GB/T 23197-2008雞傳染性支氣管炎診斷技術(shù)

犐犆犛１１．２２０

犅４１

中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

犌犅／犜２３１９７—２００８

雞傳染性支氣管炎診斷技術(shù)

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２００８１２３１發(fā)布２００９０５０１實(shí)施

中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局

發(fā)布

中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)

書

犌犅／犜２３１９７—２００８

前言

本標(biāo)準(zhǔn)對(duì)應(yīng)于ＯＩＥ《陸生動(dòng)物診斷試驗(yàn)和疫苗手冊(cè)》（２００４）２．７．６雞傳染性支氣管炎（ａｖｉａｎｉｎｆｅｃ

ｔｉｏｕｓｂｒｏｎｃｈｉｔｉｓ），其一致性程度為非等效。在此基礎(chǔ)上，根據(jù)國(guó)內(nèi)科研成果增加了反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反

應(yīng)和氣管環(huán)組織培養(yǎng)血清中和試驗(yàn)，用于病原的鑒定和抗體檢測(cè)。

本標(biāo)準(zhǔn)的附錄Ａ為規(guī)范性附錄，附錄Ｂ為資料性附錄。

本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部提出。

本標(biāo)準(zhǔn)由全國(guó)動(dòng)物防疫標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)（ＳＡＣ／ＴＣ１８１）歸口。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：中國(guó)動(dòng)物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心、華南農(nóng)業(yè)大學(xué)。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：吳延功、廖明、王志亮、郭霄峰、劉佩蘭、王永玲、孫承英。

Ⅰ

書

犌犅／犜２３１９７—２００８

雞傳染性支氣管炎診斷技術(shù)

１范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了雞傳染性支氣管炎病毒分離、反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)、微量血凝抑制試驗(yàn)以及氣管環(huán)

組織培養(yǎng)血清中和試驗(yàn)等四種診斷方法的技術(shù)要求。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于雞傳染性支氣管炎的診斷和檢疫。

２臨床診斷

２．１雞傳染性支氣管炎是雞的一種急性、接觸性傳染病，臨床上有多種表現(xiàn)形式，根據(jù)病變類型，可將

其分為：呼吸道型、腎型等，但以經(jīng)典的呼吸道型發(fā)生的最為普遍。

２．２呼吸道型表現(xiàn)為呼吸困難，有羅音或喘鳴音，雛雞感染可引起死亡。

２．３青年雞和產(chǎn)蛋雞感染后，可引起產(chǎn)蛋雞停產(chǎn)或產(chǎn)蛋下降。表現(xiàn)為產(chǎn)蛋雞產(chǎn)蛋下降，產(chǎn)軟皮蛋、砂殼

蛋或畸形蛋，蛋清稀薄如水。

２．４腎型表現(xiàn)為病雞排白色稀糞，脫水，死亡率高。

２．５符合上述臨床癥狀之一者，可以懷疑雞群感染雞傳染性支氣管炎病毒，確診需經(jīng)實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)。

３病原的分離

３．１樣品的采集

３．１．１對(duì)于急性呼吸道型的病雞，應(yīng)采取氣管滲出物；對(duì)于剛撲殺的病雞則采取支氣管和肺組織。

３．１．２對(duì)于腎型和產(chǎn)蛋下降型的病雞，應(yīng)采取發(fā)病雞的腎臟或輸卵管。也可從大腸，尤其是盲腸扁桃

體或糞便分離病毒，但從消化道分離到的病毒未必與現(xiàn)流行或發(fā)生的病毒有直接關(guān)系。

３．２樣品的處理

３．２．１將病料放在含有１００００ＩＵ／ｍＬ青霉素和１０ｍｇ／ｍＬ鏈霉素的ｐＨ值為７．４的磷酸緩沖鹽水

（ＰＢＳ）內(nèi)，置冰盒內(nèi)送往實(shí)驗(yàn)室。ｐＨ值為７．４的ＰＢＳ的配方見附錄Ａ。

３．２．２將病料磨碎，加含抗菌素的ＰＢＳ制成體積分?jǐn)?shù)為２０％的組織懸液，凍融３次，以３０００犵離心

２０ｍｉｎ，取上清液，加入終濃度為１０００ＩＵ／ｍＬ的青霉素和終濃度為１ｍｇ／ｍＬ的鏈霉素，３７℃下作用

１ｈ后用于雞胚接種。

３．３分離培養(yǎng)

３．３．１取病料上清液，接種于５枚９日齡～１１日齡的ＳＰＦ雞胚尿囊腔內(nèi)，另５枚接種ＰＢＳ，接種量均

為０．２ｍＬ／枚。３７℃孵育。每天照蛋，２４ｈ內(nèi)死亡的雞胚棄去。收集接種后３ｄ～７ｄ的雞胚尿囊液，

將所有尿囊液混合，用含１０００ＩＵ／ｍＬ青霉素和１ｍｇ／ｍＬ鏈霉素的ＰＢＳ稀釋５倍～１０倍，繼續(xù)在雞

胚內(nèi)傳代。典型的野毒株通常在雞胚中傳至第２代或第３代時(shí)，可見侏儒胚，傳至第３代，某些雞胚可

出現(xiàn)死亡。含毒尿囊液置－６０℃以下可長(zhǎng)期保存，也可以凍干４℃保存。

３．３．２將分離物經(jīng)雞胚傳至３代或３代以上，收獲接種后７ｄ仍存活的雞胚，取胎兒，用剪刀剪除胎兒

體外的附屬物，并用吸水紙吸干胎兒表面的液體。如接種胎兒重量比對(duì)照胚最輕胎兒重量少２ｇ以上

者，可初步判定為有病毒感染。

３