NY/T 575-2002牛傳染性鼻氣管炎診斷技術(shù)

cs.11.220B41NY中華人民共和國農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)NY/T575-2002牛傳染性鼻氣管炎診斷技術(shù)Diagnostictechniquesforinfectiousbovinerhinotracheitis2002-08-27發(fā)布2002-12-01實(shí)施中華人民共和國農(nóng)業(yè)部發(fā)布

NY/T575—2002麗牛傳染性鼻氣管炎（infectiousbovinerhinotracheitis，簡稱IBR)是由牛范疹病毒1型（BHV-1）感染家養(yǎng)牛和野生牛引起的一種病毒性傳染病，被世界動物衛(wèi)生組織LWorldOrganizationforAnimalHealth（英），OfficeInternationaldesEpizooties(法），IEJ列為B類疾病，我國農(nóng)業(yè)部列為二類動物疫病。該病廣泛分布于世界各地，該病死亡率較低，許多感染牛呈亞臨床癥狀經(jīng)過，往往由于細(xì)菌繼發(fā)感染導(dǎo)致更為嚴(yán)重的呼吸道疾病。本標(biāo)準(zhǔn)所規(guī)定的技術(shù)與（IE推薦的相應(yīng)技術(shù)一致。本標(biāo)準(zhǔn)的附錄A、附錄B為規(guī)范性附錄。本標(biāo)準(zhǔn)由農(nóng)業(yè)部畜牧獸醫(yī)局提出。本標(biāo)準(zhǔn)由全國動物檢疫標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：農(nóng)業(yè)部動物檢疫所本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：封啟民、李昌琳、李曉成、李其平。

NY/T575-2002牛傳染性鼻氣管炎診斷技術(shù)本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了牛傳染性鼻氣管炎(IBR)診斷技術(shù)要求、本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的病毒分離方法適用于牛傳染性鼻氣管炎病毒的分離;微量血消中和試驗(yàn)和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)適用于牛群檢疫、流行病學(xué)調(diào)查及牛群抗體水平的檢測2牛傳染性鼻氣管炎病毒分離鑒定2.1材料準(zhǔn)備2.1.1病料的采集2.1.1.1呼吸道斌子：用滅菌斌子伸人鼻道采取分泌物，然后放人含青瓣素1000IU/ml.,鏈露素1000g/mL..pH7.2的Earles液中。也可用棉執(zhí)子刮取眼分泌物，并用相同的方法處理。2.1.1.2陰道拔子：用棉執(zhí)子采集胺皰性外陰陰道炎早期病變的陰道黏液，放入含青受素1000IU/mL，鏈舞素1000g/mL,pH7.2的Earles液中。2.1.1.3腦組織樣品：在部檢時(shí)無菌采集腦組織。2.1.1.4流產(chǎn)胎兒組織樣品:剛死亡的胎兒,無菌采集肺、腎、牌等各種組織樣品，放入每1.0mL含有1000IU青莓素,1000Kg鏈莓素·pH7.2的Earles液中。2.1.1.5精液：至少采集新鮮精液，或冷凍精液0.5ml..置液氮中保存?zhèn)溆谩?.1.2樣品的運(yùn)送采集的樣品立即放人4C冰箱保存，在24h內(nèi)送到實(shí)驗(yàn)室。2.1.3樣品處理2.1.3.1收到棉技子樣品后，先經(jīng)凍融兩次，并充分振動·持干棉執(zhí)于，將樣品液經(jīng)10000/min離心10mim,取上清液作為組織培養(yǎng)的接種分離材料。2.1.3.2組織樣品先用Earles液或Hanks液(pH7.2)制成20%的勾漿懸浮液，再經(jīng)10000r/min離心10min,取上清液作為接種分離材料。2.1.3.3精液凍融兩次或超聲波裂解，再經(jīng)10000r/min離心10min,新鮮精液通常對細(xì)胞有毒性：在接種前應(yīng)預(yù)先作稀釋處理，用Earles液作1：15稀釋。2.2操作方法樣品接種：取經(jīng)處理過的樣品0.2mL接種到已形成良好單層的牛腎或翠丸原代或次代細(xì)胞培養(yǎng)瓶中。每份樣品接種4瓶，于37℃吸附1h后，傾去接種液，用Earles液洗三次，最后加入含3%(不含IBR抗體）的牛血清細(xì)胞維持液1ml。置37C培養(yǎng)，逐日觀察細(xì)胞病變;若7天仍不出現(xiàn)致細(xì)胞病變則收獲培養(yǎng)物繼代于新制備的細(xì)胞上，盲傳三代后，觀察細(xì)胞病變，出現(xiàn)病變者收獲培養(yǎng)物，保存于-70℃待鑒定。2.3病毒鑒定病毒致細(xì)胞病變特