標(biāo)準(zhǔn)解讀

《GB/T 34750-2017 副豬嗜血桿菌檢測(cè)方法》是一項(xiàng)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn),主要針對(duì)副豬嗜血桿菌(Haemophilus parasuis)的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)提供了規(guī)范化的指導(dǎo)。該標(biāo)準(zhǔn)適用于豬只及其相關(guān)樣本中副豬嗜血桿菌的分離、鑒定以及分子生物學(xué)檢測(cè)。

標(biāo)準(zhǔn)首先介紹了副豬嗜血桿菌的基本背景信息,包括其作為引起豬多發(fā)性漿膜炎和關(guān)節(jié)炎的主要病原之一的重要性。接著,對(duì)所需實(shí)驗(yàn)材料與設(shè)備進(jìn)行了詳細(xì)說(shuō)明,如培養(yǎng)基的選擇(例如巧克力瓊脂)、生物安全柜等實(shí)驗(yàn)室設(shè)施要求,還有用于PCR擴(kuò)增的相關(guān)試劑配置等。

在樣品采集部分,《GB/T 34750-2017》規(guī)定了從活體動(dòng)物或死亡病例中正確獲取組織樣本的方法,并強(qiáng)調(diào)了采樣過(guò)程中需要注意的安全防護(hù)措施。對(duì)于細(xì)菌分離培養(yǎng),則給出了具體的步驟指導(dǎo),包括如何處理樣本以促進(jìn)細(xì)菌生長(zhǎng),以及如何通過(guò)形態(tài)學(xué)特征初步識(shí)別疑似菌落。

關(guān)于鑒定環(huán)節(jié),本標(biāo)準(zhǔn)不僅包含了基于生化反應(yīng)的傳統(tǒng)鑒定技術(shù),還引入了更為準(zhǔn)確快速的分子生物學(xué)手段——聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)。其中,PCR法能夠直接從DNA水平上確認(rèn)是否存在目標(biāo)微生物,極大地提高了檢測(cè)效率與準(zhǔn)確性。此外,標(biāo)準(zhǔn)也提到了使用特異性引物設(shè)計(jì)來(lái)進(jìn)行基因序列分析的重要性。


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....

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  • 2017-11-01 頒布
  • 2018-05-01 實(shí)施
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文檔簡(jiǎn)介

ICS11220

B41.

中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

GB/T34750—2017

副豬嗜血桿菌檢測(cè)方法

Detectionmethodsforhaemophilusparasuis

2017-11-01發(fā)布2018-05-01實(shí)施

中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局發(fā)布

中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)

GB/T34750—2017

前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部提出

。

本標(biāo)準(zhǔn)由全國(guó)動(dòng)物衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口

(SAC/TC181)。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位河南省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所河北農(nóng)業(yè)大

:、、

學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所

、。

本標(biāo)準(zhǔn)起草人吳志明閆若潛張健趙明軍趙雪麗宋勤葉徐引弟王東方王淑娟安春霞

:、、、、、、、、、、

劉梅芬張盼盼謝彩華高鳳山方先珍吳家強(qiáng)拜廷陽(yáng)王一劉淑敏

、、、、、、、、。

GB/T34750—2017

副豬嗜血桿菌檢測(cè)方法

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了副豬嗜血桿菌的分離與鑒定巢式檢測(cè)和實(shí)時(shí)熒光檢測(cè)方法

、PCRPCR。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于對(duì)豬的肺臟心臟腦等組織胸腔腹腔心包積液或關(guān)節(jié)液抗凝血細(xì)菌培養(yǎng)物等

、、,、、,,

樣品中副豬嗜血桿菌的檢測(cè)

。

2縮略語(yǔ)

下列縮略語(yǔ)適用于本文件

。

堿基對(duì)

bp:(BasePair)

脫氧核糖核酸

DNA:(DeoxyribonucleicAcid)

脫氧核糖核苷三磷酸

dNTPs:(DeoxyribonucleosideTriphosphates)

小溝結(jié)合

MGB:(MinorGrooveBinder)

煙酰胺腺嘌呤二核苷酸

NAD:(NicotinamideAdenineDinucleotide)

磷酸鹽緩沖液

PBS:(PhosphateBufferSolution)

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)

PCR:(PolymeraseChainReaction)

Taq酶Taq聚合酶Taq

:DNA(DNAPolymerase)

緩沖液

TE:Tris-EDTA(Tris-EDTABuffer)

胰蛋白胨大豆瓊脂

TSA:(TrypticSoyAgar)

胰蛋白胨大豆肉湯

TSB:(TrypticSoyBroth)

3儀器

31生物安全柜

.。

32恒溫培養(yǎng)箱

.。

33光學(xué)顯微鏡

.。

34全自動(dòng)微生物鑒定儀

.。

35擴(kuò)增儀

.PCR。

36高速冷凍離心機(jī)g以上

.(12000×)。

37核酸電泳儀和水平電泳槽

.。

38恒溫水浴鍋

.。

39單道微量移液器

.(0.5μL~10μL;2μL~20μL;20μL~200μL;100μL~1000μL)。

310組織勻漿器或研缽

.。

311凝膠成像系統(tǒng)或紫外投射儀

.()。

312實(shí)時(shí)熒光定量

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