WS/T 223-2002乙型肝炎表面抗原酶免疫檢驗方法

C50WS中華人民共和國衛(wèi)生行業(yè)標準WS/T223—2002乙型肝炎表面抗原酶免疫檢驗方法Guidelinesforenzymeimmuno-assayofhepatitisBsurfaceantigen2002-04-20發(fā)布2002-07-01實施中華人民共和國衛(wèi)生部發(fā)布

WS/T223-2002前乙型病毒性肝炎(簡稱乙肝)是由乙型肝炎病毒(HepatitisBvirus,HBV)引起的傳染性疾病，在我國人群中感染率較高，是嚴重危害人民身體健康的常見傳染病之一。對乙肝的診斷主要以實驗室檢測乙開表面抗原（HepatitisBsurfaceantigen.HBsAg）為主，檢測方法主要有酶免疫法、反向間接血凝法、放免法、化學發(fā)光法、免疫熒光法等，目前應用較廣、較普及的是酶免疫法本標準所使用的縮略語為HBV、HBsAg。本標準從2002年7月1日起實施。本標準由衛(wèi)生部醫(yī)政司提出。本標準由北京大學醫(yī)學部人民醫(yī)院肝病研究所負責起草。本標準主要起草人：陶其敏、全文斌。本標準由衛(wèi)生部委托衛(wèi)生部臨床檢驗中心負責解釋，

中華人民共和國衛(wèi)生行業(yè)標準乙型肝炎表面抗原酶免疫WS/T223-2002檢驗方法Guidelinesforenzymeimmuno-assayofhepatitisBsurfaceantigen1范圍本標準規(guī)定了血清HBsAg酶免疫檢驗方法(兩步法)中相關的技術要求本標準適用于各基礎、臨床實驗室和流行病學研究中血清HBsAg測定。方法選擇21常用方法HBsAg的酶免疫檢驗方法根據(jù)反應模式可分為"一步法"和"兩步法"兩種方法。一步法"是將待測樣品和酶標記抗體同時加入到反應孔中進行反應，從而達到快速的目的;兩步法"則是先將樣品加入到反應孔中，待反應結束后再加入酶標記抗體，從而使待測樣品的“捕猶反應"和酶標記抗體的“酶聯(lián)反應"分開進行，因而反應更加穩(wěn)定、重復性也更好。2.2推薦方法由于"一步法"存在產生"前帶現(xiàn)象”的可能，故在本標準中不列為推薦方法；本標準推薦使用酶免疫“兩步法”2.3方法原理本標準推薦使用酶免疫"兩步法"檢測HBsAg:將抗-HBs的單克隆抗體(簡稱單抗)或多克隆抗體（簡稱多抗)包被于聚苯乙烯微孔板等固相載體上，加人待測血清,如其中含有HBsAg,則可與固相上的包被抗體結合：洗板去除不參加反應的無關蛋白成分后，加入酶（如辣根過氧化物酶)標記的第二棟抗體使之與血消中HBeAg反應，在固相載體上形成包被抗體-血清中HBeAg-酶標記抗體的復合物(即雙抗體夾心)：再加入底物后，酶催化底物，產生顯色反應，根據(jù)顯色反應顏色的深淺可判定血清樣品中HBsAg的有無及相對含量。試劑和材料國內目前已有成套的試劑盆供應顯色反應底物液可選用鄰苯二胺(o-phenylenediamine.OPD）-過氧化氫（H.O.）溶液（簡稱OPD）或3,3′,5,5”-四甲基聯(lián)苯胺（3,3′.5,5”-Tetramethylbenzidine,TMB)-H.O。溶液（簡稱TMB)。使用OPD時，可選用2mol/L的硫酸(H.SO,)作為終止液，比色時選用492nm作為測定波長;使用TMB時，可選用2mol/L的鹽酸或2mol/L的硫酸溶液作為終止液，比色時選用450nm作為測定波長。注：國內市場目前亦有HBeAg檢測的快速酶免疫試劑盒供應，該試劑盒系加有標本加速劑和酶