的影響

微生物的形態(tài)、生長、繁殖、致病力、抗原性等都受外界化學因素的影響。例：酒精能使菌體蛋白質(zhì)脫水變性

常用酒精殺菌濃度為70-75%

有人認為酒精濃度越高消毒效果越好，這是錯誤的。

酒精消毒的作用是凝固細菌體內(nèi)的蛋白質(zhì)，從而殺死細菌。95%的酒精能將細菌表面包膜的蛋白質(zhì)迅速凝固，并形成一層保護膜，阻止酒精進入細菌體內(nèi)，因而不能將細菌徹底殺死。高于75%濃度的酒精因脫水作用太快，使菌體表面迅速凝固而阻止了乙醇分子繼續(xù)滲入故殺菌效力反而降低。如果酒精濃度低于70%，雖可進入細菌體內(nèi)，但不能將其體內(nèi)的蛋白質(zhì)凝固，同樣也不能將細菌徹底殺死。只有70%-75%的酒精即能順利地進入到細菌體內(nèi)，又能有效地將細菌體內(nèi)的蛋白質(zhì)凝固，因而可殺死細菌。

二、消毒劑消毒劑的種類1、重金屬及其化合物2、有機化合物3、鹵族元素及其化合物4、表面活性劑5、染料

潔凈室（區(qū)）常用的消毒劑1.甲醛薰蒸（作用機制：阻抑菌細胞核蛋白質(zhì)合成)

甲醛有揮發(fā)性，對眼睛、皮膚有刺激性，引起皮膚硬化或皺褶，不宜做皮膚消毒用。）2.0.1%新潔爾滅溶液(作用機制：使蛋白質(zhì)變性，破壞細胞膜)3.75%酒精溶液（常用于皮膚消毒。能迅速殺死細菌繁殖體，對一般病毒有一定的消毒作用）4.5%來蘇水(甲酚皂)溶液（作用機制：損傷細胞膜）影響消毒劑作用的因素1、消毒劑的濃度：消毒劑的消毒效果，一般與其濃度成正比，70-75%的酒精殺菌效力最好；2、微生物的種類：微生物的種類如細菌、病毒、真菌等對消毒劑的敏感性不同，3、有機物的存在：有機物中的蛋白質(zhì)易和許多消毒劑結(jié)合，嚴重降低消毒的效果。對物體進行消毒必須先洗凈油污。4、溫度：溫度升高，殺菌力加強。溫度升高10℃殺菌力增加2-5倍。5、接觸時間：細菌與消毒劑接觸時間愈久，消毒效果好。消毒劑的正確使用方法洗凈殺菌要同時進行，順序必須是清洗之后再殺菌。因為經(jīng)過清洗后污濁消失，進行殺菌效果明顯。另外，清潔劑與殺菌劑混淆使用的話，兩者的效果就會減弱。因此清洗與殺菌之間，要進行充分的洗濯，清洗凈后再殺菌，特別是帶油污的，如果油污去除不凈的話，油污就會做為一層保護膜，保護細菌而影響殺菌的效果。次氯酸鈉作為殺菌劑使用時，必須含有有效次氯酸鈉100~200ppm。器具必須充分洗凈。另外，如和其它藥劑混合使用，就會產(chǎn)生有毒氣體（氯氣），所以要特別注意不要與其它殺菌劑混雜使用。三、滅菌的方法1、熱力滅菌2、氣體滅菌3、輻射滅菌4、過濾滅菌1、熱力滅菌：分為干熱滅菌與濕熱滅菌。主要是利用高溫的致死作用，使微生物的蛋白質(zhì)和核酸等重要生物高分子發(fā)生變性、破壞，而導致細胞死亡。（1）干熱滅菌：灼燒與火焰滅菌、干烤滅菌灼燒主要用于接種工具滅菌，如接種針、接種環(huán)、刀、剪等在火焰上燒灼即可達到徹底滅菌。火焰滅菌是在無菌操作中，將試管口、玻璃瓶口、硅氟塑料塞等反復通過火焰數(shù)次，利用火焰對管口等進行滅菌，防止管口污染，作為無菌操作過程中的輔助滅菌手段。干烤滅菌是利用熱輻射及干熱空氣進行滅菌。

（2）濕熱滅菌法：通過熱蒸汽或沸水使細菌蛋白質(zhì)變性而殺滅微生物的方法。包括：煮沸滅菌、流通蒸汽滅菌、高壓蒸汽滅菌煮沸滅菌：加熱使水至沸而殺滅細菌的方法。凡不適于高壓蒸汽滅菌的物品可常壓下在水中煮沸一段時間達到滅菌目的。流通蒸汽滅菌：常壓下，用蒸籠、蒸鍋等在100℃滅菌。僅可殺死細菌繁殖體，不能完全殺滅芽孢。（3）高壓蒸汽滅菌：通過加壓提高蒸汽溫度，穿透力強、溫度高、滅菌效果最好。是最可靠最適用最廣泛的滅菌方法，凡耐高溫和潮濕的物品可應用本法滅菌。注意事項：完全排出高壓滅菌器內(nèi)的冷空氣。（冷空氣存在時，同一表壓下所達到的溫度值偏低，不符合規(guī)定的要求，滅菌就不徹底。2、氣體滅菌：利用化學消毒劑形成的氣體來殺滅微生物。臭氧殺菌消毒

廣泛存在于自然界中，雷雨過后的空氣有一種清新的感覺，是因為空中放電產(chǎn)生臭氧，消滅了空氣中的微生物，凈化了空氣。臭氧具有強烈的殺菌消毒作用。其殺菌消毒原理是：臭氧在常溫、常壓下分子結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定，很快自行分解成氧和單個氧分子，后者具有很強的活性，對細菌具有很強的氧化作用，臭氧氧化分解了細菌內(nèi)氧化葡萄糖所必需的酶，從而破壞其細胞膜，將它殺死。多余的氧原子則會自行重新結(jié)合成為普通氧分子，不存在任何有毒殘留物，故稱為無污染消毒劑。不但對各種細菌（包括肝炎病毒、大腸桿菌、綠膿桿菌及雜菌等）有極強的殺滅能力，且對殺死霉菌也很有效。3、輻射滅菌（1）電離輻射:用引起電離的X射線、γ射線滅菌。電離輻射對微生物的致死作用，主要是細胞內(nèi)生物化學的變化所致。輻射的藥品、食品的安全問題：輻射滅菌用于藥品或食品都應經(jīng)過安全試驗，完全有必要進行科學全面的評價，高劑量的輻射更應慎重。（2）電磁波輻射（包括紫外線[波長190～350nm]、紅外線[波長0.77～1000μm]、微波[波長1～1000mm]）。紫外線滅菌1、紫外線輻射的穿透力很弱，因此主要用于無菌室、某些工作區(qū)的空氣滅菌、物體表面滅菌。2、實踐工作中在無菌室無菌柜凈化工作臺工作室及車間安裝紫外燈，一般僅起殺死空氣中部分微生物的作用，而不能起到完全滅菌的作用。3、紫外線消毒方法驗證中紫外燈需確認的參數(shù)主要有紫外線的波長、紫外線強度、燈管的壽命。4、紫外燈消毒的效果與紫外線強度、照射時間、溫度與濕度等因素有關，還需通過驗證來確定。5、注意事項：紫外線直射對眼、皮膚有損害。紫外線照射過程中產(chǎn)生臭氧，臭氧過多對眼及鼻腔有刺激，產(chǎn)生頭暈、胸悶、血壓降低，所以無菌室及凈化工作臺紫外線照射停止后，請稍等片刻，讓臭氧消散，方可進行實驗操作。4、過濾滅菌：以物理的方法除去介質(zhì)中的微生物。常將空氣或液體中的微生物及雜質(zhì)用不同材料制成的薄膜濾器過濾得到無菌、無雜質(zhì)的空氣或液體。

濾過病毒的濾膜孔徑為25～100nm；濾過細菌的濾膜孔徑為0.22～0.45μm。四、藥品生產(chǎn)中的微生物控制為什么要對藥品生產(chǎn)進行微生物控制？有些微生物可以致??；

防止微生物污染樣品，保證樣品成分的穩(wěn)定等。生產(chǎn)環(huán)境的空氣潔凈度監(jiān)測

根據(jù)GMP的有關規(guī)定，潔凈室分為四個等級，即100級、10，000級區(qū)、100，000級和300，000級，各級別的要求如下：潔凈度級別塵粒最大允許數(shù)/立方米微生物最大允許數(shù)≥0.5μm≥5μm浮游菌/立方米沉降菌/皿100級3,50005110,000級350,0002,0001003100,000級3,500,00020,00050010300,000級10,500,00060,0001,00015浮游菌和沉降菌測試我國對醫(yī)藥工業(yè)潔凈室和控制區(qū)的浮游菌和沉降菌的測試，國家標準有明確規(guī)定。生產(chǎn)環(huán)境的空氣潔凈度監(jiān)測浮游菌測試：采用浮游細菌采樣器原理：根據(jù)顆粒撞擊原理，在抽氣泵作用下，把采樣空氣中的細菌分離出來?？諝庵屑毦话阍?μm左右，不同粒徑的顆粒有不同的沖擊慣性。當空氣通過狹縫加速后，氣流速度大，0.5μm以上的粒子，由于慣性沖擊到培養(yǎng)皿里的培養(yǎng)基上被粘附，同時細菌被收集在培養(yǎng)基上，經(jīng)培養(yǎng)后可成為肉眼可數(shù)的細菌菌落。采樣流量：50L/min

十萬級區(qū)、化妝品控制區(qū)采樣量為250L;萬級區(qū)采樣量為500L；百級區(qū)采樣量為1000L.計算及結(jié)果評定：平均濃度（個/m3）=菌落數(shù)/采樣量對照潔凈級別中每m3的浮游菌最大允許數(shù)來判定所測區(qū)域的潔凈級別是否符合規(guī)定。沉降菌測試：通過自然沉降原理收集空氣中的生物粒子于培養(yǎng)基平皿，經(jīng)若干時間，在適宜的條件下讓其繁殖到可見的菌落進行計數(shù)，計算形成的菌落數(shù)。計算及結(jié)果判定：平均菌落數(shù)=各培養(yǎng)皿中的菌落總數(shù)/培養(yǎng)皿的個數(shù)對照潔凈級別中每皿沉降菌的最大允許數(shù)來判定所測區(qū)域的潔凈級別是否符合規(guī)定。塵粒數(shù)測定：塵埃粒子計數(shù)器：根據(jù)微粒的光散射原理設計而成；能夠測出塵埃粒子的個數(shù)并能夠區(qū)分顆粒的大小，從而計量出凈化級別。根據(jù)儀器上顯示的每立方米空氣中的顆粒數(shù)對照潔凈度級別中每m3的塵粒最大允許數(shù)來判定所測區(qū)域的潔凈級別是否符合規(guī)定。模擬生產(chǎn)操作進行微生物學評估——培養(yǎng)基灌封試驗培養(yǎng)基灌封試驗利用培養(yǎng)基代替產(chǎn)品，檢測微生物在生產(chǎn)線正常運轉(zhuǎn)時的污染狀況。培養(yǎng)基灌封試驗通常經(jīng)三次模擬運轉(zhuǎn)合格后，該潔凈室或控制環(huán)境的生產(chǎn)線的微生物狀況才算合格。培養(yǎng)基灌封試驗的評估不需要對每個產(chǎn)品進行，但必須對每個生產(chǎn)線進行測試。培養(yǎng)基灌封試驗在工作日開始時進行不適合，必須在無菌生產(chǎn)批結(jié)束時進行。通常使用大豆消化酪素肉湯作為灌封運轉(zhuǎn)試驗培養(yǎng)基。污染:污染就是指當某物與不潔凈的或腐壞物接觸或混合在一起使該物變的不純凈或不適用時，即受污染。簡單的說當一個產(chǎn)品中存在不需要的物質(zhì)時，他即受到了污染四、藥品生產(chǎn)中的污染控制污染的形式和載體:污染的形式:

塵埃粒子微生物污染的載體:空氣、水、表面、人。微生物的污染途徑自身污染：由于患者和員工自身攜帶微生物而污染。接觸污染：由于和非無菌的用具、器械或人的接觸而污染?？諝馕廴荆河捎诳諝庵兴⑸锏某两?、附著或被吸入而污染。其他污染：由于其他因素（如昆蟲）而污染。控制微生物的污染途徑有效地阻止室外的污染侵入室內(nèi)。迅速有效地排除室內(nèi)已發(fā)生的污染?？刂莆廴驹?，減少污染發(fā)生量。藥品中微生物污染的特殊性是能繁殖的活細胞生物。數(shù)量少而分布不均勻。多數(shù)處于受損傷狀態(tài)。生存環(huán)境的多樣性及復雜性。防止交叉污染？有需要時要洗手及消毒盡量減少直接以雙手接觸藥品接觸藥品的表面及用具用后清洗轉(zhuǎn)換產(chǎn)品時清洗手的衛(wèi)生每只手可攜帶40萬個細菌；剛洗過的手，每平方厘米也可檢驗出3200個細菌。1～10萬個細菌/1cm2

皮膚表面!洗手的重要性:用流水（如自來水）洗手，能使手上的致病微生物減少80%；用皂液充分洗手，再用自來水沖洗能使致病微生物減少95%。洗手后正確使用消毒劑能使致病微生物減少到99%。洗手的正確方法正確洗手的步驟：1.手心搓手心；2.手心搓手背；3.手指交叉；4.手心搓拇指；5.手心搓手腕。

更衣更衣標準更衣程序：一更：脫衣→換鞋→洗手二更：穿潔凈服/戴帽子/戴口罩緩沖：消毒雙手→潔凈區(qū)...

更衣

著衣種類測定日期細菌數(shù)/100CM上衣內(nèi)側(cè)使用五日后300

外側(cè)使用五日后200褲子內(nèi)側(cè)使用五日后450

外側(cè)使用五日后70帽子內(nèi)側(cè)使用五日后100

外側(cè)使用五日后150口罩內(nèi)側(cè)使用一日后22000

使用一日后100襪子內(nèi)側(cè)使用一日后30000

外側(cè)使用一日后2800更衣的目的：想混進去，沒門！主要的微生物污染源空氣水設備原輔料人員主要的微生物污染源-空氣潔凈度測定包括：懸浮粒子微生物-浮游菌-沉降菌-表面微生物

主要的微生物污染源-水

設計驗證運行維護

飲用水純化水注射用水無菌注射用水

自來水工藝用水…主要的微生物污染源-設備幾乎沒有細菌不“吃”的東西設備和器具與藥品直接接觸設備和器具的清洗清潔程序必須經(jīng)過驗證按清洗周期清洗清洗和存放設備、器具處應與生產(chǎn)區(qū)域潔凈等級相同主要的微生物污染源-原輔料包括厡輔料、內(nèi)包裝材料。-厡輔料微生物的限度標準？-內(nèi)包裝材料微生物的限度標準？符合藥典或行業(yè)標準厡輔料、內(nèi)包裝材料的貯存：-包裝嚴密，不得破損，污染。-清潔貯存。主要的微生物污染源-人員

NoYes…………人體散發(fā)的