致突變實(shí)驗(yàn)綜合分析及評(píng)價(jià)

致突變實(shí)驗(yàn)綜合分析及評(píng)價(jià)——第二部分2023/2/101020304CONTENTS細(xì)菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)（Ames試驗(yàn)）實(shí)驗(yàn)方案結(jié)果判斷依據(jù)分析評(píng)價(jià)背景資料某單位欲對(duì)農(nóng)藥——96%二氯吡啶酸原藥，進(jìn)行致突變?cè)囼?yàn)綜合分析及評(píng)價(jià)，見(jiàn)相關(guān)資料?，F(xiàn)請(qǐng)根據(jù)所學(xué)知識(shí)，查閱資料和文獻(xiàn)，思考并討論以下問(wèn)題。2023/2/1細(xì)菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)（Ames試驗(yàn)）[1]Ames試驗(yàn)是利用突變體的測(cè)試菌株，觀察受試物能否糾正或補(bǔ)償突變體所攜帶的突變改變，判斷其突變性。原理：采用鼠傷寒沙門(mén)菌組氨基酸缺陷突變株作為指示微生物，檢測(cè)受試物致突變的實(shí)驗(yàn)。鼠傷寒沙門(mén)菌突變型菌株為組氨基酸缺陷型(his-),不能自行合成組氨酸,在無(wú)組氨酸的選擇性培養(yǎng)基上不能正常生長(zhǎng)，而在含組氨酸的培養(yǎng)基上則可正常生長(zhǎng)，當(dāng)受到致突變物誘變后突變型回復(fù)突變?yōu)橐吧停╤is+），表現(xiàn)為在無(wú)組氨酸的培養(yǎng)基上也能生長(zhǎng)的菌落數(shù)。如圖示：正向突變野生型細(xì)菌（his+）突變型細(xì)菌（his-）

回復(fù)突變目的：根據(jù)試驗(yàn)菌株在無(wú)組氨酸的培養(yǎng)基上能否形成菌落以及形成菌落的多少，判定受試物是否具有致突變性及致突變性的強(qiáng)弱。2023/2/1實(shí)驗(yàn)方案[2-5]一、實(shí)驗(yàn)名稱(chēng)：96%二氯吡啶酸原藥的鼠傷寒沙門(mén)氏菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)二、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模河^察95％二氯吡啶酸原藥對(duì)鼠傷寒沙門(mén)菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)(Ams試驗(yàn))菌株基因突變，初步探討其致突變性的強(qiáng)弱。為該農(nóng)藥的毒理學(xué)安全性評(píng)價(jià)提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。三、實(shí)驗(yàn)原理：鼠傷寒沙門(mén)菌突變型菌株為組氨基酸缺陷型(his-),不能自行合成組氨酸,在無(wú)組氨酸的選擇性培養(yǎng)基上不能正常生長(zhǎng)，而在含組氨酸的培養(yǎng)基上則可正常生長(zhǎng)，當(dāng)受到致突變物誘變后突變型回復(fù)突變?yōu)橐吧停╤is+），表現(xiàn)為在無(wú)組氨酸的培養(yǎng)基上也能生長(zhǎng)的菌落數(shù)。根據(jù)試驗(yàn)菌株在無(wú)組氨酸的培養(yǎng)基上能否形成菌落以及形成菌落的多少，判定受試物是否具有致突變性及致突變性的強(qiáng)弱。為彌補(bǔ)體外實(shí)驗(yàn)缺乏代謝活化系統(tǒng)的不足，在測(cè)試系統(tǒng)中加入哺乳動(dòng)物微粒體酶（S9）。2023/2/1實(shí)驗(yàn)方案四、試驗(yàn)步驟1、受試物[5]：95％二氯吡啶酸原藥，白色絮狀固體。2、溶劑：二甲基亞砜(DMSO)，光譜純，無(wú)菌。3、Ames菌株：鼠傷寒沙門(mén)菌標(biāo)準(zhǔn)突變株TA97、TA98、TA100和TA102。劑量：采用平板摻入法，在加S9(+S9)和不加S9(一S9)條件下進(jìn)行測(cè)試。在不加S9的條件下測(cè)試該藥對(duì)TA100菌株產(chǎn)生的最小毒性的濃度作為劑量選擇的依據(jù)。查閱相關(guān)文獻(xiàn)后（若沒(méi)有相關(guān)文獻(xiàn)則根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果）以每皿5000ug為最高劑量，按5倍組距下設(shè)每皿1000、200、40、8ug4個(gè)劑量組。4、對(duì)照組：設(shè)自發(fā)對(duì)照組、陰性對(duì)照組和陽(yáng)性對(duì)照組。陽(yáng)性對(duì)照組不加S9的TA97、TA98和TAl02菌株用敵克松(Dexon)，TAl00菌株用疊氮鈉(NaN3)；陽(yáng)性對(duì)照組加S9的TA97、TA98和TAl00菌株用2-氨基芴(2-AF)，TAl02菌株用1，8·二羥基蒽醌(1，8-HAQ)。37℃培養(yǎng)48h后計(jì)數(shù)每皿回變菌落數(shù)，每個(gè)劑量作3個(gè)平行皿。五、結(jié)果與評(píng)價(jià)。2023/2/1實(shí)驗(yàn)結(jié)果判斷[4]若96%二氯吡啶酸原藥的回變菌落數(shù)超過(guò)自發(fā)回變菌落數(shù)的兩倍以上，且各劑量組間呈劑量一反應(yīng)關(guān)系，則該藥對(duì)鼠傷寒沙門(mén)菌標(biāo)準(zhǔn)突變型菌株有誘發(fā)基因突變的作用，反之，這無(wú)該作用。2023/2/1統(tǒng)計(jì)分析2023/2/1統(tǒng)計(jì)分析2023/2/1結(jié)果評(píng)價(jià)結(jié)果評(píng)價(jià)[4]：試驗(yàn)結(jié)果表明，受試物各劑量組對(duì)各測(cè)試菌株在加或不加S9的條件下，其回變菌落數(shù)均未超過(guò)陰性對(duì)照組回變菌落數(shù)的2倍，亦無(wú)明顯的劑量——反應(yīng)關(guān)系，而陽(yáng)性對(duì)照組各測(cè)試菌株的回變菌落數(shù)均明顯增加，并超過(guò)陰性對(duì)照組回變菌落數(shù)的2倍以上。因此可認(rèn)為95％二氯吡啶酸原藥無(wú)誘發(fā)菌株基因突變活性。2023/2/1參考文獻(xiàn)[1]王心如.毒理學(xué)基礎(chǔ)[M].人民衛(wèi)生出版社，2014,162.[2]GB15193.4-2014食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)細(xì)菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)(S)[3]GB15670-1995,農(nóng)藥登記毒理學(xué)試驗(yàn)方法

(S)[4]張愛(ài)華，張華.公共衛(wèi)生與預(yù)防醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)