臨床免疫學(xué)檢驗(yàn)：14 自身免疫性疾病及其檢測(cè)

第二十二章自身免疫性疾病及其

免疫檢測(cè)

P274自身免疫性疾?。╝utoimmunediseases,AID)

指機(jī)體針對(duì)自身組織產(chǎn)生自身抗體或致敏淋巴細(xì)胞，而導(dǎo)致自身組織器官損傷或功能障礙，這種病理狀態(tài)稱為自身免疫性疾病。AID的基本特征誘因可有可無(wú)。有一定的遺傳傾向。女性患者多見，發(fā)病率隨年齡增長(zhǎng)而增加?；颊哐逯锌蓹z出高效價(jià)的自身抗體和（或）自身致敏T淋巴細(xì)胞。一些自身抗體在自身免疫病中呈現(xiàn)交叉重疊現(xiàn)象:即在同一種自身免疫病患者體內(nèi)可檢測(cè)到多種自身抗體，而不同的自身免疫病也可存在同一種自身抗體。

IgG、IgA、IgM升高，尤其IgG升高明顯。病損局部可發(fā)現(xiàn)有淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)及免疫復(fù)合物沉積。免疫抑制劑治療可取得一定療效。AID的分類器官特異性自身免疫性疾病（organspecificautoimmunedisease）

是指病變局限于某一特定器官或組織，可以檢出對(duì)該組織器官成分特異性的自身抗體或致敏T淋巴細(xì)胞。非器官特異性自身免疫性疾?。╪on-organspecificautoimmnuedisease）

是指侵犯多種組織器官或系統(tǒng)的一組疾病，可檢出對(duì)多種器官或組織成分的自身抗體或致敏T淋巴細(xì)胞。系統(tǒng)性紅斑狼瘡（systemiclupuserythematosus,SLE）是一種累積多器官、多系統(tǒng)的結(jié)締組織疾病，好發(fā)于年輕女性。臨床表現(xiàn)不一，常出現(xiàn)發(fā)熱、皮疹、關(guān)節(jié)腫痛、腎損害等。疾病多呈漸進(jìn)性，一般先累及一個(gè)系統(tǒng)，以后擴(kuò)展到多系統(tǒng)損害，尤以腎損害最為普遍。本病引起組織損傷的主要機(jī)理是Ⅲ型超敏反應(yīng)患者體內(nèi)可查到多種自身抗體，如抗核抗體、類風(fēng)濕因子、抗核糖體抗體、抗心磷脂抗體；IgG、IgA、IgM升高；血清免疫復(fù)合物升高；補(bǔ)體水平下降及病損局部免疫復(fù)合物的沉積。系統(tǒng)性紅斑狼瘡

細(xì)胞核物質(zhì)(如DNA、RNA、核內(nèi)可溶性蛋白)刺激機(jī)體產(chǎn)生抗核抗體，形成IC，沉積于周身毛細(xì)血管、關(guān)節(jié)滑膜、心臟瓣膜等處，引起全身性損傷。類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（rheumatoidarthritis，RA）本病是以慢性對(duì)稱性多關(guān)節(jié)炎為主要表現(xiàn)的一種全身性疾病。多發(fā)于青壯年，起病遲緩，早期常有乏力、低熱、食欲減退。本病的典型特征是小關(guān)節(jié)及周圍組織呈對(duì)稱性、多發(fā)性損害，部分患者可有心、肺和血管受累。本病致病機(jī)制也主要為Ⅲ型超敏反應(yīng)，患者由于感染、炎癥等原因產(chǎn)生了自身抗原——變性IgG，刺激機(jī)體產(chǎn)生抗變性IgG抗體（即RF）。免疫學(xué)檢查可見70-80%患者血清和關(guān)節(jié)滑膜液中有類風(fēng)濕因子（rheumatoidfactor,RF)，即抗變性IgG抗體；以及血清IgG、IgA、IgM升高。類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎體內(nèi)變性IgG刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體(稱為類風(fēng)濕因子,IgM類)，形成IC，沉積于全身小關(guān)節(jié)滑膜處，引起小關(guān)節(jié)紅腫、變形僵直、失去運(yùn)動(dòng)功能。自身免疫性溶血性貧血（autoimmunehemolyticanemia,AIHA）由于機(jī)體免疫功能異常，或服用某些藥物后改變了紅細(xì)胞表面抗原性，產(chǎn)生了抗紅細(xì)胞自身抗體。自身抗體與紅細(xì)胞結(jié)合，通過(guò)激活補(bǔ)體等Ⅱ型超敏反應(yīng)的機(jī)制使紅細(xì)胞的破壞而導(dǎo)致貧血的一組疾病。自身免疫性血小板減少性紫癜和中性粒細(xì)胞減少癥的發(fā)病機(jī)制與此相似。重癥肌無(wú)力（myastheniagravis,MG）患者體內(nèi)存在神經(jīng)肌肉接頭處的乙酰膽堿受體的自身抗體。這種自身抗體結(jié)合到橫紋肌細(xì)胞的乙酰膽堿受體上，對(duì)此受體起封閉和破壞作用，使肌細(xì)胞對(duì)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元釋放的乙酰膽堿的反應(yīng)性降低，引起骨骼肌軟弱無(wú)力。疾病最早出現(xiàn)的癥狀是眼肌無(wú)力，進(jìn)而累積其他部位，并呈進(jìn)行性加重。此病發(fā)病機(jī)制為Ⅱ型超敏反應(yīng)。

自身抗體的特點(diǎn)

正常人血清中存在有多種微量的自身抗體，如ANA、類風(fēng)濕因子、抗平滑肌抗體、抗微粒體抗體等，它們能清除體內(nèi)衰老細(xì)胞、變性細(xì)胞從而起到免疫穩(wěn)定作用，此為生理性自身抗體。隨著年齡的增長(zhǎng)，正常人血清中自身抗體陽(yáng)性率增加。當(dāng)自身抗體效價(jià)持續(xù)在高滴度時(shí)，易發(fā)生AID。有自身抗體的存在，不一定是AID；在AID時(shí)，一般可檢測(cè)到自身抗體。自身抗體檢測(cè)的臨床價(jià)值自身抗體是AID的重要標(biāo)志，病人血清中存在高效價(jià)自身抗體是AID的特點(diǎn)之一。每種AID都伴有特征性的自身抗體譜。自身抗體的檢測(cè)在自身免疫病的診斷及療效評(píng)價(jià)方面具有重要意義。

AID的相關(guān)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)（P295)免疫球蛋白檢測(cè)：IgG、IgA、IgM升高；其中IgG升高明顯補(bǔ)體檢測(cè)：在Ⅱ/Ⅲ型超敏反應(yīng)引起的AID中，其總補(bǔ)體活性、單一補(bǔ)體活性降低；當(dāng)疾病緩解時(shí)，補(bǔ)體含量可恢復(fù)正常免疫復(fù)合物檢測(cè)：循環(huán)免疫復(fù)合物、局部免疫復(fù)合物檢測(cè)。自身抗體檢測(cè)自身抗體檢測(cè)與自身免疫性疾病的診斷（P282）

抗核抗體（antinuclearantibody,ANA)的檢測(cè)ANA的定義大多數(shù)屬IgG類，也有IgM和IgA。無(wú)器官特異性和種屬特異性，主要存在于血清中，也可存在滑膜液、胸水和尿液中。ANA原指抗細(xì)胞核抗原成分的自身抗體的總稱。ANA廣義地指抗細(xì)胞內(nèi)所有抗原成分的自身抗體的總和。ANA所針對(duì)的靶抗原由細(xì)胞核擴(kuò)展到整個(gè)細(xì)胞，包括細(xì)胞核、細(xì)胞漿、細(xì)胞骨架及細(xì)胞周期等。現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)有幾十種具不同臨床意義的ANA，形成抗核抗體譜（antinuclearantibodies,ANAs）

ANAs的組成抗DNA抗體：抗dsDNA、抗ssDNA抗體抗組蛋白抗體（AHA)：抗H1、H2A、H2B、H3、H4等抗ENA抗體：抗Sm、抗核糖核蛋白（RNP）、抗SS-A、抗SS-B等抗非組蛋白抗體：抗Scl-70、抗Jo-1、抗Ku、抗增殖細(xì)胞核抗原（PCNA）、抗PL-7、抗PL-12、抗著絲點(diǎn)抗體等抗核仁抗體：抗PM-Scl、抗NOR-90、抗U3nRNA抗細(xì)胞其它成分抗體：抗高爾基體、抗中心體、抗線粒體、抗肌動(dòng)蛋白、抗核層蛋白等抗雙鏈DNA（doublestrandedDNA，dsDNA）抗體

抗dsDNA抗體對(duì)SLE有較高特異性，70-90%

活動(dòng)性SLE患者該抗體陽(yáng)性，是SLE的診斷標(biāo)準(zhǔn)之一?？菇M蛋白抗體（anti-histonicantibody,AHA）

組蛋白是一種與DNA結(jié)合的富含賴氨酸和精氨酸的堿性蛋白，由H1、H2A、H2B、H3和H4五個(gè)亞單位組成，其相應(yīng)抗體稱抗組蛋白抗體。

AHA在藥物性狼瘡患者中陽(yáng)性率達(dá)90-100%，而SLE病人陽(yáng)性率僅有20-35%，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎病人為36%。

抗可提取性核抗原（extractablenuclearantigen，ENA）抗體ENA抗原是指可用鹽水或PBS從細(xì)胞核中提取的Ag抗Sm抗體：抗Sm抗體是SLE的特異性標(biāo)志，疾病特異度達(dá)99%，為提高SLE的診斷準(zhǔn)確率，可將抗Sm抗體和抗dsDNA抗體同時(shí)檢測(cè)?？筍S-A、SS-B抗體：抗SS-A和抗SS-B抗體并存是干燥綜合癥的特異標(biāo)志?？购颂呛说鞍卓贵w核糖核蛋白（ribonucleoprotein，RNP），又稱u1RNP。抗u1RNP抗體在混合性結(jié)締組織病(MCTD)陽(yáng)性率為95%以上，是MCTD的標(biāo)志抗體?？筍cl-70抗體（抗非組蛋白抗體）抗Scl-70是進(jìn)行性全身性硬化癥（PSS）的標(biāo)志抗體，陽(yáng)性率為50-64%。

抗Jo-1抗體抗Jo-1抗體對(duì)肌炎和間質(zhì)性肺纖維化有高度特異性，抗體的效價(jià)與疾病的活動(dòng)性相關(guān)。

抗線粒體抗體（anti-mitochondrialantibody,AMA）原發(fā)性膽汁性肝硬化（PBC）時(shí)AMA陽(yáng)性率可達(dá)90%以上。AMA是PBC的血清學(xué)指標(biāo)。

ANA的檢測(cè)方法免疫熒光法（間接免疫熒光法）免疫印跡法（Westernblotting）-ENA抗體譜的檢測(cè)間接免疫熒光法（indirectimmunofluorescence，IIF）

原理：被檢血清中的ANA（IgG型）與基質(zhì)片中細(xì)胞核抗原形成特異性抗原抗體復(fù)合物，熒光素標(biāo)記的抗人IgG（二抗）再與之結(jié)合，在熒光顯微鏡下見到細(xì)胞核有熒光著色為陽(yáng)性反應(yīng)。是檢測(cè)血清總ANA的常規(guī)方法，可作為初篩試驗(yàn)。間接法特異性抗體與相應(yīng)抗原反應(yīng)，熒光素標(biāo)記的抗抗體再與第一抗體結(jié)合。

間接熒光抗體染色法示意圖熒光抗體染色熒光染色核型分析

均質(zhì)型：核染色均勻一致，最為多見，與抗dsDNA抗體和AHA有關(guān)。高滴度主要見于SLE，低滴度主要見于RA、慢性肝臟疾病及藥物性狼瘡

周邊型：又稱核膜型，熒光染色在核膜周圍，與抗核層蛋白抗體有關(guān)。高滴度主要見于SLE及原發(fā)性膽汁性肝硬化斑點(diǎn)（顆粒）型：核染色呈斑點(diǎn)、顆粒狀，與抗ENA抗體有關(guān)。高滴度主要見于MCTD、SLE及硬化癥等

核仁型：常與抗核仁抗體有關(guān)。高滴度主要見于硬皮病等自身抗體檢測(cè)抗核抗體(均質(zhì)型)抗核抗體(核膜型)抗核抗體(斑點(diǎn)型)熒光抗體技術(shù)的應(yīng)用IIF的基質(zhì)片原多采用小鼠肝印片或切片作為反應(yīng)的細(xì)胞核基質(zhì)Ag。目前多選擇Hep-2細(xì)胞（人喉癌上皮細(xì)胞）作為基質(zhì)片，ANA檢出陽(yáng)性率可提高10-20%；而且Hep-2核大，結(jié)構(gòu)清晰，核抗原種類豐富、含量高，更易于觀察到各種類型的熒光染色形態(tài)。值得注意的是，對(duì)ANA特異性種類的判斷僅憑熒光染色模型是不夠的，需進(jìn)一步采用ELISA、免疫印跡法等來(lái)確定抗體的特異性。

免疫印跡法-ENA抗體譜的檢測(cè)又稱酶聯(lián)免疫電轉(zhuǎn)移印斑法(enzymelinkedimmunoelectrotransferblot,EITB)類風(fēng)濕性因子檢測(cè)（P290）類風(fēng)濕因子測(cè)定類風(fēng)濕性因子（rheumatoidfactor,RF）是抗變性IgG的自身抗體。IgG、IgM、IgD、IgA、IgE

五種類型，其中主要為IgM、IgG型。IgM型RF與RA活動(dòng)性無(wú)密切相關(guān)；IgG類RF與RA病人滑膜炎、血管炎癥狀密切相關(guān)RF的檢測(cè)膠乳凝集試驗(yàn)將變性IgG包被聚苯乙烯膠乳顆粒使之成為Ag致敏顆粒，在與血清中RF相遇時(shí)可出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象。此法簡(jiǎn)便，但靈敏度和特異性不高，重復(fù)性差，且只能檢出IgM型RF。免疫比濁法此法檢測(cè)RF準(zhǔn)確、快速、敏感；定量測(cè)定。ELISA間接法該法用于測(cè)定不同類型的RF，如IgG型、IgM型、IgA型RF。用熱凝集IgG進(jìn)行包被，加入待檢血清后，再分別加入酶標(biāo)記的抗人IgG、IgM、IgA抗體，最后加入底物顯色。Ag:

變性IgGAb:

抗變性IgG抗體(類風(fēng)濕因子)類風(fēng)濕因子檢測(cè):膠乳凝集試驗(yàn)

其他自身抗體的檢測(cè)及

臨床意義抗甲狀腺球蛋白抗體（anti-thyroglobulinantibody,ATGA）

臨床意義

血清ATGA是診斷甲狀腺自身免疫疾病的一個(gè)特異性指標(biāo)。甲亢、慢性淋巴細(xì)胞性甲狀腺炎、橋本甲狀腺炎、萎縮性或原發(fā)性甲狀腺功能低下等患者TGA表現(xiàn)為陽(yáng)性，而甲狀腺腫瘤病人一般為陰性，故可作為甲狀腺腫塊的鑒別指標(biāo)。方法

電化學(xué)法、ELISA法?？辜谞钕傥⒘ｓw抗體（thyroidmicrosomalantibody,TMA）是針對(duì)甲狀腺微粒體有效抗原成分——過(guò)氧化物酶（thyroidperoxidase,TPO）的抗體。方法

ELISA臨床意義多見于甲亢和橋本甲狀腺炎病人。TGA和TMA聯(lián)合測(cè)定可作為臨床診斷和鑒別診斷自身免疫性甲狀腺炎的重要依據(jù)。

抗心磷脂抗體（anticardiolipinantibodyACLA）方法

RIA、ELISA等。臨床意義

近年研究表明ACA與SLE