三七總皂甙對低氧高二氧化碳性肺血管收縮的影響 4600字

三七總皂甙對低氧高二氧化碳性肺血管收縮的影響4600字【摘要】目的:探討三七總皂甙(PNS)對肺動脈平滑肌的舒張作用及其與肺動脈內(nèi)皮細胞的關(guān)系。

辦法:采用大鼠離體肺主動脈環(huán)灌流模型。分別在常氧及低氧高二氧化碳條件下，察看PNS對氯化鉀(KCl)及去甲腎上腺素(NE)預(yù)收縮內(nèi)皮完整血管和去內(nèi)皮血管的舒張作用。

結(jié)果:①在常氧及低氧高二氧化碳條件下，累積濃度的PNS對60mmol/LKCl及10-5mol/LNE預(yù)收縮的血管環(huán)均產(chǎn)生劑量依賴性舒張作用(P0.05);但低氧高二氧化碳條件下，去內(nèi)皮組的PNS血管舒張效應(yīng)遠大于內(nèi)皮完整組(P結(jié)論:PNS可減輕低氧高二氧化碳性肺血管收縮，且清除肺動脈內(nèi)皮后這種作用更加明顯，其機制可能與內(nèi)皮介導作用的缺失有關(guān)。

【關(guān)鍵詞】三七總皂甙/低氧/高碳酸血/內(nèi)皮細胞

肺循環(huán)低氧狀態(tài)(常同時伴有二氧化碳潴留)能誘發(fā)肺血管收縮、肺血管阻力增加，以維持通氣-血流的適當比例，這種由于低氧、高二氧化碳引起的機體愛護機制稱為低氧高二氧化碳性肺動脈收縮(hypoxiahypercapnia-inducedpulmonaryvasoconstriction，HHPV)。三七總皂甙(Panaxnotoginoside，PNS)為五加科草本植物三七根莖的主要活性成分，近年研究發(fā)現(xiàn)PNS具有擴張血管、降低血壓、抗實驗性心律失常、反抗鈣離子、去甲腎上腺素誘發(fā)的離體血管條收縮作用[1];也有研究說明，PNS有抑制慢性缺氧性肺動脈高壓的作用[2]。然而，PNS是否影響HHPV，目前尚未見報道。本實驗在大鼠離體肺主動脈環(huán)灌流模型根底上，通過察看常氧和低氧高二氧化碳條件下PNS對肺動脈環(huán)的張力影響，探討其對血管平滑肌的作用及可能的機制。

1材料和辦法

1.1儀器設(shè)備

離體血管環(huán)灌流裝置、Powerlab四道生理記錄儀(澳大利亞Adinstruments公司生產(chǎn));張力換能器(西班牙Panlab公司生產(chǎn));血氣分析儀(購自日本希森美康醫(yī)用電子上海有限公司;AVLCOMPACT3型);PXS-270型離子活度計(上海雷磁儀器廠生產(chǎn))。

1.2藥品和試劑

血塞通注射液(主要成分為PNS，由昆明興中制藥廠生產(chǎn)，批號：000508)。重酒石酸去甲腎上腺素(norepinephrine，NE)為上海禾豐制藥有限公司產(chǎn)品。乙酰膽堿(acetycholine，Ach，美國Sigma公司生產(chǎn))。Krebs溶液(mmol/L)：NaCl115.0，KCl4.7，CaCl22.5，MgSO41.16，NaHCO321.9，NaH2PO41.18，glucose11.0，EDTA-Na20.026，pH7.4。Krebs液中諸試劑均為市售分析純。

1.3血管環(huán)的制備

Sprague-Dawley(SD)大鼠64只，雄性，體重(380±20)g，由上海斯萊克實驗動物有限責任公司提供。實驗時用5%水合氯醛(0.07ml/kg)腹腔注射麻醉后開胸取出心肺,置于4℃Krebs液中迅速剪開右心室，剪除左右肺葉并洗凈殘血。然后快速、輕柔別離肺主動脈(mainpulmonaryartery)，制成3mm長的動脈環(huán)。局部血管環(huán)用棉簽?zāi)ゲ羶?nèi)外表清除內(nèi)皮細胞，以制備去內(nèi)皮肺動脈環(huán)。動脈環(huán)穿過兩個直徑0.2mm的三角形不銹鋼小鉤后,置于盛有10mlKrebs液的恒溫(37℃)離體血管灌注浴槽內(nèi)，持續(xù)充以95%O2+5%CO2的混合氣體。調(diào)節(jié)張力微調(diào)器使最適前負荷(1.2g)在60min內(nèi)加至血管并維持平衡60min，期間每15min換液1次。血管環(huán)穩(wěn)定后，用10-5mol/LNE收縮血管環(huán)達峰值，再參加10-5mol/LAch檢驗血管內(nèi)皮完整性。內(nèi)皮清除組Ach的舒張反饋在10%下列，內(nèi)皮(endothelium，E)完整組Ach的舒張反饋在95%以上，否那么棄用。實驗采用Powerlab生物信號采集系統(tǒng)記錄血管環(huán)張力變化，分別以KC1(60mmol/L)、NE(10-5mol/L)刺激引起的最大收縮幅度為規(guī)范，所得數(shù)據(jù)用百分比比值表示。

1.4實驗程序

1.4.1PNS對KCl預(yù)收縮肺動脈環(huán)的作用:SD大鼠隨機分為4組，每組8只,取肺動脈環(huán)。①常氧內(nèi)皮完整組(KCl+NO+E組)：實驗時浴槽內(nèi)持續(xù)充以95%O2+5%CO2的混合氣體，用60mmol/L的KCl預(yù)收縮血管環(huán)達峰值后，按累積加藥法，每5min加PNS1次，使灌流液中PNS終濃度分別達0.1g/L、0.2g/L、0.4g/L、0.8g/L、1.6g/L，察看常氧條件下PNS對KCl預(yù)收縮的內(nèi)皮完整血管環(huán)的舒張作用。②低氧高二氧化碳(hypoxiahypercapnia，HH)內(nèi)皮完整組(KCl+HH+E組)：實驗前用92%N2+8%CO2的混合氣體充灌pH=7.35的K-H液(37℃)約40min，將溶液瓶密閉，用血氣分析儀監(jiān)測PO2、PCO2，使其分別穩(wěn)定在30mmHg和60mmHg。實驗時將液體灌流入組織浴槽中形成急性低氧高二氧化碳模型，并繼續(xù)向浴槽內(nèi)通以上無氧氣體。其余步驟同KCl+NO+E組。③常氧去內(nèi)皮組(KCl+NO-E組)：實驗前用棉簽?zāi)ゲ羶?nèi)外表清除內(nèi)皮細胞并檢測去內(nèi)皮程度，余操作同KCl+NO+E組。④低氧高二氧化碳去內(nèi)皮組(KCl+HH-E組)：實驗前清除血管內(nèi)皮細胞并檢測去內(nèi)皮程度,余辦法同KCl+HH+E組。

1.4.2PNS對NE預(yù)收縮的肺動脈環(huán)的作用:將別離好的血管環(huán)按照隨機原那么分配到下列4組中，每組8只:①常氧內(nèi)皮完整組(NE+NO+E組)。②低氧高二氧化碳內(nèi)皮完整組(NE+HH+E組)。③常氧去內(nèi)皮組(NE+NO-E組)。④低氧高二氧化碳去內(nèi)皮組(NE+HH-E組)。實驗時用10-5mol/LNE預(yù)收縮肺動脈環(huán)，各組處理辦法同1.4.1。

1.5統(tǒng)計學處理辦法實驗所得數(shù)據(jù)均采用SPSS13.0軟件進行處理。多組間比擬采用方差分析，組間兩兩比擬采用LSD法。

2結(jié)果

2.1累積濃度PNS對KC1預(yù)收縮血管環(huán)的作用

在常氧或低氧高二氧化碳條件下，PNS均能使KC1預(yù)收縮的內(nèi)皮完整及去內(nèi)皮肺動脈環(huán)呈劑量依賴性舒張，各組均隨PNS濃度增大而舒張程度增大，差別均有顯著性(均PO.05);即KCl+NO-E組與KCl+NO+E組在同PNS濃度點比擬差別無統(tǒng)計學意義。低氧高二氧化碳條件下，累積濃度PNS對去內(nèi)皮肺動脈環(huán)的舒張作用比內(nèi)皮完整肺動脈環(huán)明顯增強(P2.2累積濃度PNS對NE預(yù)收縮的血管環(huán)的作用

在常氧或低氧高二氧化碳條件下，PNS均能使NE預(yù)收縮的內(nèi)皮完整及去內(nèi)皮肺動脈環(huán)呈劑量依賴性舒張，各組均隨PNS濃度增大而致舒張程度增大，差別均有顯著性(均PO.05)，即NE+NO-E組與NE+NO+E組比擬差別無統(tǒng)計學意義。低氧高二氧化碳條件下，累積濃度PNS對去內(nèi)皮肺動脈環(huán)的舒張作用比內(nèi)皮完整肺動脈環(huán)明顯增強(P3討論

三七總皂甙是中藥三七的主要成分,具有擴張血管、降低心肌耗氧量、減輕心肌炎心肌損傷[3]、抑制血小板凝集、延長凝血時間、降血脂、去除自由基、抗炎、抗氧化等藥理作用[4]，主要用于心腦血管系統(tǒng)疾病和中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的治療。近年來隨著研究的不斷深入,PNS在肺動脈高壓、肺心病中的作用越來越受到重視。

目前普遍認為，PNS是一種鈣通道阻滯劑，具有阻斷去甲腎上腺素所致的Ca2+內(nèi)流的作用[5，6]。本實驗察看到，PNS對NE、KC1刺激肺動脈環(huán)引起的收縮有明顯的抑制作用，并呈現(xiàn)量效關(guān)系，表明PNS同樣具有阻斷高鉀所致的Ca2+內(nèi)流的作用。NE是選擇性的受體沖動藥，屬受體耦聯(lián)的鈣通道激活劑;KC1可引起血管平滑肌細胞除極，激活電壓依賴性的鈣通道，二者均通過細胞質(zhì)鈣濃度的增加而產(chǎn)生血管收縮[7]，因此PNS對血管平滑肌細胞膜的受體依賴性鈣通道和電壓依賴性鈣通道均有明顯的抑制作用。

本實驗還顯示，無論NE還是KC1預(yù)收縮的血管環(huán)，低氧高二氧化碳均明顯增強了PNS的血管舒張效應(yīng)，且在去內(nèi)皮肺動脈環(huán)中，這一作用更為明顯。本室以往研究說明，低氧高二氧化碳可直接引起肺主動脈環(huán)發(fā)生早期短暫收縮反饋(后期收縮反饋不明顯)，這一反饋的發(fā)生可能與肺動脈平滑肌細胞(PASMC)上的延遲整流性鉀通道(KDR)和L型電壓依賴性Ca2+通道(L-VDC)有關(guān)[8]。本研究中加用PNS后，肺動脈沒有出現(xiàn)收縮反饋，反而呈現(xiàn)劑量依賴性舒張狀態(tài)，表明PNS能夠解除低氧高二氧化碳對KDR通道的抑制，維持PASMC膜復(fù)極化狀態(tài)，減少細胞外Ca2+內(nèi)流，引起肺動脈舒張。同時，PNS也可能抑制了鈣激活性氯通道(ClCa)[9]，使Cl-外流減少，進一步引起肺動脈舒張。低氧高二氧化碳后期(肺動脈環(huán)置于低氧高二氧化碳浴液中5min后)PNS能進一步引起肺動脈舒張，除與PNS的鈣阻滯作用有關(guān)外，低氧高二氧化碳直接抑制鈣敏感鉀通道(KCa)引起肺動脈擴張也是一個重要因素[10]。

本實驗發(fā)現(xiàn)，常氧時，PNS的舒張作用與內(nèi)皮存在與否無關(guān);而低