植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)預(yù)習(xí)報(bào)告

植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)預(yù)習(xí)報(bào)告班級：12級農(nóng)業(yè)資源班成員：楊存虎(12012243270)江凱(12012243246)張淵浩(12012243301)孫旭(12012243213)實(shí)驗(yàn)名稱低溫脅迫對小麥幼苗的影響研究。實(shí)驗(yàn)?zāi)康尿?yàn)證低溫脅迫對小麥幼苗生長造成的生理傷害，并以各項(xiàng)生理指標(biāo)定定性的檢測出來。掌握各項(xiàng)生理指標(biāo)測定的原理和方法。實(shí)驗(yàn)原理：小麥在整個生長發(fā)育過程中，需要外界有一個適宜的溫度范圍。當(dāng)外界氣溫和地溫明顯地獄小麥所需的適宜溫度，接近或超過其在這一時期生理狀態(tài)所能忍受的極限最低溫就會造成脅迫和傷害。(1)目前。對小麥抗寒性的研究已總結(jié)出許多度量指標(biāo)，但細(xì)胞膜是對逆境最敏感的原始反應(yīng)部位，低溫脅迫時，被傷害的關(guān)鍵部位是膜系統(tǒng)。(2)低溫脅迫對膜破壞的程度，即對膜透性的影響，在研究小麥抗寒性方面是至關(guān)重要的指標(biāo)。目前電導(dǎo)法已成為小麥抗性栽培、育種上鑒定小麥抗逆性強(qiáng)弱的一個方法。過氧化物酶是植物保護(hù)酶之一，它和超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)，等組成植物的防御系統(tǒng)。因此過氧化物酶的活性也可反映小麥的抗寒性。三實(shí)驗(yàn)材料與設(shè)計(jì)（1）實(shí)驗(yàn)材料小麥（種子由實(shí)驗(yàn)室提供）（2）實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)采土：5月11日下午播種：5月11日晚上（將沙壤土完全浸濕等待播種將已浸泡24小時的小麥種子播下）生長時期：預(yù)定5月11日—5月21日逆境處理：設(shè)置對照組和處理組：分別將花盆編號為ABC,選取C號為對照處理，讓其在正常土壤下正常生長，AB號分別至于不同溫度下進(jìn)行低溫處理。處理時間：處理6h后取出，開始分別測量對照組和處理組的各項(xiàng)指標(biāo)。測定指標(biāo)（一）電導(dǎo)法測定植物組織抗逆性（二）植物組織過氧化物酶活性的測定1材料與方法材料小麥方法（一）電導(dǎo)法測定植物組織抗逆性1、將小麥葉片置于-20攝氏度冰箱中冷凍處理10分鐘作為處理，另一份小麥葉片置于室溫做對照。2、各加20ml蒸餾水，用注射器抽氣使葉片下沉入水下，浸泡10分鐘后測電導(dǎo)率（S1）,用微波爐煮沸后測電導(dǎo)率（S2）.（二）植物組織過氧化物酶活性的測定實(shí)驗(yàn)材料：2.9ml0.05M磷酸緩沖液；1ml2%H202；1.0ml0.05M愈創(chuàng)木酚和0.1ml酶液。實(shí)驗(yàn)步驟：1、酶液的制備取0.5g葉片、加入少量磷酸緩沖液研磨至勻漿，轉(zhuǎn)入離心管中,4000r、離心10min,然后取上清液定容至10ml,備用。2、過氧化物酶活性的測定用加熱煮沸5min后的酶液作對照，反應(yīng)體系加入酶液后，立即于37攝氏度水浴中保溫15min，并加入20ml20%的三氯乙酸終止反應(yīng)，然后于470nm波長下測定吸光值。生理指標(biāo)的測定方法外滲電導(dǎo)率測定：電導(dǎo)法植物組織受到逆境傷害時，由于膜的功能受損或結(jié)構(gòu)破壞，而使其透性增大，細(xì)胞內(nèi)的鹽類或有機(jī)物將有不同程度生出，從而引起組織浸泡液電導(dǎo)率發(fā)生變化。通過測定外滲液電導(dǎo)率的變化，就可以反映出質(zhì)膜的傷害程度和所測材料抗逆性的大小，傷害越重，外滲越多，電導(dǎo)率的值也就越大。過氧化物活性測定：愈創(chuàng)木酚法在過氧化物酶的催化下，過氧化氫將愈創(chuàng)木酚氧化成茶褐色產(chǎn)物。此產(chǎn)物在470nm處有最大吸光值。故通過測470nm下的吸光值變化測定過氧化物酶的活性。2結(jié)果與分析公式：L=(S-S)/(S-S)傷害度(%)=(L-L)/(1-L)X100t10t20tckck過氧化物酶活性二(AA470XVt)/(WXVsX0.01Xt)外滲電導(dǎo)率的變化冷凍后的小麥葉片的外滲電導(dǎo)率比室溫的要大；煮沸后的小麥葉片的外滲電導(dǎo)率比煮沸前的要大。也就說明當(dāng)植物受到逆境影響時，如高溫或低溫、干旱、鹽漬、病原菌侵染后，細(xì)胞膜遭到破壞，膜透性增大，從而使細(xì)胞內(nèi)的電解質(zhì)外滲，以致植物細(xì)胞浸提液的電導(dǎo)率增大。由此可得出，電導(dǎo)率越大，表明小麥葉片受到傷害的程度也越大。過氧化物酶活性的變化經(jīng)低溫處理過的小麥葉片過氧化酶活性低于室溫下測得的小麥葉片的過氧化酶活性，但卻并未完全消失。而過氧化酶是植物體內(nèi)普遍存在的、活力較高的一種酶，它與呼吸作用、光合作用及生長素的氧化等都有密切關(guān)系，在植物生長發(fā)育過程中，它的活力不斷發(fā)生變化，因此測量這種酶，可以反映某一時期植物內(nèi)代謝的變化?！鱋D470越大，說明對應(yīng)的過氧化物酶活力越高，反之亦然。實(shí)驗(yàn)結(jié)果預(yù)測討論抗寒性研究一直是小麥抗逆性研究中的熱點(diǎn)，當(dāng)小麥葉片受到低溫脅迫后，細(xì)胞膜發(fā)生了變化，這就破壞了膜的結(jié)構(gòu)，膜透性增大，從而使細(xì)胞內(nèi)的電解質(zhì)外滲，以致小麥浸泡的電導(dǎo)率增大。所測得的電導(dǎo)率越大，植物葉片的抗寒性越弱，植物組織所受傷害越大；電導(dǎo)率越小，植物葉片的抗寒性越強(qiáng)，傷害越小。過氧化物酶是一種由一單一肽鏈與卟啉構(gòu)成的血紅素蛋白。同工酶普遍存在于植物體各組織中，是一種對環(huán)境條件十分敏感的氧化酶類。低溫脅迫下，植物葉片中的過氧化物酶的活性越大，膜