NY/T 538-2002雞傳染性鼻炎診斷技術(shù)

5S9.11.220B41NY中華人民共和國農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)NY/T538—2002雞傳染性鼻炎診斷技術(shù)Diagnostictechniquesforinfectiouscoryza2002-08-27發(fā)布2002-12-01實(shí)施中華人民共和國農(nóng)業(yè)部發(fā)布

NY/T538-2002三雞傳染性鼻炎(IC)是由副雞曙血桿菌(hpg)引起的一種雞的急性上呼吸道傳染病，本病在世界各地均有發(fā)生.主要引起蛋雞產(chǎn)蛋率下降、生長發(fā)育雞群的生長受阻及淘汰率增加，造成很大的經(jīng)濟(jì)損失。副雞暗血桿菌通常分為A、B、C三個(gè)血清型，在我國能引起傳染性鼻炎的菌型目前為A型和C型，它們具有共同抗原和各自的型特異性抗原，可以通過檢測這些型特異性抗原來鑒定hpg的血清型。本標(biāo)準(zhǔn)提供了多種診斷雞傳染性鼻炎的方法，在使用中應(yīng)根據(jù)雞群發(fā)病后至診斷時(shí)的間隔時(shí)間長短及使用單位的具體情況選擇使用。建議在雞群發(fā)病早期采用病原的分離鑒定或聚合酶鏈反應(yīng)(PCR）方法進(jìn)行診斷.感染一周以后可以采用血清平板凝集試驗(yàn)進(jìn)行診斷,兩周后可以采用瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)、間接醇聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(EL.ISA)和阻斷EI.SIA進(jìn)行診斷，三周后以上各種檢查抗體的方法均可使用。本標(biāo)準(zhǔn)的附錄A、附錄B、附錄C、附錄D、附錄E、附錄F為規(guī)范性附錄。本標(biāo)準(zhǔn)由農(nóng)業(yè)部畜牧善醫(yī)局提出。本標(biāo)準(zhǔn)由全國動(dòng)物檢疫標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：北京市農(nóng)林科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：苗得園、陳小玲、張培君、陳費(fèi)、宋程、龔玉梅。

NY/T538-2002雞傳染性鼻炎診斷技術(shù)1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了檢測副雞哺血桿菌的細(xì)菌分離鑒定方法、PCR技術(shù)以及檢測副雞暗血桿菌特異性抗體的血清平板凝集試驗(yàn)、血凝抑制試驗(yàn)、間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、阻斷酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的操作方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于雞和其他易感動(dòng)物的傳染性鼻炎的診斷。菌的分離鑒定2.1材料準(zhǔn)備2.1.1無菌棉拔子、鮮血瓊脂平板培養(yǎng)基.2.1.2產(chǎn)煙酰胺腺鏢嶺二核替酸(或輔酶」,NAD)表皮葡萄球菌。2.2操作程摩2.2.1無菌打開可疑病雞的眶下突，用滅菌棉技子髓取其中粘液或漿液。2.2.2用棉執(zhí)子在鮮血瓊脂平血上橫向劃線5～7條，然后取產(chǎn)NAD表皮葡萄球菌從橫線中間劃-縱線。2.2.3將劃種好的平血置于5%的二氧化碳(CO.)培養(yǎng)箱中37℃培養(yǎng)18h～24h。2.2.4觀家菌落特點(diǎn)。2.2.5取分離物做過氧化氫酶試驗(yàn)·必要時(shí)通過進(jìn)-一步的生化反應(yīng)做詳細(xì)的特征鑒定。副雞暗血桿菌的生化反應(yīng)特點(diǎn)及過氧化氫酶試驗(yàn)方法見附錄A。2.2.6也可采用PCR鑒定可疑菌落，同時(shí)取病料或可疑菌落進(jìn)行動(dòng)物試驗(yàn)，方法見附錄B.。2.3結(jié)果判定與表示方法若鮮血瓊脂培養(yǎng)基上出現(xiàn)"衛(wèi)星樣"生長的露滴狀、針頭大小的小菌落，即靠近產(chǎn)NAD表皮葡萄球菌線處菌落較大，直徑可達(dá)0.3mm,離產(chǎn)NAD表皮葡萄球菌線越遠(yuǎn)，菌落越小，過氧化氫酶陰性，結(jié)果判為陽性，記為"十"，若無衛(wèi)星現(xiàn)象，但有蟹滴狀、針頭大小的小菌落出現(xiàn)且過氧化氫酶陰性，則仍需采用PCR或動(dòng)物試驗(yàn)鑒定，以避免漏檢不需NAD的副雞暗血桿菌。若無上述現(xiàn)象，則判為陰性，記為3聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）技術(shù)3.1材料準(zhǔn)備3.1.1.PCR反應(yīng)液、消化液、陰、陽性對(duì)照物，按說明書保存和使用。3.1.2石蠟油、生理鹽水、蒸館水、1.5ml.及0.5mL小離心管、吸頭若干，均經(jīng)滅菌處理3.1.3PCR儀、56℃水浴鍋、微量加樣器、小型高速離心機(jī)、冰塊等。3.1.4！瓊脂糖、電泳儀、水平電球槽、紫外檢測儀。3.1.510mg/mL溴化乙鍵，加樣綬沖液,TAE電泳緩沖液，配制方法見附錄C。3.2操作程序3.2.1PCR臨床樣品的采集無菌打開可疑病雞的眶下