槐米中蘆丁含量的測定

槐米中蘆丁含量的測定

槐樹原產(chǎn)于中國。它用途廣泛，功能大，是一種集藥用、食用、保健、觀賞于一身的優(yōu)良樹種?；睒渥怨攀侵尾〉闹匾幵粗参?，被譽(yù)為“金藥樹”槐樹依據(jù)其花色分為白、青、黃、金槐等4個(gè)類別.除了國槐外，槐樹還有龍爪槐、蝴蝶槐、金葉國槐、五色槐、黃金槐、雙季米槐、香花槐和金花槐等變種。它全身都是藥，花、葉、枝、根、果實(shí)及種子均可入藥，以槐花入藥最普遍。洋槐五月開花，其花一般食用，國槐七八月才開花，其花入藥。故我國藥用槐米多出自國槐。金藥樹—槐樹槐米2010年《中華人民共和國藥典》規(guī)定，槐樹的藥用部分為干燥的花朵及花蕾。前者習(xí)稱“槐花”，后者習(xí)稱“槐米”。槐米中含有蘆丁、槲皮素、皂甙、多糖黏液質(zhì)等成分，其中,蘆丁是主要藥用成分,因此對其研究有非?，F(xiàn)實(shí)的意義。蘆丁

蘆丁是一種黃酮類化合物?；泵字械奶J丁隨槐花的產(chǎn)地及收取時(shí)間的不同其含量在10%～28%之間，我國蘆丁生產(chǎn)主要以槐米為原料。

蘆丁的藥理作用抗炎作用抗氧化作用抗菌作用抗癌作用對腦缺血損傷的保護(hù)作用對腎臟缺血損傷的保護(hù)作用降血壓作用胃腸粘膜保護(hù)作用蘆丁的化學(xué)特性蘆丁分子式C27H30O16，分子量610.51，為淺黃色針狀結(jié)晶，難溶于冷水，可溶于熱水、甲醇、乙醇、吡啶，易溶于堿水。

蘆丁提取技術(shù)概述13245醇溶劑浸提法熱水提取法堿提酸沉降法

超聲輔助提取法

微波提取法超聲波輔助提取法利用超聲波的空化效應(yīng)、湍流效應(yīng)、微擾效應(yīng)、界面效應(yīng)和聚能效應(yīng)等物理作用，加速被破碎物細(xì)胞壁的破裂，促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)含物的溶出，從而實(shí)現(xiàn)天然產(chǎn)物低溫、快速提取的目標(biāo)。具有雜質(zhì)含量低、有效成分含量高、提取時(shí)間短的優(yōu)點(diǎn)。蘆丁為細(xì)胞中的次生代謝產(chǎn)物，存在于細(xì)胞質(zhì)中；通過粉碎，破壞細(xì)胞壁和細(xì)胞膜，也就使蘆丁易于被提取出來。堿液對蘆丁有增溶作用，用堿液浸泡后，能使更多的蘆丁溶解出來，同樣也有利于蘆丁的提取。因素設(shè)計(jì)查正交實(shí)驗(yàn)表，根據(jù)L9（34）設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)流程槐米粉碎過40篩目按一定料液比混合加入亞硫氫鈉、硼砂,用氫氧化鈉調(diào)PH至9超聲提取酸沉用鹽酸將PH調(diào)至3離心過濾蘆丁粗提產(chǎn)品濾液靜置、干燥蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密稱取在120℃減壓干燥至恒重的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品200mg，置100mL容量瓶中，加甲醇70mL，置水浴上微熱使溶解，放冷，加甲醇至刻度，搖勻。精密吸取10mL，置100mL量瓶中，加水至刻度，搖勻即得（每1mL中含無水蘆丁0.2mg）。精密量取上述標(biāo)準(zhǔn)溶液0mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL與6.0mL分別置25mL容量瓶中，各加水至6mL，加5％亞硝酸鈉溶液1mL使混勻，放置6分鐘，加10％硝酸鋁溶液1mL搖勻，放置6分鐘，加氫氧化鈉試液10mL，再加水至刻度，搖勻，放置15分鐘；按照分光光度法，在500nm的波長處比色測定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，蘆丁濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。取干燥蘆丁粗品約1g，精密稱定，加甲醇溶解后移入100mL容量瓶，再加甲醇洗滌并入容量瓶，加甲醇至刻度，搖勻。精取10mL置100mL容量瓶，加水至刻度，搖勻。精密量取3mL置25mL容量瓶中，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下的方法，自“加水至6mL”起依法測定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中蘆丁的濃度，計(jì)算即得槐米中蘆丁的提取得率。蘆丁的提取率測定蘆丁的純化——大孔樹脂減法測定法樹脂的預(yù)處理

新鮮樹脂先用乙醇浸泡2次，每次12h，濾去浮游物和破碎樹脂，再用甲醇浸泡2～3次至上清液澄清，最后用去離子水清洗1～2次.采用濕法上柱，并用和洗脫劑同濃度的甲醇水溶液沖洗2～3柱體積，以達(dá)到該濃度下的平衡狀態(tài)。用過的樹脂，用足量甲醇浸泡使吸附物解吸達(dá)到再生的目的。如果反復(fù)使用樹脂吸附效果下降，可用3%NaOH及10%NaCl混合液浸泡清洗12h，濾去溶劑并用去離子水充分洗滌至呈中性時(shí)即可。提純方法將粗品溶于75%的75℃甲醇溶液中(m:v≈1:7)，待完全溶解趁熱過濾；濾液緩慢加入大孔樹脂色譜柱中(粗品蘆丁與樹脂質(zhì)量比1:10)，待濾液完全浸入大孔樹脂后，分別以75%的甲醇溶液為洗脫劑自然流速進(jìn)行洗脫，待洗脫液顏色由無色變深后，開始第一次收集，至顏色由深變淺結(jié)束，將收集的洗脫液在常溫下自然靜置析晶，過濾并用少量甲醇洗滌濾餅后真空干燥，獲取最終產(chǎn)品;第一次收集結(jié)束后，改用純甲醇溶液進(jìn)行洗脫，待顏色有淺變深開始第二次收集，直顏色變無色結(jié)束，將第二次收集的洗脫液減壓蒸餾獲取浸膏，干燥后獲得的產(chǎn)品用作下次純化工藝過程的粗品蘆丁原料。蘆丁對超氧陰離子O2÷清除作用用鄰苯三酚自氧化法,利用O2÷清除劑能使鄰苯三酚自氧化產(chǎn)物在325nm處的吸收峰受到抑制這一特點(diǎn),用紫外分光光度計(jì)進(jìn)行檢測,間接測得O2÷生成及O2÷的清除率。原理用實(shí)驗(yàn)純化所制的蘆丁配置成20、40、60、80、100μmol/L的溶液.取0.05mmol/LpH8.2的Tris-HCl緩沖液4.5mL于試管中,25℃預(yù)熱20min，加入0.1mmol/L鄰苯三酚0.2mL，不同濃度藥物0.2mL，蒸餾水0.1m