自動洗板機與ELISA洗滌問題的解決

自動洗板機與ELISA洗滌問題的解決上海精睿生物科技發(fā)展有限公司上海市鑫都路2699弄80號102室聯(lián)系電話真司網(wǎng)址：www.精睿.中國免費咨詢電話：

400-820-3840酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）酶聯(lián)免疫吸附測定(Enzyme-LinkedImmunoSorbentAssay簡稱ELISA)是在免疫酶技術(shù)(immunoenzymatictechniques)上發(fā)展起來的一種新型免疫測定技術(shù)。ELISA是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對底物的高效催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗技術(shù)。ELISA基本流程（上）1.包被：用包被液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為0.5～20μg／ml，按100ul/孔加入酶標(biāo)板，4℃包被過夜。2.洗板：次日棄去孔內(nèi)液體，除去殘留液體，加入洗滌液（約280-300ul/孔），漂洗2-3次，每次3-5min。3.封閉：按200-250ul/孔加入封閉液，室溫2-3小時或37℃1-2小時，也可4℃封閉過夜，然后棄去孔內(nèi)封閉液。4.樣品處理：用洗滌液或樣品稀釋液將待檢樣品(含未知抗原)稀釋至所需濃度5.標(biāo)準(zhǔn)液：用洗滌液或樣品稀釋液將標(biāo)準(zhǔn)液稀釋至所需濃度（定性分析可省略本步驟）；ELISA基本流程（下）6.加樣：按排列順序依次加入50-100ul/孔稀釋好的標(biāo)準(zhǔn)液、處理過的待檢樣品、陰性對照及陽性對照，室溫或37℃

孵育30-60min；7.洗板：同步驟2；8.加酶標(biāo)抗體：酶標(biāo)抗體的稀釋按產(chǎn)品說明書，按50-100ul/孔加入新鮮配制的酶標(biāo)抗體，室溫或37℃孵育1小時；9.洗板：同步驟210.加底物液顯色：按100-150ul/孔加入新配制的TMB底物溶液，室溫避光反應(yīng)15～30分鐘。11.終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入50ul的終止液。12.結(jié)果判定：在酶標(biāo)儀上于405nm(若以ABTS顯色，則410nm)處測OD值。檢測時以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值，若樣品孔中的OD值大于陰性對照孔的2.1倍，即為陽性。酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）的洗滌在酶聯(lián)免疫試驗中，洗板是非常重要的過程。酶聯(lián)免疫試驗(ELISA)洗滌過程雖不是一個反應(yīng)過程，但卻也決定著實驗的成敗。ELISA就是通過洗滌來達到分離游離和結(jié)合的酶標(biāo)記物的目的，通過洗滌以清除殘留在微孔板中未能與固相抗原或抗體相結(jié)合的物質(zhì)，以及在反應(yīng)過程中的非特異性吸附于固相載體上的干擾物質(zhì)。聚苯乙烯對蛋白質(zhì)的吸附是普遍的，在ELISA測定的反應(yīng)過程中應(yīng)盡量避免非特異性吸附，洗滌時又應(yīng)將這些非特異性吸附的干擾物質(zhì)洗滌掉。洗滌如不徹底，特別是最后一次，如有酶結(jié)合物的非特異性吸附，將使空白值升高。另外，在間接法中如血清標(biāo)本內(nèi)的非特異性IgG吸附在固體上而未被洗滌，也將與酶標(biāo)抗體作用而產(chǎn)生干擾。在ELISA操作中，洗滌是非常關(guān)鍵的，應(yīng)引起操作者的高度重視。每進行一次ELISA，至少有3至4步實驗涉及洗板、每步3至4次，總共十幾次，有一定的工作量和勞動強度。手工洗板與機器洗板通常微孔板條的洗滌主要有兩種方式，一種是手工洗滌，一種是使用洗板機洗滌。前者對工作量不大的臨床實驗室，可能較為經(jīng)濟方便，但如操作不規(guī)范，有可能會造成板孔之間的相互交叉“污染”。因此，使用洗板機洗滌，不但可減輕實驗室技術(shù)人員的勞動強度，而且有利于保證ELISA測定的特異性。洗板機經(jīng)過數(shù)十年的發(fā)展，由最初簡單的多頭吸和加液系統(tǒng)，發(fā)展到了今天的融合多種洗滌功能于一身的全自動洗板機，如震蕩、渦流、底部沖洗、兩點吸液、連續(xù)式?jīng)_洗等多種功能方式，并且沖洗壓力、沖洗距離、沖洗時間可根據(jù)需要來進行調(diào)節(jié)，此外有的還具有不同類型微孔形狀的選擇功能。洗板環(huán)境：洗板環(huán)境實際上是一組有利于改進洗滌效果的參數(shù)及洗滌動作。對于具體應(yīng)用來說，有的很實用，效果也不錯，如底部沖洗、兩點吸液、震動、交叉吸液(漂洗)等；而有的可能實際洗滌效果并不佳。對洗板參數(shù)和洗滌動作的精心全面的設(shè)計，應(yīng)可以取得很好的洗滌效果。洗板機洗滌板孔的一般機制洗板機洗滌板孔的一般機制主要涉及到兩個物理作用過程，一是通過加液和吸液對原板孔中液體的一個直接稀釋過程，其優(yōu)劣的評價指標(biāo)是每次吸液后，板孔中液體的殘留量；二是與加液和吸液之間所間隔的時間有關(guān)的對板孔內(nèi)殘留液體的間接稀釋過程，這個過程與液體的擴散有關(guān)，間隔時間越長則擴散越充分。因此，在洗板機的研制中，要達到最佳的洗板效果，就需要圍繞這兩個方面來做文章。首先要盡可能的降低每次吸液后板孔內(nèi)液體的殘留量。這是評價洗板機洗板效果的最為關(guān)鍵的參數(shù)。通常為降低洗板機每次吸液后的液體殘留量，可采用兩點吸液的方式吸液。其二是加快擴散的速率來縮短加液和吸液之間的間隔時間，同時保證有充分的擴散。通常的措施有震蕩、渦流、底部沖洗和連續(xù)式?jīng)_洗等，適當(dāng)增加震蕩的振幅和頻率可增加擴散的充分性。洗板機的發(fā)展(一)簡易型洗板機：簡易型也可稱為手動式洗板機，一般由負壓泵與清洗頭組成，可完成最基本的吸液動作和加液動作的裝置。這類裝置，成本低，使用方便，工作量不大時可以使用。(二)自動式洗板機：其基本結(jié)構(gòu)與簡易型洗板機一樣，一般也是由負壓泵與清洗頭組成，但有自動程序控制功能，儀器可根據(jù)用戶的設(shè)置完成預(yù)定次數(shù)與條數(shù)的洗板，有的具有簡單的儲存功能。主要目的是利用自動化技術(shù)，替代手工操作。其中有條式與板式之分。如LABSYSTEM的W4，BIO—RAD早期的1250，拓普公司的DEM—2等。(三)集成環(huán)境式洗板機：此類洗板機是隨著ELISA的普遍應(yīng)用，由儀器生產(chǎn)廠商根據(jù)ELISA應(yīng)用專家的建議，結(jié)合各自對洗板技術(shù)的研究而發(fā)展起來的，其特點在于能提供良好的洗板環(huán)境，強調(diào)洗滌效果而非自動化，具有一定的智能特性，如LABSYSTEM的ACSENTWASH，拓普的DEM-3等。洗板機的作用

替代實驗人員工作，減輕實驗人員的勞動強度。ELISA是一項比較成熟經(jīng)典技術(shù)，它是一種非均相免疫分析，即在反應(yīng)中的每一步都有洗滌過程，從而去除未反應(yīng)物質(zhì)和干擾物質(zhì)，ELISA的洗板工作是一項簡單、重復(fù)的機械工作，完全可以由洗板機來完成，實驗人員有更多的時間做更重要的工作。保證ELISA結(jié)果的可重復(fù)性：洗板機大多是由微電腦控制的，能夠準(zhǔn)確地按照設(shè)定的參數(shù)運行，在正確使用和正確運行的前提下，結(jié)果的可重復(fù)性是容易得到保證的。有效防止生物實驗危險因子對環(huán)境的污染：進行ELISA檢測時，經(jīng)常要使用血清、體液、組織等生物材料，任何生物材料都應(yīng)視為傳染性的。洗板機洗板時，將所有的廢液吸進廢液瓶中，容易進行無害化處理。洗板機的選購時應(yīng)考慮的因素洗滌功能的充分性：能否提供可選擇的洗板環(huán)境，如洗板次數(shù)、條數(shù)、浸泡時間等是洗板機的基本參數(shù)，一般均可滿足。板孔的兼容性與擴展性：兼容性主要是對于國內(nèi)不同規(guī)格、尺寸略有差異的微孔板的兼容，儀器應(yīng)具有對微孔板的位置調(diào)節(jié)功能，適應(yīng)國內(nèi)ELISA試劑盒中微孔板條的實際情況。儀器自身及洗滌效果的可靠性：一是儀器自身的可靠性，保證儀器在使用壽命期內(nèi)可以正常顯示、精確運動等，這可通過考查儀器生產(chǎn)廠商的技術(shù)與生產(chǎn)實力來論證；二是洗滌效果的可靠性，即真正達到代替手工洗滌、甚至優(yōu)于手工洗滌的目的。配件是否充分：廠方是否可以提供常用的、易損的配件，如清洗頭，應(yīng)該8道、12道各備用1個，并且定期淘汰，像洗液瓶、硅膠管等應(yīng)可方便買到。售后服務(wù)是否及時、價格是否合理：洗板機是使用率相對較高的儀器，單從運動角度對比，其頻率是酶標(biāo)儀的幾十倍，有的醫(yī)院使用2年就報廢，原因在于沒有售后服務(wù)或售后服務(wù)價格太高，有的僅因為缺少一個配件而使整機報廢，十分可惜。故及時的售后服務(wù)與相對合理的服務(wù)價格，是購買洗板機應(yīng)考慮的因素。人機界面是否友好，最好是中文顯示。JR2008A型96/384多功能自動洗板機JR2008-A型自動96/384孔微孔板清洗機是由上海精睿生物科技發(fā)展有限公司于2008年隆重推出的新一代多功能的微孔反應(yīng)板清洗機器，由微電腦控制，能夠自動完成多種規(guī)格的96孔和384孔酶標(biāo)微孔反應(yīng)的清洗工作，是進行酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）必不可少的設(shè)備，可廣泛用于從事生命科學(xué)研究工作的科研院所，高等院校以及醫(yī)院、血站、疾病控制中心等單位。

操作步驟開機：打開電源開關(guān)，儀器進行初始化，自動提示，然后處于待機狀態(tài)清洗頭清洗：按下清洗鍵，清洗頭將在清洗槽處進行清洗。編程：按下編程鍵，根據(jù)機器的提示對洗板參數(shù)進行設(shè)置，最后保存程序時將這些參數(shù)保存到設(shè)定的程序中。運行：按下增加鍵，減少鍵和確定鍵選擇合適的程序，然后按下運行鍵開始洗板。編程既洗滌參數(shù)設(shè)置按下編程鍵，出現(xiàn)選擇板型，96孔或384孔，通過增加或減少鍵進行選擇，按確認鍵進入下一項選擇清洗方式：板洗、條洗、單、雙、逐排清洗通道數(shù)：8、12、16、24清洗條數(shù)：1~12（96孔）；1~24（384）清洗容量：50~400μl；清洗次數(shù)：1~20次暫停時間：0~60秒浸泡時間：0~250秒振蕩設(shè)定：1或0吸液時間：100~10000毫秒吸液方式：直接吸液或旋轉(zhuǎn)吸液浸泡完后是否吸干：是或否最后保存程序。使用JR2008A型自動洗板機時應(yīng)注意洗液瓶和廢液瓶一定要旋緊，以免漏氣；廢液瓶中的廢液不能超過瓶頸處，一定要及時清空；酶標(biāo)板一定要放卡在托盤內(nèi)；嚴守生產(chǎn)質(zhì)量，保證售后服務(wù)精睿公司每一臺儀器從設(shè)計加工到出廠，在每一個零件上、每一個環(huán)節(jié)中，都體現(xiàn)著精睿人一絲不茍的工作態(tài)度。我們每一臺出廠的儀器都由高級工程師親自把關(guān)調(diào)試。售出的每一臺儀器都由工程師安裝調(diào)試，對操作人員進行培訓(xùn)，保證儀器能夠得到正確使用和正常運行。我們對洗板機提供三年的質(zhì)保，難能可貴。（市場中同類產(chǎn)品的質(zhì)保多為一年。）精睿公司免費服務(wù)咨詢電話：400-820-3840精睿公司提供ELISA一條龍服務(wù)試劑（反應(yīng)的主體）主要試劑：抗原、抗體、酶輔助試劑：包被液、洗滌液、封閉液、稀釋液、底物液、終止液酶標(biāo)板：96孔和384孔，反應(yīng)的載體洗板機：可靠實驗的保證酶標(biāo)儀：量化的結(jié)果判定可拆分使用的384孔酶標(biāo)板專利產(chǎn)品高通量（384孔）微型化（80微升）易拆分（使用方便）品種齊全價格便宜品質(zhì)保證96孔酶標(biāo)板透明板用于ELISA低吸附能力（100~200ng/cm2）中吸附能力（200~300ng/cm2）高吸附能力（300~400ng/cm2）黑色板用于免疫熒光實驗白色板用于自發(fā)光實驗8*12可任意拆分JR-09系列96/384酶標(biāo)儀JR-09系列96/384酶標(biāo)儀采用當(dāng)今先進的內(nèi)嵌式計算機系統(tǒng)，處理能力大幅提高，使之具備了精準(zhǔn)可靠、快捷穩(wěn)定的卓越性能，能夠閱讀處理96孔和384孔酶標(biāo)反應(yīng)板。其強大的功能支持和新穎的人機互動操作平臺，給了用戶極其靈活、獨具個性的使用感受，

可廣泛應(yīng)用于醫(yī)院臨床診斷、免疫病理檢測、微生物抗原及抗體檢測、寄生蟲病診斷、血液病診斷、內(nèi)分泌障礙測定、植物病蟲害研究學(xué)等領(lǐng)域，是具有國際先進水平，在國內(nèi)處于領(lǐng)先地位的新一代高級自動酶標(biāo)儀。多通道加液器精睿更為您提供了完善的高通量實驗的加樣方案：自動加樣系統(tǒng)、16/24道排槍。每個通道獨立控制，特別設(shè)計用于384孔微孔板的加樣，也很方便的向96孔板加樣量程有：10~100微升/每通道5~50微升/每通道0