GB/T 28647-2012化學品嚙齒類動物子宮增重試驗雌激素作用的短期篩選試驗

ICS1330011100

;

A80..

中華人民共和國國家標準

GB/T28647—2012

化學品嚙齒類動物子宮增重試驗

雌激素作用的短期篩選試驗

Chemicals—Testmethodofuterotrophicbioassayinrodents—

Ashort-termscreeningtestforoestrogenicproperties

2012-07-31發(fā)布2012-12-01實施

中華人民共和國國家質量監(jiān)督檢驗檢疫總局發(fā)布

中國國家標準化管理委員會

GB/T28647—2012

前言

本標準按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

本標準技術性內容與經濟合作與發(fā)展組織化學品測試導則嚙齒類動物子

(OECD)No.440(2007)《

宮增重試驗雌激素作用的短期篩選試驗英文版一致

》()。

本標準做了下列結構和編輯性修改

:

將原文中的前言和最初考慮和局限性部分內容作為本標準的引言

———OECD440“”“”“”;

增加了范圍一章

———;

將原文中的附錄定義部分內容作為本標準的術語和定義

———OECD440“1”“”;

將原文中的附錄內分泌干擾物測定與評價的概念框架部分內容作為

———OECD440“2OECD”

本標準的附錄

“A”。

本標準由全國危險化學品管理標準化技術委員會提出并歸口

(SAC/TC251)。

本標準起草單位中國疾病預防控制中心職業(yè)衛(wèi)生與中毒控制所遼寧省職業(yè)病防治院中國化工

:、、

經濟技術發(fā)展中心中國檢驗檢疫科學研究院

、。

本標準主要起草人侯粉霞曲波王曉兵李雪飛白羽李晞

:、、、、、。

Ⅰ

GB/T28647—2012

引言

年啟動了一項具有高度優(yōu)先權的行動即修訂現有指南建立用于篩查和檢測潛在

1998,OECD,,、

內分泌干擾物的新指南[1]行動的內容之一就是建立嚙齒類動物子宮增重試驗的試驗指南之后對

。。,

嚙齒類動物子宮增重試驗開展了廣泛的驗證程序包括詳細的背景文件的編輯[2-3]以及通過應用強活性

,

參比雌激素弱活性雌激素受體激動劑強活性雌激素受體拮抗劑陰性參比化學物等作為受試物開展

、、、,

廣泛的實驗室內和實驗室間的比對來說明該試驗的相關性和可重復性[4-9]該試驗指南是在汲取

。440

了驗證試驗中的經驗和參照了雌激素激動劑類受試物試驗結果后形成的

。

子宮增重試驗是一個始于世紀年代的短期篩選試驗[27-28]在年被一個專家委員會首次

2030,1962

定為篩選試驗[32,35]它是基于子宮質量的增加或者子宮增重反應參見用于評價一個化學物引

。(5.3),

起與天然雌激素例如β雌二醇β的激動劑或拮抗劑作用相一致的生物學作用的能力

(17-,17-estradiol)。

然而該方法用于檢測雌激素拮抗劑比用于檢測雌激素激動劑要少得多子宮對雌激素的反應方式有

,。

兩種最初的反應是吸收水分而引起子宮質量增加此后子宮組織增長進一步引起其質量增加[30]

。。,。

大鼠和小鼠的子宮反應具有可比性

。

該試驗是一項體內篩選試驗它的應用可參見內分泌干擾物測定與評價的概念框架附

,“OECD”(

錄在這個概念框架中子宮增重試驗作為一項體內試驗位于框架的第級闡明單一一種內分泌

A)。,3,

作用機制即雌激素樣作用

,。

子宮增重試驗希望被納入用于檢測潛在內分泌干擾作用的系列體內和體外試驗中最終用于對人

,

類健康和環(huán)境影響進行危險評價在開展該方法驗證試驗時使用強活性和弱活性的雌激素激

。OECD,

動劑來評估該試驗檢測雌激素樣作用物質的效能[4-8]因此除了實驗室內和實驗室間良好的可重復性

。,

外該試驗用于檢測雌激素樣作用物質的敏感性也得到了很好的證實

,。

在該方法的驗證試驗中僅使用了一種陰性參比物有報道該種物質的子宮增重試驗以及體外受體

,,

結合試驗和受體檢測試驗為陰性此外也對驗證試驗之外的資料進行了評價這些資料進一步證明了

。,,

子宮增重試驗用于篩選雌激素樣作用物質的特異性

。

雌激素激動劑和拮抗劑作為雌激素α受體和受體的配體可分別活化或抑制受體的轉錄這可

β,。

引起潛在的健康危害包括對生殖和發(fā)育產生影響因此需要快速地評價化學物是否有可能是雌激素

,。,

激動劑或拮抗劑雖然受試物與雌激素受體的親和力雌激素受體基因轉錄活化體外試驗等方面的資

。、

料可提供信息但這些信息僅是決定是否有可能產生有害作用的因素之一其他的決定因素包括化學

,。

物進入體內后的代謝活化和失活在各組織的分布情況從體內清除的情況等這些情況至少部分地依

、、;

賴于染毒途徑和被檢測的受試物這就需要了解受試物在體內環(huán)境中的活性除非已有資料可說明該

。,

化學物的吸收分布代謝排泄的特征子宮組織在受到雌激素刺激后發(fā)生快速增長特別是嚙齒

———。,

類實驗動物其發(fā)情周期持續(xù)約嚙齒類動物特別是大鼠被廣泛應用于危害評估的毒物學試驗

(4d)。,,

中因此嚙齒類動物的子宮對于體內篩選雌激素激動劑和拮抗劑是一個適宜的靶器官

。,。

本標準是基于那些在驗證試驗中使用的試驗方法這些驗證試驗的結果已經表明該方法在

OECD,

實驗室內和實驗室間是可靠的和可重復的[5,7]現在可以利用兩種方法即切除卵巢的成年雌性動物

。,

方法和未發(fā)育成熟的不切除卵巢的方法驗證試驗結

(ovx-adultmethod)(immaturemethod)。OECD

果顯示這兩種方法有可比較的敏感性和可重復性然而對于未發(fā)育成熟的動物因為其具備完整的下

。,,

丘腦垂體性腺軸用于試驗時其反應的特異性要差一些但卻比切除卵巢的動物檢測的范

——(HPG),,

圍更大一些因為它除了可用于檢測作用于雌激素受體的物質也可用于檢測作用于軸的物質

,,HPG。

在大約為日齡時大鼠的軸具有了功能在這之前用促性腺激素釋放激素等處理不能促進

15,HPG。,

Ⅱ

GB/T28647—2012

青春期發(fā)育在即將到達青春期陰道開口之前雌性動物將經歷幾個類似休眠的性周期在這期間未

。、,,

引起陰道開口和排卵但是激素水平會有波動如果化學物直接或間接地刺激軸則可引起青春

,。HGP,

期提前早排卵和加快陰道開口除了可作用于軸的物質外若飼料中雖然不含有雌激素物質但

、。HPG,

含有較高水平的可代謝能量也可刺激動物發(fā)育加快陰道口開放上述這些物質不會引起切除卵巢的

,、。

成年動物的子宮增重反應因為它們的軸沒有功能

,HPG。

考慮到動物福利該方法應優(yōu)先使用未發(fā)育成熟的大鼠這樣可以避免對動物做手術也可避免由

,,,

于動物進入發(fā)情周期而將動物廢棄的可能性見

(5.4.1)。

子宮增重不是完全由雌激素引起的也就是說除了雌激素激動劑和拮抗劑之外的其他物質也可引

,

起子宮增重例如相對高劑量的黃體酮睪酮或者各種人工合成的孕激素都

。(progesterone)、(progestin)

可刺激子宮增重[30]子宮增重的任何改變可以通過組織學檢查陰道角化而予以確定[30]不管誘發(fā)因

。。

素是什么如果子宮增重試驗結果為陽性則一般應進一步對其起因予以闡明其他資料如雌激素受

,,。,

體結合試驗和雌激素受體轉錄活化試驗等體外試驗的資料以及雌性動物青春期分析等體內試驗的資

料也可用于證明雌激素樣作用

,。

由于子宮增重試驗是作為一種體內篩選試驗因此所開展的方法驗證試驗既要考慮動物福利的要

,,

求又要考慮分階段開展試驗的策略驗證試驗主要是為了充分證明其檢測雌激素樣作用是許多化學

,。(

物需要關注的方面的可重復性和敏感性而對其檢測抗雌激素樣作用僅做了少量的驗證工作僅采用

),。

了一個強活性抗雌激素物質進行了驗證這是因為有明確的抗雌激素樣作用未受某些雌激素活性作用

,(

的干擾資料的物質是很有限的因此本標準是針對雌激素樣作用而描述檢測抗雌激素樣作用的試

)。,,

驗方法則包含在一個指南文件中本方法用于檢測單純的抗雌激素物質的可重復性和敏感性在今后

。

當檢測抗雌激素樣作用的方法被常規(guī)使用了一段時間和使用本方法檢測出了更多的抗雌激素樣作用

(

物質后會有更清楚的描述

)。

眾所周知所有與動物有關的試驗程序都應符合當地動物管理的標準下面所述有關動物管理和處

,;

理的要求是最低標準可被當地的動物管理要求所替代給出了仁慈對待動物的指南文件[25]

,。OECD。

與所有使用活體動物進行的試驗一樣應在試驗前確定是否需要開展該試驗例如在下列兩種情

,。

況可開展該試驗潛在的暴露量大見附錄概念框架中的第級或者其雌激素樣作用結果提示

:(1)(A、1)、

需通過開展體內試驗來證明這種作用概念框架中第級或第級的體內試驗結果提示需證實所

。(2)45

產生的效應是與雌激素機制有關的而體外試驗不能對此予以證明

,。

Ⅲ

GB/T28647—2012

化學品嚙齒類動物子宮增重試驗

雌激素作用的短期篩選試驗

1范圍

本標準規(guī)定了化學品嚙齒類動物子宮增重試驗雌激素作用的短期篩選試驗方法的術語和定義試

、

驗原理試驗方法描述試驗步驟試驗數據和報告結果的解釋和認可

、、、、。

本標準適用于雌激素作用短期篩選嚙齒類動物子宮增重試驗

。

2術語和定義

下列術語和定義適用于本文件

。

21

.

抗雌激素樣作用antioestrogenicity

化學品抑制哺乳動物體內β雌二醇β作用的能力

17-(estr