實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)病原微生物檢查

實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)病原微生物檢查第一頁，共四十三頁，2022年，8月28日臨床病原體檢查目的明確感染是否發(fā)生以及病原體的類型。提供體外微生物藥物敏感實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。密切監(jiān)視烈性傳染病與新的傳染病的發(fā)生，及時(shí)向行政主管部門報(bào)告。配合相關(guān)機(jī)構(gòu)進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查。第二頁，共四十三頁，2022年，8月28日

本章主要內(nèi)容一、標(biāo)本采集、運(yùn)送和檢測(cè)方法二、細(xì)菌耐藥性檢查三、臨床感染常見病原體檢查四、病毒性肝炎檢測(cè)五、院內(nèi)感染第三頁，共四十三頁，2022年，8月28日一、細(xì)菌檢驗(yàn)標(biāo)本采集與送檢的基本原則

1.注明被檢人姓名、性別、年齡、臨床診斷、標(biāo)本來源及檢驗(yàn)?zāi)康摹⒖股厥褂们闆r。2.盡量在抗生素使用前采集標(biāo)本。3.在采集血液、腦脊液、穿刺液等標(biāo)本時(shí)，應(yīng)嚴(yán)格執(zhí)行無菌操作，避免雜菌污染。4.立即送到實(shí)驗(yàn)室，某些細(xì)菌還應(yīng)注意保溫、保濕。5.盛標(biāo)本容器須經(jīng)滅菌處理，勿用消毒劑。

參考P463第四頁，共四十三頁，2022年，8月28日二、常見標(biāo)本的采集：血液與骨髓

1.采血部位多為肘靜脈，切忌在靜滴抗菌藥物的靜脈處采集血標(biāo)本，無菌操作。2.每瓶采血量為5～10ml左右，培養(yǎng)基與血液之比以10:1為宜，以稀釋血液中的抗生素、抗體等殺菌物質(zhì)。3.選擇寒戰(zhàn)發(fā)熱之初采血。對(duì)已用抗菌藥物而又不能停藥者，應(yīng)在下次用藥前采血。4.每例建議不同時(shí)間不同部位采血3次，注意區(qū)別感染菌和皮膚污染菌。第五頁，共四十三頁，2022年，8月28日尿液標(biāo)本的采集

1.中段尿采集：最常用的方法。采樣前須消毒尿道口將中段或近后段的尿液留于無菌容器中。2.導(dǎo)尿管采集尿液：可減少污染，但易引起逆行感染。不可從集尿袋下端管口留取標(biāo)本。3.膀胱穿刺采集尿液：病人恥骨上皮膚消毒后，以無菌針筒作膀胱穿刺。此法主要用于尿液厭氧菌培養(yǎng)或嬰幼兒。第六頁，共四十三頁，2022年，8月28日糞便標(biāo)本的采集1.挑取有膿血粘液部分的新鮮糞便約2～3克盛于滅菌容器中送檢，也可用拭子挑取糞便插入Cary-Blair運(yùn)送培養(yǎng)基中送檢。2.對(duì)不易獲取糞便者，如嬰幼兒可用直腸拭子采集送檢。第七頁，共四十三頁，2022年，8月28日呼吸道標(biāo)本的采集

1.自然咳痰：清水反復(fù)漱口后用力咳嗽，從呼吸道深部咳出,以清晨第一口痰為好。2.氣管鏡下采集法、氣管穿刺法：下呼吸道病原學(xué)的理想標(biāo)本，可減少污染，但病人有一定的痛苦，不易接受和推廣。3.應(yīng)及時(shí)送檢和處理(<1小時(shí))，放置時(shí)間長可導(dǎo)致肺炎鏈球菌，流感嗜血桿菌等的檢出率明顯下降。

第八頁，共四十三頁，2022年，8月28日腦脊液等無菌體液標(biāo)本的采集

1.嚴(yán)格無菌條件下采集標(biāo)本。2.盡量采集多的標(biāo)本送檢。3.盡快送檢或床旁接種可提高陽性率，特殊標(biāo)本需保溫送檢。如腦膜炎奈瑟菌、肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌等。第九頁，共四十三頁，2022年，8月28日其它標(biāo)本的采集

(傷口、燒傷創(chuàng)面、膿腫等)1.無菌生理鹽水清洗病灶表面后，用無菌拭子取病灶深部的膿液和分泌物，立即送檢。2.對(duì)未潰破的膿腫直接用碘酒、酒精消毒皮膚后，以無菌注射器抽取膿液送檢，也可以切開排膿時(shí)用無菌拭子采樣。3.生殖道標(biāo)本包括尿道口分泌物、外陰糜爛物、宮頸口分泌物、前列腺液等，應(yīng)注意保溫。第十頁，共四十三頁，2022年，8月28日三、檢查方法1.直接涂片、鏡檢：初步診斷但陽性率低。如抗酸染色找結(jié)核桿菌。陰道毛滴蟲革蘭氏染色第十一頁，共四十三頁，2022年，8月28日2.分離、培養(yǎng)、鑒定：金標(biāo)準(zhǔn)較費(fèi)時(shí)（3天）,同時(shí)可進(jìn)行藥物敏感試驗(yàn)。3.血清學(xué)檢查：如肥達(dá)氏試驗(yàn)、軍團(tuán)菌抗體檢查等。抗體檢測(cè)應(yīng)進(jìn)行雙份血清檢測(cè)，兩次抗體效價(jià)相差4倍以上有現(xiàn)癥診斷價(jià)值，但無早期診斷意義。（但I(xiàn)gM有早期診斷意義）第十二頁，共四十三頁，2022年，8月28日

主要內(nèi)容一、標(biāo)本采集、運(yùn)送和檢測(cè)方法二、細(xì)菌耐藥性檢查三、臨床感染常見病原體檢查四、病毒性肝炎檢測(cè)五、院內(nèi)感染第十三頁，共四十三頁，2022年，8月28日耐藥性及發(fā)生機(jī)制

1.當(dāng)前臨床分離的常見細(xì)菌

(1)革蘭陰性菌大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌、銅綠假單胞菌、陰溝腸桿菌、不動(dòng)桿菌、嗜麥芽窄食單胞菌等，占70%。

(2)革蘭陽性菌葡萄球菌、腸球菌、肺炎鏈球菌、卡他布蘭漢菌等，占30%。濫用抗生素的后果→耐藥第十四頁，共四十三頁，2022年，8月28日2.耐藥機(jī)制(1)耐藥基因的整合子系統(tǒng)(2)產(chǎn)生滅活抗生素的水解酶或鈍化酶(3)改變抗生素作用的靶位(4)細(xì)菌膜的外排泵出系統(tǒng)(5)生物膜的形成，提高耐藥性第十五頁，共四十三頁，2022年，8月28日3、藥物敏感試驗(yàn)

(1)K-B紙片瓊脂擴(kuò)散法：最常用，操作相對(duì)方便(2)稀釋法包括瓊脂稀釋法和肉湯稀釋法

可獲得最小抑菌濃度（MIC），但較麻煩(3)E試驗(yàn)：結(jié)合稀釋法和擴(kuò)散法，價(jià)格昂貴第十六頁，共四十三頁，2022年，8月28日4.重點(diǎn)耐藥菌株監(jiān)測(cè)試驗(yàn)☆

(1)耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)的篩選(2)氨基糖苷類抗生素高耐藥腸球菌(HLAR)篩選(3)耐青霉素肺炎鏈球菌(PRSP)篩選(4)染色體Ι型β-內(nèi)酰胺酶AmpC酶的檢測(cè)☆(5)超廣譜?內(nèi)酰胺酶(ESBL)檢測(cè)第十七頁，共四十三頁，2022年，8月28日5.病原菌耐藥基因的檢測(cè)(1)適全生長緩慢的細(xì)菌如結(jié)核分枝桿菌(2)對(duì)病原菌的耐藥具有確證意義(3)考核其它耐藥性檢查方法的金標(biāo)準(zhǔn),可能成為未來耐藥性檢查的主導(dǎo)方法。第十八頁，共四十三頁，2022年，8月28日

本章主要內(nèi)容一、標(biāo)本采集、運(yùn)送和檢測(cè)方法二、細(xì)菌耐藥性檢查三、臨床感染常見病原體檢查四、病毒性肝炎檢測(cè)五、院內(nèi)感染第十九頁，共四十三頁，2022年，8月28日

一、流行病學(xué)和臨床類型流行病學(xué)特征新的病原體不斷被發(fā)現(xiàn)，如SARS病毒、禽流感染病毒等。老傳染病死灰復(fù)燃如結(jié)核、梅毒、霍亂等

多重耐藥菌株不斷出現(xiàn)器官移植、放/化療、侵入性醫(yī)療檢查或治療導(dǎo)致醫(yī)院感染發(fā)生率不斷增加第二十頁，共四十三頁，2022年，8月28日二、檢查項(xiàng)目和臨床應(yīng)用1.細(xì)菌感染：細(xì)菌培養(yǎng)是最重要的確診方法2.病毒感染：常用血清學(xué)檢查，如HIV3.真菌和寄生蟲感染：形態(tài)學(xué)檢查第二十一頁，共四十三頁，2022年，8月28日

本章主要內(nèi)容一、標(biāo)本采集、運(yùn)送和檢測(cè)方法二、細(xì)菌耐藥性檢查三、臨床感染常見病原體檢查四、病毒性肝炎檢測(cè)五、院內(nèi)感染第二十二頁，共四十三頁，2022年，8月28日病毒性肝炎檢測(cè)P452甲型肝炎(糞口途徑)：

IgM抗體：特異性早期診斷指標(biāo),提示HAV現(xiàn)癥感染

IgG抗體：出現(xiàn)于恢復(fù)期且長期存在,提示既往感染甲、乙、丙、丁、戊、庚、輸血傳播病毒肝炎第二十三頁，共四十三頁，2022年，8月28日乙型肝炎

1.最常用的定性檢測(cè)乙肝兩對(duì)半常用測(cè)定方法：ELISA法

2.乙肝DNA定量PCR檢測(cè)：病毒復(fù)制的指標(biāo)正常:HBVDNA<103Copies/ml拉米夫定(賀普?。?、干擾素治療效果的主要指標(biāo)。第二十四頁，共四十三頁，2022年，8月28日丙肝病毒標(biāo)志物

RNA病毒血液傳播

1.抗HCV-IgM近期感染指標(biāo)

2.抗HCV-IgG已有感染，不作為感染早期指標(biāo)

3.HCV-RNA：陽性提示HCV復(fù)制活躍,直接指標(biāo)其它丁肝為缺陷病毒，依賴HBV

第二十五頁，共四十三頁，2022年，8月28日

本章主要內(nèi)容一、標(biāo)本采集、運(yùn)送和檢測(cè)方法二、細(xì)菌耐藥性檢查三、臨床感染常見病原體檢查四、病毒性肝炎檢測(cè)五、院內(nèi)感染第二十六頁，共四十三頁，2022年，8月28日醫(yī)院感染常見病原體檢測(cè)院內(nèi)感染的概念：入院時(shí)無癥狀，在入院48小時(shí)后發(fā)生的感染，或出院后48小時(shí)發(fā)生的感染?；颊呋蚺阕o(hù)人員醫(yī)護(hù)人員環(huán)境或醫(yī)療器械三大環(huán)節(jié)：傳染源，傳播途徑，易感人群第二十七頁，共四十三頁，2022年，8月28日醫(yī)院感染的特點(diǎn)①感染源和病原體：感染源主要是患者、醫(yī)務(wù)人員、醫(yī)院環(huán)境、醫(yī)療器械等。最常見病原體是細(xì)菌，以革蘭陰性桿菌為主②易感人群：常見于免疫力低下的住院患者。多發(fā)生于具有基礎(chǔ)性疾病或接受侵入性治療的患者。③常見臨床類型：下呼吸道感染（機(jī)械通氣）為最常見醫(yī)院感染類型，其它如尿路感染（插管）、手術(shù)切口感染、胃腸道感染、血液感染（靜脈留置和透析常見）、皮膚和軟組織感染等。④病原體：條件致病菌和機(jī)會(huì)致病菌⑤傳播方式：接觸傳播多見第二十八頁，共四十三頁，2022年，8月28日醫(yī)院感染的常見細(xì)菌1.鮑曼不動(dòng)桿菌呼吸道感染常見2.大腸埃希菌泌尿道感染常見3.銅綠假單胞菌呼吸道和燒傷常見4.金黃色葡萄球菌皮膚和軟組織化膿5.肺炎克雷伯菌呼吸道感染第二十九頁，共四十三頁，2022年，8月28日掌握臨床常見病原體檢測(cè)標(biāo)本的采集運(yùn)送原則、要求及方法；熟悉病原體耐藥性發(fā)生機(jī)制、藥敏試驗(yàn)及耐藥菌監(jiān)測(cè)試驗(yàn)；掌握乙肝兩對(duì)半的意義及常見模式；掌握院內(nèi)感染。本章重點(diǎn)第三十頁，共四十三頁，2022年，8月28日考試時(shí)間：12年12月28日晚18:30考試題型：判斷題10分（10道題），單選題70分（70道題），不定項(xiàng)選擇題9分（6道題）。名解6分（2道題），簡(jiǎn)答5分（1道題）。考試內(nèi)容：平時(shí)上課老師PPT的內(nèi)容，課本中沒講到的內(nèi)容不作為考試要求。期末考試注意事項(xiàng)第三十一頁，共四十三頁，2022年，8月28日K-B法第三十二頁，共四十三頁，2022年，8月28日back第三十三頁，共四十三頁，2022年，8月28日E-試驗(yàn)第三十四頁，共四十三頁，2022年，8月28日1.測(cè)定方法

OX紙片法：苯唑西林FOX紙片法：頭孢西丁2.MRS對(duì)所有β內(nèi)酰胺類耐藥OXOXFOXFOXOXMRS篩選試驗(yàn)FOX第三十五頁，共四十三頁，2022年，8月28日HLAR的篩選CN120AMP1.測(cè)定方法紙片法2.CN120：高濃度慶大霉素AMP：氨芐西林第三十六頁，共四十三頁，2022年，8月28日ESBLs雙紙片確證試驗(yàn)1.CTX/CA比CTX抑菌圈或CAZ/CA比CAZ>5mm即為陽性2.若ESBLs陽性,對(duì)青霉素類、所有頭孢菌素類及單環(huán)類抗菌素耐藥

CTXCTX/CACAZCAZ/CA注:CTX為頭孢噻肟;CTX/CA為頭孢噻肟/棒酸CAZ為頭孢他啶;CAZ/CA為頭孢他啶/棒酸第三十七頁，共四十三頁，2022年，8月28日AmpC酶檢測(cè)FOXFOX：頭孢西丁2.若AmpC酶陽性，對(duì)青霉素類、第一、二、三代頭孢菌素、單環(huán)類及頭霉類抗菌素耐藥第三十八頁，共四十三頁，2022年，8月28日乙肝的傳播途徑我國HBSAg陽性率約為8％。經(jīng)血傳播胎源性傳播醫(yī)源性傳播性接觸傳播生活密切接觸傳播(共用剃須刀、牙刷等)第三十九頁，共四十三頁，2022年，8月28日

乙肝兩對(duì)半

HBsAg：感染HBV后1～2月出現(xiàn)，若急性發(fā)病后3個(gè)月不轉(zhuǎn)陰，易轉(zhuǎn)為慢性。是乙肝病毒感染的標(biāo)志。

HBsAb：為保護(hù)性抗體，表明患者已產(chǎn)生了一定的免疫力。

HBeAg：表明乙肝處于活動(dòng)期，肝細(xì)胞受損狀態(tài)，有