標(biāo)準(zhǔn)解讀

《GB/T 27637-2011 副結(jié)核分枝桿菌實時熒光PCR檢測方法》是一項國家標(biāo)準(zhǔn)，旨在規(guī)范副結(jié)核分枝桿菌的實時熒光PCR（聚合酶鏈反應(yīng)）檢測流程。該標(biāo)準(zhǔn)適用于對牛及其他反芻動物中副結(jié)核分枝桿菌DNA進行快速準(zhǔn)確地定性檢測。

文件詳細(xì)描述了從樣本采集到結(jié)果分析全過程的操作指南。首先，在樣本準(zhǔn)備階段，規(guī)定了使用何種類型的生物樣本以及如何正確保存和處理這些樣本以確保后續(xù)實驗的有效性。接著是核酸提取部分，明確了推薦使用的試劑盒或手工提取方法，并強調(diào)了避免交叉污染的重要性。

對于關(guān)鍵的PCR擴增步驟，《GB/T 27637-2011》提供了具體的引物序列、探針設(shè)計原則及優(yōu)化條件等信息，同時還指出了合適的反應(yīng)體系配置比例與循環(huán)參數(shù)設(shè)置建議。此外，還介紹了如何通過監(jiān)測熒光信號強度隨時間變化曲線來判斷目標(biāo)基因是否存在及其相對含量高低的方法。

在整個過程中，質(zhì)量控制措施被高度重視。包括設(shè)立陽性對照、陰性對照以及內(nèi)參基因等多個層面的質(zhì)量控制點，用以評估每次實驗的有效性和可靠性。同時，也提出了數(shù)據(jù)記錄與報告格式的要求，保證結(jié)果可追溯且易于理解。

該標(biāo)準(zhǔn)為實驗室開展副結(jié)核分枝桿菌核酸檢測提供了科學(xué)依據(jù)和技術(shù)支持，有助于提高疾病診斷效率并促進相關(guān)領(lǐng)域研究發(fā)展。


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....

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  • 現(xiàn)行
  • 正在執(zhí)行有效
  • 2011-12-30 頒布
  • 2012-04-01 實施
?正版授權(quán)
GB/T 27637-2011副結(jié)核分枝桿菌實時熒光PCR檢測方法_第1頁
GB/T 27637-2011副結(jié)核分枝桿菌實時熒光PCR檢測方法_第2頁
GB/T 27637-2011副結(jié)核分枝桿菌實時熒光PCR檢測方法_第3頁
GB/T 27637-2011副結(jié)核分枝桿菌實時熒光PCR檢測方法_第4頁
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文檔簡介

ICS11220

B41.

中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)

GB/T27637—2011

副結(jié)核分枝桿菌實時熒光PCR檢測方法

Real-timePCRmethodforthedetectionof

Mycobacteriumaviumsubsp.paratuberculosis

2011-12-30發(fā)布2012-04-01實施

中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局發(fā)布

中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會

中華人民共和國

國家標(biāo)準(zhǔn)

副結(jié)核分枝桿菌實時熒光PCR檢測方法

GB/T27637—2011

*

中國標(biāo)準(zhǔn)出版社出版發(fā)行

北京市朝陽區(qū)和平里西街甲號

2(100013)

北京市西城區(qū)三里河北街號

16(100045)

網(wǎng)址

:

服務(wù)熱線

/p>

年月第一版

20123

*

書號

:155066·1-44345

版權(quán)專有侵權(quán)必究

GB/T27637—2011

前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

本標(biāo)準(zhǔn)由全國動物防疫標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會歸口

(SAC/TC181)。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位中華人民共和國廣東出入境檢驗檢疫局吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)北京盈九思科技發(fā)展有

:、、

限公司

。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人劉中勇陳茹楊國海高云航曾碧健朱道中吳曉薇高小博

:、、、、、、、。

Ⅰ

GB/T27637—2011

副結(jié)核分枝桿菌實時熒光PCR檢測方法

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了副結(jié)核分枝桿菌Mycobacteriumaviumparatuberculosis實時熒光檢

(subsp.)PCR

測方法的技術(shù)要求和操作規(guī)范

。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于快速檢測培養(yǎng)物血樣奶樣糞便和組織等臨床樣品中副結(jié)核分枝桿菌

、、、。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的凡是注日期的引用文件僅注日期的版本適用于本文

。,

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于本文件

。,()。

分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法

GB/T6682—2008

實驗室生物安全通用要求

GB19489—2008

3縮略語

下列縮略語適用于本文件

。

值熒光信號量達到設(shè)定的閾值時所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)

Ct:。

脫氧核苷三磷酸

dNTP:deoxyribonucleosidetriphosphate,。

二甲基亞砜

DMSO:dimethylsulfoxide,。

乙二胺四乙酸

EDTA:ethylenediaminetetraaceticacid,。

磷酸鹽緩沖液

PBS:phosphatebuffersolution,。

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)

PCR:polymerasechainreaction,。

酶聚合酶

Taq:TaqDNA。

酶尿嘧啶糖基化酶

UDG:uracilDNAglycosylase,DNA。

4原理

本標(biāo)準(zhǔn)方法采用了探針實時熒光技術(shù)原理反應(yīng)體系中包括一對用于擴增

TaqManPCR。DNA

的引物和一條能與產(chǎn)物特異雜交的熒光標(biāo)記探針探針的端標(biāo)記了被稱為報告基團的熒光

,PCR。5’

素端標(biāo)記了淬滅基團在進行延伸反應(yīng)時酶的外切酶活性將端熒光基團從探針上

,3’。PCR,Taq5’5’

切割下來使其與淬滅基團分離從而儀器能檢測到端熒光基團所發(fā)出的熒光信號一分子擴

,,5’,PCR

增產(chǎn)物的生成伴隨一分子熒光信號的產(chǎn)生隨著擴增循環(huán)次數(shù)的增加儀器檢測到的熒光信號的累積

。,

反應(yīng)了擴增產(chǎn)物量的變化本標(biāo)準(zhǔn)方法以副結(jié)核分枝桿菌特異的基因序列為模板設(shè)計特異擴增

。

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