標(biāo)準(zhǔn)解讀
《GB/T 40174-2021 工具酶純度的檢測(cè)方法》是一項(xiàng)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn),旨在為工具酶純度的測(cè)定提供標(biāo)準(zhǔn)化指導(dǎo)。該標(biāo)準(zhǔn)適用于各種工具酶,包括但不限于限制性?xún)?nèi)切酶、DNA聚合酶等生物技術(shù)領(lǐng)域中常用的酶類(lèi)。
根據(jù)該標(biāo)準(zhǔn)文件,工具酶純度的檢測(cè)主要通過(guò)電泳分析法來(lái)進(jìn)行,具體涵蓋了SDS-PAGE(十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳)和HPLC(高效液相色譜)兩種技術(shù)手段。其中,SDS-PAGE被廣泛用于蛋白質(zhì)分離與鑒定,能夠直觀(guān)地展示出樣品中不同分子量蛋白條帶的情況;而HPLC則是一種更精確的方法,可用于定量分析目標(biāo)酶及其雜質(zhì)成分。
在執(zhí)行過(guò)程中,首先需要準(zhǔn)備相應(yīng)的試劑及儀器設(shè)備,并按照規(guī)定條件制備待測(cè)樣品。對(duì)于采用SDS-PAGE技術(shù)的情況,要求使用適當(dāng)濃度的凝膠系統(tǒng)對(duì)樣品進(jìn)行處理,隨后通過(guò)染色或銀染等方式使條帶顯現(xiàn)出來(lái),最后基于條帶強(qiáng)度對(duì)比來(lái)評(píng)估目標(biāo)酶的純度水平。如果選擇HPLC作為檢測(cè)手段,則需設(shè)置合理的流動(dòng)相組成、流速以及柱溫等參數(shù),確保獲得準(zhǔn)確可靠的測(cè)試結(jié)果。
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....
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- 現(xiàn)行
- 正在執(zhí)行有效
- 2021-05-21 頒布
- 2021-12-01 實(shí)施
文檔簡(jiǎn)介
ICS07080
CCSC.27
中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)
GB/T40174—2021
工具酶純度的檢測(cè)方法
Puritydetectionmethodofreagentenzymes
2021-05-21發(fā)布2021-12-01實(shí)施
國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局發(fā)布
國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)
GB/T40174—2021
前言
本文件按照標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第部分標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則的規(guī)定
GB/T1.1—2020《1:》
起草
。
請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專(zhuān)利本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專(zhuān)利的責(zé)任
。。
本文件由全國(guó)工具酶標(biāo)準(zhǔn)化工作組提出并歸口
(SAC/SWG11)。
本文件起草單位福建南生科技有限公司夏禾深圳生物技術(shù)有限公司蘇州坤琪生物科技有限
:、()、
公司上海鷹姿生命科技有限公司雷谷廈門(mén)生物醫(yī)藥有限公司福建華燦制藥有限公司廈門(mén)大學(xué)
、、()、、、
安琪酵母股份有限公司山東大學(xué)北京化工大學(xué)復(fù)旦大學(xué)中國(guó)科學(xué)院微生物研究所深圳華因康基
、、、、、
因科技有限公司
。
本文件主要起草人黃發(fā)燦詹學(xué)雄鄭登忠趙晶朱力鐘江張永有姚鵑陳秀蘭陳勁春劉文軍
:、、、、、、、、、、、
郭延巍
。
Ⅰ
GB/T40174—2021
工具酶純度的檢測(cè)方法
1范圍
本文件描述了工具酶純度檢測(cè)方法的術(shù)語(yǔ)和定義原理試劑或材料儀器設(shè)備樣品制備試驗(yàn)步
、、、、、
驟結(jié)果計(jì)算及質(zhì)量控制
、。
本文件適用于工具酶純度的檢測(cè)
。
2規(guī)范性引用文件
下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款其中注日期的引用文
。,
件僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改單適用于
,;,()
本文件
。
分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法
GB/T6682
電泳裝置
YY/T0087
3術(shù)語(yǔ)和定義
下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件
。
31
.
工具酶純度purityofreagentenzymes
目標(biāo)工具酶在樣品總蛋白質(zhì)或固含物中所占的質(zhì)量百分比
。
32
.
蛋白質(zhì)含量contentofprotein
樣品經(jīng)福林酚法測(cè)定出每毫克或每毫升樣品中的蛋白質(zhì)所占的質(zhì)量
。
33
.
固含物含量contentofsolid
樣品烘干后獲得的無(wú)水固體物質(zhì)在每毫克或每毫升樣品中所占的質(zhì)量
。
4原理
用牛血清白蛋白標(biāo)準(zhǔn)品作對(duì)照對(duì)樣品經(jīng)十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳后的膠帶進(jìn)
,(SDS)-
行掃面再進(jìn)行灰度值計(jì)算獲得樣品中目標(biāo)工具酶的質(zhì)量再采用福林酚法測(cè)定樣品總蛋白質(zhì)的質(zhì)量
,,,
或用熾灼殘?jiān)鼨z查法測(cè)定樣品固含物含量從而計(jì)算出工具酶純度
,。
5試劑或材料
除非另有規(guī)定所用的試劑均為分析純水為規(guī)定的二級(jí)水
,,GB/T6682。
51堿性銅溶液
.
稱(chēng)取氫氧化鈉碳酸鈉加水使溶解作為甲液取酒石酸鉀
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