標(biāo)準(zhǔn)解讀

《LY/T 3107-2019 柳樹品種微衛(wèi)星標(biāo)記鑒別技術(shù)規(guī)程》是一項(xiàng)針對柳樹品種鑒定的標(biāo)準(zhǔn)，主要通過微衛(wèi)星（也稱為簡單序列重復(fù)或SSR）標(biāo)記技術(shù)來進(jìn)行。該標(biāo)準(zhǔn)詳細(xì)規(guī)定了從樣品采集到最終結(jié)果分析的全過程，適用于柳樹種質(zhì)資源的鑒定、保護(hù)以及利用等方面。

在樣品采集方面，標(biāo)準(zhǔn)指出了采樣對象應(yīng)為健康、無病蟲害的新鮮葉片，并對樣本保存條件提出了具體要求，以保證DNA的質(zhì)量不受影響。對于DNA提取，推薦使用高效且穩(wěn)定的CTAB法或其他適合的方法，確保獲得高質(zhì)量的基因組DNA用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

關(guān)于引物選擇與PCR擴(kuò)增，《LY/T 3107-2019》列舉了幾組經(jīng)過驗(yàn)證具有良好多態(tài)性的微衛(wèi)星位點(diǎn)作為參考，并提供了相應(yīng)的正向和反向引物序列。同時(shí)，還明確了PCR反應(yīng)體系配置、循環(huán)參數(shù)設(shè)置等關(guān)鍵步驟的操作指南，旨在提高擴(kuò)增效率并減少非特異性產(chǎn)物的產(chǎn)生。

電泳檢測環(huán)節(jié)，標(biāo)準(zhǔn)建議采用聚丙烯酰胺凝膠電泳或者毛細(xì)管電泳系統(tǒng)來分離不同長度的擴(kuò)增片段，并通過銀染或熒光標(biāo)記的方式進(jìn)行可視化。此外，還強(qiáng)調(diào)了數(shù)據(jù)分析的重要性，包括如何正確讀取條帶信息、構(gòu)建遺傳距離矩陣及運(yùn)用軟件工具完成聚類分析等內(nèi)容，以便于準(zhǔn)確判斷樣品間的親緣關(guān)系。

整個(gè)過程遵循科學(xué)嚴(yán)謹(jǐn)?shù)脑瓌t，不僅能夠有效區(qū)分不同的柳樹品種，也為進(jìn)一步研究其遺傳多樣性提供了技術(shù)支持。


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....

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  • 2019-10-23 頒布
  • 2020-04-01 實(shí)施
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LY/T 3107-2019柳樹品種微衛(wèi)星標(biāo)記鑒別技術(shù)規(guī)程-免費(fèi)下載試讀頁

文檔簡介

ICS6502020

B61..

中華人民共和國林業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)

LY/T3107—2019

柳樹品種微衛(wèi)星標(biāo)記鑒別技術(shù)規(guī)程

TechnicalregulationforwillowvarietiesidentificationbySSRmarkers

2019-10-23發(fā)布2020-04-01實(shí)施

國家林業(yè)和草原局發(fā)布

LY/T3107—2019

前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

本標(biāo)準(zhǔn)由全國林木種子標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會提出并歸口

(SAC/TC115)。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草單位南京林業(yè)大學(xué)江蘇省林業(yè)科學(xué)研究院山東省林業(yè)科學(xué)研究院

:、、。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人李淑嫻戴曉港尹佟明陳贏男劉德璽何旭東

:、、、、、。

Ⅰ

LY/T3107—2019

柳樹品種微衛(wèi)星標(biāo)記鑒別技術(shù)規(guī)程

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了以柳屬Salix植物為材料利用微衛(wèi)星標(biāo)記對國家和省審

()DNA,(microsatellite)

認(rèn)定的柳樹品種進(jìn)行分子鑒定的規(guī)范化操作技術(shù)

()。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于附錄中所列柳樹品種的鑒別

A。

2術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本文件

。

21

.

微衛(wèi)星標(biāo)記microsatellite

短串聯(lián)重復(fù)序列

shorttandemrepeats,STRs

簡單重復(fù)序列

simplesequencerepeats,SSR

基因組中由個(gè)個(gè)核苷酸組成的串聯(lián)重復(fù)序列

2~6DNA。

22

.

基因型頻率genotypefrequency

不同基因型在全部個(gè)體中所占的比率全部基因型頻率的總和為或

,1100%。

3操作程序

31取樣和保存

.

取柳樹幼嫩葉片片片用干燥硅膠密封保存用于提取

5~10,,DNA。

32DNA提取所需試劑

.

321稱取溶解到超純水中調(diào)節(jié)定容到

..1mol/LTris:12.11gTris80mL,pH=8.0,100mL。

322稱取溶解到超純水中調(diào)節(jié)定容到

..0.5mol/LEDTA:18.61gEDTA80mL,pH=8.0,100mL。

323氯化鈉稱取氯化鈉溶解到超純水中定容到

..5mol/L:23.38g80mL,100mL。

324醋酸鉀稱取醋酸鉀超純水溶解后定容到

..5mol/L:25.54g,200mL250mL。

325稱取十二烷基硫酸鈉超純水溶解后定容到

..2%SDS:1.0g(SDS),40mL50mL。

326稱取十六烷基三甲基溴化銨溶解到超純水中定容到

..10%CTAB:10gCTAB()80mL,

100mL。

327氯仿異戊醇氯仿異戊醇混合

..:240mL,10mL。

328乙醇乙醇加入超純水

..70%:70mL,30mL。

329裂解液

..CTAB:1mL1mol/LTris(pH=8.0),4mL0.5mol/LEDTA(pH=8.0),28mL

氯化鈉聚乙烯吡咯烷酮定容到

5mol/L,10mL10%CTAB,5g,100mL。

3210緩沖液稱取堿和硼酸加入溶液

..TBE(10×):108gTris55g,40mL0.5mol/LEDTA

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