GB/T 18652-2002致病性嗜水氣單胞菌檢驗方法

IcS.11.220B41中華人民共和國國家標準GB/T18652—2002致病性暗水氣單胞菌檢驗方法Methodsfordetectionofpathogenicaeromonashydrophila2002-02-19發(fā)布2002-05-01實施中華：人民共；和國發(fā)布國家質量監(jiān)督檢驗檢疫總局

GB/T18652-2002暗水氣單胞菌在自然界中廣泛分布，有致病性菌林和非致病性菌株之分。致病性菌林可感染魚類、兩棲類、爬行類、烏類和哺乳類等動物.包括鯽、團頭魴、、、鯉、、草魚、香魚、狼鱸、虹鱗、尼羅羅非魚、斑點叉尾、黃鰭、日本鰻、歐洲鰻、翹嘴、牛蛙、美洲鱷、中華整、貂、駱、免、豬、牛等。臨床上以急性出血性敗血癥為主要特征。慢性感染則主要表現為皮膚潰瘍或腸炎。人亦可因致病性暗水氣單胞菌感染而發(fā)生腹瀉及食物中毒本標準在暗水氣單胞菌的鑒定中，參考了《伯杰氏鑒定細菌學手冊》第九版.1994)中有關暗水氣單胞菌的內容。在曙水氣單胞菌的分離鑒定中.除采用選擇培養(yǎng)基RS培養(yǎng)基及鑒別培養(yǎng)基暗水氣單胞菌（AHM）培養(yǎng)基外.還應借助一些生化反應將其與假單胞菌、鄰單胞菌、腸桿菌、弧菌及其他氣單胞菌進行區(qū)分。蛋白酶是暗水氣單胞菌重要的毒力決定因子,與該菌的致病性密切相關.凡蛋白酶陽性的暗水氣單胞菌均具致病性。蛋白酶的檢測除采用脫脂奶平板法外.還可采用斑點酶聯(lián)免疫試驗。本標準可用于暗水氣單胞菌的分離鑒定，而且可區(qū)分致病性菌株和非致病性菌株，有助于致病性曙水氣單胞菌感染的確切診斷。本標準的附錄A、附錄B是標準的附錄,附錄C是提示的附錄本標準由中華人民共和國農業(yè)部提出。本標準由全國動物檢疫標準化技術委員會歸口本標準起草單位：南京農業(yè)大學動物醫(yī)學院。本標準主要起草人：陸承平、陳懷青。

中華人民共和國國家標準GB/T118652—2002致病性暗水氣單胞菌檢驗方法Methodsfordetectionofpathogenicaeromonashydrophila1范圍本標準規(guī)定了致病性曙水氣單胞菌的檢驗方法。本標準適用于患病魚類等易感動物及水樣中致病性暗水氣單胞菌的分離、鑒定.也可用于送檢菌株的鑒定2致病性暗水氣單胞菌檢驗程序檢驗程序的流程示意圖見附錄C(提示的附錄)。2.1暗水氣單胞菌的分離2.1.1準備2.1.1.1各種培養(yǎng)的制備方法見附錄A(標準的附錄)2.1.1.2各種試劑的制備方法見附錄B(標準的附錄)。2.1.2待檢樣本待檢樣本可包括病料、水樣及送檢菌株.病料既可是無菌采取的易感動物的腎、肝、牌等未污染病料,也可是糞便或病變皮膚等污染病料,如樣本為菌株,應先接種于普通肉湯(見附錄A中A1).28℃培養(yǎng)24h.再劃線接種于普通瓊脂平板(見附錄A中A2)，使之形成單個菌落,以供鑒定用2.1.3分離2.1.3.1未污染病料的分離2.1.3.1.1接種環(huán)(鉑金耳)火焰滅菌.冷卻。2.1.3.1.2用接種環(huán)取病料。2.1.3.1.3劃線接種于普通瓊脂平板2.1.3.1.428C培養(yǎng)24h.2.1.3.2污染病料的分離2.1.3.2.1接種環(huán)(鉑金耳)火焰滅菌.冷卻2.1.3.2.2用接種環(huán)取病料。2.1.3.2.3接種于RS瓊脂平板(見附錄A中A3）2.1.3.2.428C培養(yǎng)24h。2.1.3.3水樣的分離：2.1.3.3.1用孔徑為0.2m的硝酸纖維素微孔濾膜過濾水樣2.1.3.3.2取出濾膜,置含有滅菌堿性蛋白陳水(見附錄A中A4)的試管中.2.1.3.3.328C培養(yǎng)24h.2.1.3