GB/T 17999.2-2008SPF雞微生物學(xué)監(jiān)測(cè)第2部分：SPF雞紅細(xì)胞凝集抑制試驗(yàn)

犐犆犛１１．２２０

犅４１

中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

犌犅／犜１７９９９．２—２００８

代替ＧＢ／Ｔ１７９９９．１—１９９９

犛犘犉雞微生物學(xué)監(jiān)測(cè)

第２部分：犛犘犉雞紅細(xì)胞凝集抑制試驗(yàn)

犛犘犉犮犺犻犮犽犲狀—犕犻犮狉狅犫犻狅犾狅犵犻犮犪犾狊狌狉狏犲犻犾犾犪狀犮犲—

犘犪狉狋２：犎犲犿犪犵犵犾狌狋犻狀犪狋犻狅狀犻狀犺犻犫犻狋犻狅狀狋犲狊狋犳狅狉犛犘犉犮犺犻犮犽犲狀

２００８１２３１發(fā)布２００９０５０１實(shí)施

中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局

發(fā)布

中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)

書

犌犅／犜１７９９９．２—２００８

前言

ＧＢ／Ｔ１７９９９《ＳＰＦ雞微生物學(xué)監(jiān)測(cè)》分為１０個(gè)部分：

———第１部分：ＳＰＦ雞微生物學(xué)監(jiān)測(cè)總則；

———第２部分：ＳＰＦ雞紅細(xì)胞凝集抑制試驗(yàn)；

———第３部分：ＳＰＦ雞血清中和試驗(yàn)；

———第４部分：ＳＰＦ雞血清平板凝集試驗(yàn)；

———第５部分：ＳＰＦ雞瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)；

———第６部分：ＳＰＦ雞酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)；

———第７部分：ＳＰＦ雞胚敏感試驗(yàn)；

———第８部分：ＳＰＦ雞雞白痢沙門氏菌檢驗(yàn)；

———第９部分：ＳＰＦ雞試管凝集試驗(yàn)；

———第１０部分：ＳＰＦ雞間接免疫熒光試驗(yàn)。

本部分為ＧＢ／Ｔ１７９９９的第２部分。

本部分修訂參照了ＧＢ／Ｔ１８９３６—２００３《高致病性禽流感診斷技術(shù)》、ＳＮ／Ｔ１１０９—２００２《新城疫微

量紅細(xì)胞凝集抑制試驗(yàn)操作規(guī)程》、ＳＮ／Ｔ１１８２．２—２００４《禽流感微量紅細(xì)胞凝集抑制試驗(yàn)》、

ＮＹ／Ｔ５５１—２００２《產(chǎn)蛋下降綜合征診斷技術(shù)》、ＯＩＥ《陸生動(dòng)物（哺乳動(dòng)物、禽鳥和蜜蜂）診斷試驗(yàn)和疫苗

手冊(cè)》（第五版）中的有關(guān)規(guī)定。

本部分代替ＧＢ／Ｔ１７９９９．１—１９９９《ＳＰＦ雞紅細(xì)胞凝集抑制試驗(yàn)》。

本部分與ＧＢ／Ｔ１７９９９．１—１９９９相比主要變化如下：

———增加了規(guī)范性附錄Ａ“試劑的配制”和資料性附錄Ｂ“１％雞血紅細(xì)胞懸液的制備”；

———增加了對(duì)Ｖ形孔微量血凝板進(jìn)行試驗(yàn)的結(jié)果判定；

———對(duì)禽流感病毒、新城疫病毒、傳染性支氣管炎病毒、禽腺病毒Ⅲ群（ＥＤＳ）雞毒支原體和滑液囊

支原血凝抑制抗體的判定標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了修改。

本部分的附錄Ａ為規(guī)范性附錄，附錄Ｂ為資料性附錄。

本部分由中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部提出。

本部分由全國(guó)動(dòng)物防疫標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)（ＳＡＣ／ＴＣ１８１）歸口。

本部分起草單位：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所、中國(guó)動(dòng)物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心、濟(jì)南斯帕法

斯家禽有限公司。

本部分主要起草人：曲連東、劉家森、韓凌霞、邵衛(wèi)星、朱果、單忠芳、姜騫、司昌德、于海波、孟慶文。

本部分所代替標(biāo)準(zhǔn)的歷次版本發(fā)布情況為：

———ＧＢ／Ｔ１７９９９．１—１９９９。

Ⅰ

書

犌犅／犜１７９９９．２—２００８

犛犘犉雞微生物學(xué)監(jiān)測(cè)

第２部分：犛犘犉雞紅細(xì)胞凝集抑制試驗(yàn)

１范圍

ＧＢ／Ｔ１７９９９的本部分規(guī)定了紅細(xì)胞凝集抑制試驗(yàn)的技術(shù)要求。

本部分適用于對(duì)ＳＰＦ雞進(jìn)行以下病原微生物的血凝抑制抗體檢測(cè)：禽流感病毒（ＡｖｉａｎＩｎｆｌｕｅｎｚａ

Ｖｉｒｕｓ），傳染性支氣管炎病毒（ＩｎｆｅｃｔｉｏｕｓＢｒｏｎｃｈｉｔｉｓＶｉｒｕｓ），新城疫病毒（ＮｅｗｃａｓｔｌｅＤｉｓｅａｓｅＶｉｒｕｓ），禽

腺病毒Ⅲ群（減蛋綜合征病毒）（ＡｖｉａｎＡｄｅｎｏｖｉｒｕｓＧｒｏｕｐⅢ），雞毒支原體（犕狔犮狅狆犾犪狊犿犪犵犪犾犾犻狊犲狆狋犻犮

狌犿），滑液囊支原體（犕狔犮狅狆犾犪狊犿犪狊狔狀狅狏犻犪犲）。

２原理

許多病原微生物具有凝集動(dòng)物紅細(xì)胞的能力，這種凝集紅細(xì)胞的能力能被特異性抗體所抑制，因此

可用已知病原微生物檢測(cè)相應(yīng)的血凝抑制性抗體。

３試劑和器材

３．１試劑

３．１．１血凝抗原。

３．１．２陰性、陽性血清。

３．１．３被檢血清。

３．１．４雞紅細(xì)胞。

３．１．５０．８５％氯化鈉（ＮａＣｌ）（見附錄Ａ）。

３．１．６阿氏液（見附錄Ａ）。

３．２器材

３．２．１９６孔微量血凝板（Ｕ形孔或Ｖ形孔）。

３．２．２微量移液器（量程為２５μＬ、５０μＬ、１００μＬ）或可調(diào)微量移液器（量程涵蓋２５μＬ、５０μＬ、１００μＬ）

及吸頭。

３．２．３水浴鍋。

３．２．４離心機(jī)與刻度離心管。

４操作程序

４．１紅細(xì)胞懸液的制備和抗原血凝效價(jià)測(cè)定

４．１．１１％雞紅細(xì)胞懸液的制備

參見附錄Ｂ。

４．１．２抗原血凝效價(jià)測(cè)定

４．１．２．１于９６孔微量血凝板的第１孔～第１２孔加入生理鹽水２５μＬ，共作２排。每排的第１孔加入

抗原２５μＬ，用微量移液器，從第１孔～第１１孔對(duì)抗原作系列倍比稀釋：即將第１孔的抗原與生理鹽水

用移液器反復(fù)吹吸３次后，吸出２５μＬ移至第２孔，再反復(fù)吹吸３次后，吸出２５μＬ移至第３孔，依此類