免疫組化應(yīng)用

免疫組化在病理診斷中的應(yīng)用北京友誼醫(yī)院病理科柳瑋華免疫組化介紹

免疫組化原理Enlivision染色方法免疫組化的使用范圍各系統(tǒng)腫瘤的抗體表達(dá)免疫組化的原理根據(jù)抗原和抗體特異性反應(yīng)的免疫學(xué)原理，應(yīng)用標(biāo)記抗體檢測組織中未知抗原的方法?？乖?抗體（標(biāo)記）→抗原抗體復(fù)合物通過抗原和抗體的特異性結(jié)合檢測組織中的化學(xué)成分（蛋白—抗原）顯示系統(tǒng)：抗原抗體復(fù)合物+檢測系統(tǒng)將二抗和酶通過一個多聚葡聚糖骨架聯(lián)接成一個多聚體（即EnVision）PrimaryAntibodyPolymercomplexSubstrate-chromogensolutiontissueEnlivision染色方法(1)、將切片撈至APES膠片上，放入60℃溫箱中烘烤1小時。(2)、經(jīng)二甲苯脫蠟，梯度酒精脫水后流水沖洗。(3)、過3％H2O2中20min后流水沖洗。(4)、修復(fù)高火3min后，低火15min后，自然冷卻至室溫。(5)、取出玻片放至濕盒，PBS沖洗，3minx3。擦干玻片，每張玻片加1滴或50μl的第一抗體40min。(6)、PBS沖洗，3minx3。擦干玻片，每張玻片加1滴或50μl的聚合物增強(qiáng)劑(試劑A），室溫孵育20min。(7)、PBS沖洗，3minx3。擦干玻片，每張玻片加1滴或50μl的酶標(biāo)鼠/兔聚合物(試劑B），室溫下孵育30min。(8)、PBS沖洗，3minx3。擦干玻片，每張玻片加2滴或100μl的DAB液，顯微鏡下觀察，10min顯色。(9)、流水沖洗，蘇木素復(fù)染1-2min，0.1％鹽酸分化，自來水沖洗后返藍(lán)。(10)、梯度酒精脫水干燥，二甲苯透明，中性樹膠封片。免疫組化的使用范圍組織學(xué)標(biāo)本中的應(yīng)用細(xì)胞塊中的應(yīng)用各系統(tǒng)腫瘤的抗體表達(dá)對腫瘤進(jìn)行來源分類

上皮性腫瘤的標(biāo)記物CK間葉腫瘤的標(biāo)記物Vimentin淋巴造血系統(tǒng)腫瘤的標(biāo)記物L(fēng)CA神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤的標(biāo)記物Syn、CgA、CD56各系統(tǒng)腫瘤的抗體表達(dá)上皮性腫瘤中的腺癌CK7+CK20-Villin+Villin-可見于：胃腺癌(41.67%)、乳頭狀腎細(xì)胞癌(17.39%)、乳腺浸潤性導(dǎo)管癌(5.36%)、卵巢漿液性腺癌(3.7%)少見于：肺鱗癌、肺腺癌、肺小細(xì)胞癌、腎透明細(xì)胞癌、嫌色細(xì)胞癌、前列腺癌、直腸腺癌、乳腺浸潤性小葉癌、卵巢粘液性癌?？梢娪冢喝橄俳櫺托∪~癌(100%）、肺腺癌(95.83%）、乳腺浸潤型導(dǎo)管癌(78.57%)、卵巢漿液性腺癌(70.37%）、嫌色細(xì)胞癌(66.67%）、卵巢粘液性腺癌(37.5%）、肺鱗癌(11.43%）、前列腺癌(9.09%）、直腸腺癌(2.78%）、胃腺癌(2.78%）、腎透明細(xì)胞癌(2.33%）。少見于：肺小細(xì)胞癌、乳頭狀腎細(xì)胞癌。CK7+CK20+Villin+Villin-可見于：胃腺癌(13.89%）、卵巢粘液性腺癌(12.5%）、直腸腺癌(5.56%），乳頭狀腎細(xì)胞癌(4.35%）少見于：肺鱗癌、肺腺癌、肺小細(xì)胞癌、腎透明細(xì)胞癌、腎嫌色細(xì)胞癌、乳腺癌、卵巢漿液性癌?？梢娪冢郝殉舱骋盒韵侔?12.5%）乳腺浸潤性導(dǎo)管癌(3.57%）、胃腺癌(2.78%）、直腸腺癌(2.78%）。少見于：肺鱗癌、肺腺癌、肺小細(xì)胞癌、腎透明細(xì)胞癌、乳頭狀腎細(xì)胞癌、嫌色細(xì)胞癌、前列腺癌、乳腺浸潤性小葉癌、卵巢漿液性癌。CK7-CK20-Villin+Villin-可見于：乳頭狀腎細(xì)胞癌(43.47%）、胃腺癌(18.06%）、直腸腺癌(16.67%）、卵巢粘液腺癌(12.5%）、嫌色細(xì)胞癌(11.11%）、前列腺癌(4.54%）。少見于：肺鱗癌、肺腺癌、肺小細(xì)胞癌、腎透明細(xì)胞癌、乳腺浸潤型導(dǎo)管癌、乳腺浸潤性小葉癌、卵巢漿液性癌?？梢娪冢悍涡〖?xì)胞癌(100%）、腎透明細(xì)胞癌(42/43，97.67%）肺鱗癌(88.57%）、前列腺癌(86.36%）、乳頭狀腎細(xì)胞癌(34.78%）、嫌色細(xì)胞癌(22.22%）、卵巢漿液腺癌(18.52%）、乳腺浸潤型導(dǎo)管癌(16.07%）、胃腺癌(13.89%）、直腸腺癌(5.56%）、肺腺癌(4.17%）。少見于：乳腺浸潤性小葉腺癌、卵巢粘液腺癌。CK7-CK20+Villin+Villin-可見于：直腸腺癌(52.78%)、卵巢粘液性腺癌(25%)、胃腺癌(6.94%)、卵巢漿液性癌(3.7%）。少見于：肺鱗癌、肺腺癌、肺小細(xì)胞癌、腎透明細(xì)胞癌、乳頭狀腎細(xì)胞癌、嫌色細(xì)胞癌、前列腺癌、乳腺浸潤性導(dǎo)管癌、乳腺浸潤性小葉癌?？梢娪冢褐蹦c腺癌(13.89%）、卵巢漿液性腺癌(3.7%）。少見于：肺鱗癌、肺腺癌、肺小細(xì)胞癌、腎透明細(xì)胞癌、乳頭狀腎細(xì)胞癌、嫌色細(xì)胞癌、前列腺癌、乳腺浸潤性導(dǎo)管癌、乳腺浸潤性小葉癌、卵巢粘液性癌、胃腺癌1、軟組織小圓細(xì)胞腫瘤

CKVimEMALCANSECgADesS-100小細(xì)胞未分化癌+-+-----神經(jīng)內(nèi)分泌癌+-+-++--神經(jīng)母細(xì)胞瘤-+--++-+/-尤文肉瘤/PNET-+--++-+/-胚胎性橫紋肌肉瘤-+----+-惡性淋巴瘤---+----惡性黑色素瘤-+---/+--+(HMB45+)CK、Vim、NSE、CgA、Des、HMB45胞漿

EMA胞膜/胞漿LCA胞膜S-100胞核/漿間皮：EMA、Calretinin陽性橫紋?。篋esmin(+)Actin、MyoD1（弱+）Myglobin血管：CD31、CD34陽性顆粒細(xì)胞瘤：S-100、NSECD34Bcl-2S-100神經(jīng)纖維瘤+++孤立性纖維性腫瘤++-滑膜肉瘤-+-孤立性纖維性腫瘤CD99+滑膜肉瘤CK、Vimentin雙陽2、乳腺

P63CK5/6E-cad34βE12導(dǎo)管原位癌+-+-浸潤性導(dǎo)管癌--+-浸潤性小葉癌---+P63胞核CK5/6胞漿E-cad胞漿、胞膜34βE12胞漿

乳腺病理ER、PR顯示腫瘤的內(nèi)分泌表達(dá)，與腫瘤的內(nèi)分泌治療反應(yīng)率相關(guān)CerbB-2腫瘤相關(guān)因子，靶向治療KI-67顯示細(xì)胞增殖指數(shù)ER、PR胞核CerbB-2胞膜KI-67胞核

中間型上皮成熟型

CK5/6+,CK8/18+CK5/6-,CK8/18+干細(xì)胞CK5/6+,CK8/18-SMA-,P63-中間型肌上皮成熟型

CK5/6+,SMA+,P63+CK5/6-,SMA+,P63+CK5/6,CK8/18，SMA胞漿P63胞核CerbB-2的染色意義陽性強(qiáng)度的判斷：強(qiáng)的著色是指4x或10x物鏡下易于觀察到，弱的強(qiáng)的著色是指需要用40x物鏡觀察。CerbB-2與治療及預(yù)后的關(guān)系不僅與浸潤型乳腺癌的不良預(yù)后有關(guān)，并能預(yù)測多種化療藥機(jī)內(nèi)分泌治療的敏感性。靶向藥物赫賽汀CerbB-2的染色意義0+浸潤性腫瘤細(xì)胞無著色1+任何比例的浸潤性腫瘤細(xì)胞呈弱而不完整的包膜著色或＜10%的腫瘤細(xì)胞呈弱且完整著色2+≥10%的腫瘤細(xì)胞呈現(xiàn)弱或不一致的、完整的包膜著色；或≤30%的腫瘤細(xì)胞呈現(xiàn)強(qiáng)且完整的包膜著色3+＞30%的浸潤性腫瘤細(xì)胞呈強(qiáng)且完整包膜著色指導(dǎo)治療ER,PR,CerbB-2,Ki-67ER+PR+:60-70%的內(nèi)分泌治療反應(yīng)率ER-PR-:10%的內(nèi)分泌治療反應(yīng)率ER+PR-:40%的內(nèi)分泌治療反應(yīng)率ER-PR+:46%的內(nèi)分泌治療反應(yīng)率陽性分級（或陽性細(xì)胞數(shù)比例）與治療反應(yīng)的相關(guān)性尚缺乏統(tǒng)一認(rèn)識3、消化CK7-/CK20+胃腸間質(zhì)瘤CD117，CD34肝TTF-1漿陽、Hep、AFPCDX2主要表達(dá)于結(jié)腸，胃癌和卵巢粘液性腺癌也有表達(dá)CD117胞膜/胞漿，CD34胞膜CDX2胞核CK7，CK20，AFP，Hep胞漿4、泌尿腎

CK-HCK-LVimentinE-cadCD10EMACD117透明細(xì)胞-++-+(膜)+-（乳頭狀癌）嫌色細(xì)胞癌++-+-/+（漿）Hale鐵++（嗜酸細(xì)胞腺瘤）集合管癌+++-±Villin-CK-H、CK–L、Vimentin胞漿CD10胞膜EMA、CD117、E-cad胞膜/胞漿

移行上皮：正常CK7陽性，CK20陽性提示腫瘤5、生殖卵巢上皮性腫瘤

CK7+/CK20-，CA125卵巢上皮（+）無性細(xì)胞瘤（女性）=精原細(xì)胞瘤（男性）

Vimentin，PLAP，CD117胚胎性癌

AFP，CD30，PLAP子宮

HCGHPL合體滋養(yǎng)葉+++弱+細(xì)胞滋養(yǎng)葉--中間滋養(yǎng)葉+/弱++++HCG，HPL胞漿

VimentinERCEA子宮內(nèi)膜樣癌++-宮頸癌--+Vimentin胞漿ER胞核CEA胞膜/胞漿前列腺基底細(xì)胞陽性標(biāo)記：高分子量CK（34βE12,CK5/6）P504s腫瘤性腺泡（+），良性腺泡（-）PSA前列腺上皮（+）34βE12，CK5/6，PSA，P504s胞漿6、神經(jīng)內(nèi)分泌甲狀腺TGTTF-1CalcitoninCD56乳頭狀癌++--濾泡癌++-+髓樣癌