診斷酶學第五版

關于診斷酶學第五版第一頁，共五十五頁，2022年，8月28日第一節(jié)概述（一）酶的組成、結構和功能●

酶的本質---絕大部分的酶是蛋白質，有些酶是核酸和酶蛋白組成的復合體，極少數(shù)酶的本質是核酸?！?/p>

酶的特性---極高的催化效率、高度的特異性

(specificity)以及催化作用的可調節(jié)性一、酶的概念與特征第二頁，共五十五頁，2022年，8月28日酶的結構和功能●

酶是蛋白質，具有一、二、三級結構，有些酶還具有四級結構。●單體酶(monomericenzyme)---只由一條多肽鏈構成●寡聚酶(oligomericenzyme)---由多個相同或不同亞基以非共價鍵連接的酶●多酶體系(multienzymesystem)---由幾種不同功能的酶彼此聚合而成的多酶復合物●酶的必需基團(essentialgroup)---與酶的活性密切相關的基團●酶的活性中心(activecenter)---組成具有能與底物結合并起催化反應的特定空間結構區(qū)域第三頁，共五十五頁，2022年，8月28日（二）酶的催化作用機制●酶主要通過與底物形成一種或多種中間復合物來降低反應的活化能。

●在酶促反應中，酶與底物結合時，底物首先和酶分子上的活性中心相結合，形成酶－底物中間復合物（ES），降低反應的活化能，顯著提高了反應速度。第四頁，共五十五頁，2022年，8月28日（三）酶的命名、分類與編號●

酶的命名---習慣命名法、系統(tǒng)命名法●

酶的分類---可分為六大類氧化還原酶(oxido-reductases)、轉移酶(transferases)、水解酶(hydrolases)、裂解酶(或裂合酶)(lyases)、異構酶(isomerases)、合成酶(或連接酶)(synthetases或ligases)●

酶的編號---用4個數(shù)字加以系統(tǒng)編號第一個數(shù)字表示酶的類別，第二個表示亞類，第三個表示亞-亞類，第四個表示酶的編號序數(shù)?！?/p>

酶的命名---習慣命名法、系統(tǒng)命名法（四）酶分類與編號第五頁，共五十五頁，2022年，8月28日

習慣用名英文縮寫EC編號系統(tǒng)名乳酸脫氫酶LD（LDH）1.1.1.27L乳酸：NAD+氧化還原酶單胺氧化酶MAO1.4.3.4單胺：氧化還原酶γ-谷氨酰轉移酶γ-GT/GGT2.3.2.2γ-谷氨酰肽：氨基酸γ-谷氨酰轉移酶門冬氨酸氨基轉移酶AST2.6.1.1L-門冬氨酸：α-酮戊二酸氨基轉移酶（谷草轉氨酶）(GOT)丙氨酸氨基轉移酶ALT2.6.1.2L-丙氨酸：α-酮戊二酸氨基轉移酶（谷丙轉氨酶）(GPT)肌酸激酶CK2.7.3.2三磷酸腺苷：肌酸轉磷酸酶堿性磷酸酶ALP(AKP)3.1.3.1正磷酸單酯磷酸水解酶臨床酶學分析中常用酶的名稱與編號第六頁，共五十五頁，2022年，8月28日二、同工酶的概念與特征●同工酶是指催化相同化學反應，但酶蛋白的分子結構、理化性質乃至免疫學性質不同的一組酶?！窀鶕?jù)同工酶的來源和結構不同，從基因角度可將其分為單基因決定的同工酶、復等位基因同工酶、多基因決定的同工酶和修飾同工酶四類。第七頁，共五十五頁，2022年，8月28日第八頁，共五十五頁，2022年，8月28日三、工具酶●通常把酶學分析中作為試劑用于測定化合物濃度或酶活性濃度的酶稱為工具酶?！癯Ｓ霉ぞ呙付酁檠趸€原酶類。第九頁，共五十五頁，2022年，8月28日1．偶聯(lián)H2O2的工具酶及其指示反應

利用葡萄糖氧化酶等工具酶使相應底物被氧化生成H2O2。在POD的直接催化下，H2O2氧化芳香族胺色素原生成有色的色素,再進行比色測定。

2．NAD(P)+或NAD(P)H偶聯(lián)的脫氫酶及其指示反應

作為工具酶的脫氫酶如LD將底物的氫原子去除后傳遞給NAD(P)+而形成NAD(P)H。因NAD(P)H在340nm有特征性光吸收，可借此用分光光度法進行檢測。

（一）工具酶參與的指示反應

第十頁，共五十五頁，2022年，8月28日第十一頁，共五十五頁，2022年，8月28日（二）酶循環(huán)法

（405nm）第十二頁，共五十五頁，2022年，8月28日（三）代謝物濃度的酶法測定技術

直接法1．終點法

酶偶聯(lián)法2．動力學法

第十三頁，共五十五頁，2022年，8月28日第二節(jié)酶測定技術酶活性測定主要利用酶有加速化學反應（催化）的特性，通過測定被加速化學反應的反應速率，根據(jù)酶促反應中底物的減少量或產(chǎn)物的生成量來計算酶活性濃度的高低。第十四頁，共五十五頁，2022年，8月28日酶促反應動力學●酶促反應

第十五頁，共五十五頁，2022年，8月28日●酶促反應進程第十六頁，共五十五頁，2022年，8月28日一、酶活性測定

（一）定時法測定酶活性

終點法——是在酶促反應平衡期（[S]或[P]不變）任何一點進行測定，故不需終止反應。第十七頁，共五十五頁，2022年，8月28日1．直接法

是在不終止酶促反應條件下，直接通過測定反應體系中底物或產(chǎn)物理化特性的變化如吸光度、熒光、旋光性、pH、電導率、粘度等，從而計算出酶活性濃度。

2．間接法

在原反應體系中加入另一些酶試劑，所進行的酶促反應和被測酶反應偶聯(lián)起來。

連續(xù)測定酶反應過程中某一反應產(chǎn)物或底物的濃度隨時間變化的多點數(shù)據(jù)，求出酶反應初速度，間接計算酶活性濃度的方法。（二）連續(xù)監(jiān)測法測定酶活性

第十八頁，共五十五頁，2022年，8月28日酶偶聯(lián)反應

ABCD

酶學分析中作為試劑用于測定化合物濃度或酶活性濃度的酶

Ei——指示酶Ea——輔助酶ExEiEa工具酶第十九頁，共五十五頁，2022年，8月28日L-丙氨酸＋α-酮戊二酸α-丙酮酸＋L-谷氨酸丙酮酸＋NADH＋H+

乳酸＋NAD+ALT（樣品）LD（試劑）酶耦聯(lián)法測定ALT340nm－△A/minα-酮酸標本中GLDH標本中①②試劑1試劑2第二十頁，共五十五頁，2022年，8月28日第二十一頁，共五十五頁，2022年，8月28日酶耦聯(lián)法測定舉例第二十二頁，共五十五頁，2022年，8月28日第二十三頁，共五十五頁，2022年，8月28日第二十四頁，共五十五頁，2022年，8月28日(三)干擾因素

1．其他酶和物質的干擾2．酶的污染3．非酶反應4．分析容器的污染5．沉淀形成

第二十五頁，共五十五頁，2022年，8月28日

（四）血清酶活性濃度測定條件的優(yōu)化

(1)方法選擇

(2)儀器和設備

(3)試劑

(4)儀器參數(shù)的設置

1．方法類型2．波長3．樣品量與試劑量

4.稀釋水量5．反應時間6．孵育時間

7.延遲時間8.監(jiān)測時間9.試劑吸光度上、下限10.底物耗盡限額11.線性度12.試劑空白速率13.線性范圍14.計算因子F值

(五)部分分析前因素對酶活性測定的干擾

1．溶血2．抗凝劑3．標本儲存溫度第二十六頁，共五十五頁，2022年，8月28日（六）酶活性濃度的單位

1.酶活性單位（1）慣用單位（2）國際單位---在特定的條件下，一分鐘內使底物轉變一微摩爾的酶量為一個國際單位。（3）Katal單位---在規(guī)定條件下，每秒鐘催化轉化一摩爾底物的酶量。1katal＝60×106U

第二十七頁，共五十五頁，2022年，8月28日

2.酶活性濃度單位

以每單位體積所含的酶活性單位數(shù)表示。（1）表示方法---U／L

（2）酶活性濃度單位的計算---用連續(xù)監(jiān)測法測定時，根據(jù)摩爾消光系數(shù)計算。第二十八頁，共五十五頁，2022年，8月28日3.參考值和正常上限倍數(shù)的應用（1）參考區(qū)間（2）正常上限倍數(shù)的應用正常上限(upperlimitsofnormal，

ULN)倍數(shù)作為酶活性濃度的表示法，就是測定值除以正常上限值。第二十九頁，共五十五頁，2022年，8月28日（七）系數(shù)K值的計算與應用1.系數(shù)K值的意義與設置2.系數(shù)K值的類型與計算第三十頁，共五十五頁，2022年，8月28日（八）臨床酶學測定的標準化

1.標準化途徑

1．使用推薦方法和參考方法

2．使用公認的酶校正物或酶參考物

2.酶活性濃度測定的參考系統(tǒng)

1．建立原級參考方法

2．制備原級參考物

3．建立參考實驗室網(wǎng)絡第三十一頁，共五十五頁，2022年，8月28日（一）測定原理（二）免疫化學測定的優(yōu)缺點

優(yōu)點主要有：①靈敏度高②特異性高③能用于一些不表現(xiàn)酶活性的酶蛋白④特別適用于同工酶的測定局限性主要有：①制備足夠量的提純酶作為抗原和具有免疫化學性質的抗血清較困難②測定步驟多，操作繁瑣③測定成本高二、酶質量測定第三十二頁，共五十五頁，2022年，8月28日三、同工酶檢測

第三十三頁，共五十五頁，2022年，8月28日

(一)電泳法---瓊脂糖凝膠電泳、聚丙烯酰胺凝膠電泳、等電聚焦電泳、毛細管電泳

●

用電泳法進行同工酶分析時，如顯示的區(qū)帶數(shù)與同工酶數(shù)不一致時，要特別注意巨分子酶的存在。

(二)層析法第三十四頁，共五十五頁，2022年，8月28日血清LD電泳圖譜分析第三十五頁，共五十五頁，2022年，8月28日正常和病理狀況時血清CK同工酶譜第三十六頁，共五十五頁，2022年，8月28日(三)免疫分析法

免疫抑制法

利用同工酶的一種亞基與相應的抗體結合后，酶活性受到抑制，測定加與不加抗體前后樣品中酶活性的變化，可以計算出該型同工酶的活性。不加抗CK-MM血清時樣品的CK活性：CK-MM和CK-MB活性；加入抗CK-MM血清時樣品的CK活性：50％CK-MB的活性；加入抗CK-MM血清時樣品的CK活性×2：CK-MB活性；所測CK-MM和CK-MB之總活性－CK-MB活性＝CK-MM活性。第三十七頁，共五十五頁，2022年，8月28日

(四)動力學分析法

1．底物特異性分析法

2．抑制劑分析法

3．pH分析法

4．熱失活分析法

(五)蛋白酶水解法第三十八頁，共五十五頁，2022年，8月28日第三節(jié)常用酶及同工酶測定的臨床應用

一、血清酶血清酶活性升高的原因：●組織器官受損造成細胞破壞或細胞膜通透性增高，細胞內的某些酶大量釋放入血；●細胞的轉換率增高或細胞的增殖加快，其特異的標志酶釋放入血；●細胞內酶的合成或誘導增強；●酶的清除受阻。第三十九頁，共五十五頁，2022年，8月28日1、血清酶的來源（1）血漿特異酶（2）非血漿特異酶①外分泌酶②細胞酶2、血清酶的去路（1）血清酶的半壽期（2）血清酶的失活和排泄（一）血清酶的來源與去路

第四十頁，共五十五頁，2022年，8月28日（二）血清酶的生理差異

1．性別

2．年齡

3．進食

4．運動

5．妊娠

6．其他第四十一頁，共五十五頁，2022年，8月28日

常用的酶譜：(1)心肌酶譜---AST、LD、CK、CK-MB、CK-MB亞型或CK-MM亞型(2)肌酶譜---LD、AST及其同工酶、CK-MM亞型(3)肝酶譜---ALT、LD、γ-GT、ALP、ChE、MAO(4)腫瘤酶譜---ACP及其同工酶、ALP及其同工酶、

γ-GT及其同工酶、AFU、AMY及其同工酶、LPS(5)胰酶譜---AMY及其同工酶、LPS、彈力蛋白酶-1、磷脂酶A2（三）血清酶的臨床應用

第四十二頁，共五十五頁，2022年，8月28日第四十三頁，共五十五頁，2022年，8月28日二、尿液酶三、漿膜腔積液酶四、腦脊液酶

第四十四頁，共五十五頁，2022年，8月28日五、同工酶的診斷價值

LD同工酶——心肌梗死、肝功能損傷和惡性腫瘤CK同工酶——心肌梗死、肌肉疾病和神經(jīng)系統(tǒng)疾病AST同工酶——肝臟、心肌等細胞損傷程度的判斷GP同工酶——急性心肌梗死ARS同工酶——膀胱癌ALD同工酶——肝臟疾病、心肌梗死、神經(jīng)肌肉系統(tǒng)疾病和惡性腫瘤γ-GT同工酶——肝臟占位性病變AMS同工酶——急性胰腺炎、腮腺炎ALP同工酶——肝膽疾病、骨骼疾病ACP同工酶——前列腺疾病GST同工酶——肝臟疾病、肺癌第四十五頁，共五十五頁，2022年，8月28日1、轉氨酶及其同工酶DeRitis比值（AST／ALT）——對于急、慢性肝炎的診斷、鑒別診斷以及判斷轉歸也有特別價值。急性肝炎時比值＜1，肝硬化時比值≥2，肝癌時比值≥3?！懊改懛蛛x”現(xiàn)象——重癥肝炎時由于大量肝細胞壞死，血中ALT逐漸下降，而膽紅素卻進行性升高，常是肝壞死的前兆。第四十六頁，共五十五頁，2022年，8月28日2、γ-谷氨酰轉移酶及其同工酶γ-GT同工酶分為γ-GT1、γ-GT2、γ-GT3和γ-GT4四種，正常人只見γ-GT2和γ-GT3。重癥肝膽疾病和肝癌時常有γ-GT1出現(xiàn)，乙醇性肝壞死和膽總管結石時常有γ-GT2增加，γ-GT4與膽紅素增高密切相關。第四十七頁，共五十五頁，2022年，8月28日3、肌酸激酶及其同工酶和亞型

●

在細胞質內存在3種同工酶，即CK-BB(CK1)，CK-MB(CK2)和CK-MM(CK3)。在細胞線粒體內還存在另一CK同工酶，即所謂線粒體CK(CK-Mt)，也稱CK4?！?/p>

CK-MM亞型測定對早期AMI的檢出更為敏感，一般以CK-MM3／CK-MMl＞1．0作為診斷AMI的標準●

CK-MB2亞型在AMI早期診斷和判斷有無再灌注上有很高的靈敏度和特異性。一般CK-MB2>1．9U／L或CK-MB2／CK-MB1>1．5可作為AMI的診斷標準之一。第四十八頁，共五十五頁，2022年，8月28日4、乳酸脫氫酶及其同工酶●

AMI時，LD由于分子量較大，在常用心肌酶中升高最遲，通常在梗死8-18h升高，48-144h達峰值，可顯著升高(>5ULN)，因其半壽期較長，增高持續(xù)時間可達5-10d，此時其他酶已恢復正常，在亞急性心肌梗死診斷上有一定價值。●

測定血清及胸腹水中LD含量常用來鑒別其為漏出液抑或滲出液，若胸水LD／血清LD＞0.6、腹水LD／血清LD＞0.4為滲出液，反之為漏出液。●

骨骼肌和肝細胞損傷時常出現(xiàn)LD5＞LD4。急性肝炎時LD1和LD2相對下降，LD5升高；慢性肝炎時LD5升高，且LDl＜LD3；肝硬化時僅表現(xiàn)LD2下降和LD5升高；肝癌時LD5升高，但LD1＞LD3。惡性腫瘤如轉移到肝臟往往伴有LD4、LD5升高。第四十九頁，共五十五頁，2022年，8月28日5、堿性磷酸酶及其同工酶●

人體各組織ALP同工酶可分為3大類，即胎盤ALP、腸ALP和肝／骨／腎ALP同工酶?！?/p>

肝硬化、膽石癥和腫瘤引起的膽汁淤積，ALP增高達ULN的5—20倍。90％以上的肝外膽道阻塞患者血清ALP升高，升高的程度常和阻塞程度及病程成正比?！?/p>

胃腸道腫