標準解讀

《GB/T 19495.5-2004轉基因產品檢測核酸定量PCR檢測方法》是中國關于轉基因產品檢測的一項國家推薦性標準,重點介紹了使用聚合酶鏈反應(PCR)技術對轉基因產品中特定核酸序列進行定量檢測的方法。以下是該標準的主要內容概述:

標準范圍

本標準規(guī)定了利用實時熒光定量PCR技術檢測轉基因產品中目標DNA或RNA片段的濃度或拷貝數(shù)的方法。適用于轉基因植物、微生物及其制品中轉基因成分的定性和定量分析。

術語和定義

  • 實時熒光定量PCR:通過在PCR擴增過程中實時監(jiān)測熒光信號強度變化,實現(xiàn)對模板DNA初始量的定量分析。
  • 標準曲線法:利用已知濃度的標準品建立熒光信號與模板濃度之間的關系曲線,用于未知樣品的定量分析。

原理

該方法基于TaqMan探針或SYBR Green染料技術,在PCR擴增時,隨著靶標序列的增加,熒光信號強度隨之增強,通過監(jiān)測這一過程,可以計算出樣本中目標核酸的初始含量。

試劑與材料

詳細列出了進行PCR實驗所需的各種試劑、引物、探針的選擇原則及質量要求,以及標準品的制備方法。

儀器設備

包括實時熒光定量PCR儀、離心機、超凈工作臺等實驗設備的基本要求和操作規(guī)范。

檢測步驟

  1. 樣品處理:詳細說明了從轉基因產品中提取DNA或RNA的步驟和注意事項。
  2. PCR反應體系配制:介紹如何根據實驗需求準備反應混合液。
  3. PCR程序設置:包括預變性、循環(huán)變性、退火、延伸等各階段的溫度和時間設定。
  4. 數(shù)據分析:解釋如何根據標準曲線對實驗結果進行定量分析。

精密度與準確度

提供了重復性限和再現(xiàn)性限的計算方法,以及評價檢測方法精密度和準確度的準則。

檢出限與定量限

定義了檢出限(LOD)和定量限(LOQ),明確了能可靠檢測和定量的最低核酸濃度。

試驗報告

規(guī)定了檢測報告應包含的信息,如樣品信息、檢測方法、結果數(shù)據、結論及必要的備注等。

該標準為轉基因產品中特定核酸序列的定量檢測提供了統(tǒng)一的技術指導和操作流程,確保了檢測結果的可比性和準確性,對于轉基因產品的安全性評估、市場監(jiān)管及貿易具有重要意義。


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  • 被代替
  • 已被新標準代替,建議下載現(xiàn)行標準GB/T 19495.5-2018
  • 2004-04-13 頒布
  • 2004-04-13 實施
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文檔簡介

ICS67.050B04中華人民共和國國家標準GB/T:19495.5-一2004轉基因產品檢測核酸定量PCR檢測方法Detectionofgeneticallymodifiedorganismsandderivedproducts-QuantitativePCRmethodsbasedonnucleicacid2004-04-13發(fā)布2004-04-13實施中華人民共和國國家質量監(jiān)督檢驗檢疫總局發(fā)布中國國家標準化管理委員會

GB/T19495.5-2004三前言范圍2規(guī)范性引用文件3術語、定義和縮略語·防污染措施45原理6試劑7主要儀器設備8檢測…………結果分析與計算10結果表述…側試報告附錄A(規(guī)范性附錄)轉基因大豆GTS-40-3-2實時熒光PCR檢測方法附錄B(規(guī)范性附錄)轉基因玉米MON810實時熒光PCR檢測方法10附錄C(規(guī)范性附錄)轉基因玉米Br176實時熒光PCR檢測方法附錄D(規(guī)范性附錄)轉基因玉米Bul1實時熒光PCR檢測方法工7附錄E(規(guī)范性附錄)轉基因玉米GA21實時熒光PCR檢測方法10附錄F(規(guī)范性附錄)轉基因玉米T25實時熒光PCR檢測方法附錄G(規(guī)范性附錄)轉基因油菜RT73實時熒光PCR檢測方法參考文獻25

GB/T19495.5-2004GB/T19495《轉基因產品檢測》為系列標準:GB/T19495.1—2004轉基因產品檢測通用要求和定義:GB/T19495.2—2004轉基因產品檢測實驗室技術要求:GB/T19495.3—2004轉基因產品檢測核酸提取純化方法;-GB/T19495.4—2004轉基因產品檢測核酸定性PCR檢測方法:-GB/T19495.5—2004轉基因產品檢測核酸定量PCR檢測方法;-GB/T19495.6—2004轉基因產品檢測基因芯片檢測方法;GB/T19495.7—2004轉基因產品檢測抽樣和制樣方法;GGB/T19495.8—2004轉基因產品檢測蛋白質檢測方法。本部分的附錄A、附錄B、附錄C、附錄D、附錄E、附錄F和附錄G為規(guī)范性附錄本部分由國家認證認可監(jiān)督委員會提出并歸口。本部分由中華人民共和國廣東出入境檢驗檢疫局和國家質檢總局動植物檢疫實驗所負責起草,中華人民共和國江寧出入境檢驗檢疫局、中華人民共和國上海出人境檢驗檢疫局、中華人民共和國深圳出人境檢驗檢疫局和中國進出口商品檢驗技術研究所參加起草本部分主要起草人:草文、朱水芳、曹際娟、潘良文、陳紅運、黃文勝、章桂明、徐寶梁、趙文軍、董潔本部分系首次發(fā)布的國家標準。

GB/T19495.5—2004轉基因產品檢測核酸定量PCR檢測方法范圍GB/T19495的本部分規(guī)定了轉基因產品中轉基因成分核酸定量檢測方法本部分的規(guī)范性附錄規(guī)定了不同轉基因品種和品系核酸定量檢測方法。本部分規(guī)定了轉基因成分絕對含量和相對含量的計算方法本部分適用于食品、飼料、種子及其環(huán)境材料中轉基因成分的實時熒光PCR定量檢測本部分也適用于轉基因產品中轉基因成分定性PCR檢測陽性結果的確證檢測。范性引用文件下列文件中的條款通過GB/T19495的本部分的引用而成為本部分的條款。凡是注日期的引用文件,其隨后所有的修改單(不包括勒誤的內容)或修訂版均不適用于本部分,然而,鼓勵根據本部分達成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本適用于本部分。GB/T19495.1—2004轉基因產品檢測通用要求和定義GB/T19495.2—2004轉基因產品檢測實驗室技術要求GB/T19495.3-2004轉基因產品檢測核酸提取純化方法GB/T19495.4—2004轉基因產品檢測核酸定性PCR檢測方法術語、定義和縮略語本部分采用下列術語、定義和縮略語3.1術語和定義GB/T19495.1確立的以及下列術語和定義適用于GB/T19495的本部分3.1.1檢測低限Iimitofdetection.LOD在假陰性結果不超過5%的條件下,檢測方法所能檢測的最低濃度和含量3.1.2外源基因exogenousgene利用生物工程技術轉入的其他生物基因,使該生物品種表現(xiàn)新的生物學性狀3.1.3陽性標準物質positivereferencematerials由認可機構制備、有湖源性的并經檢測證

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