高三一輪復(fù)習(xí)生物 【備課精研+高效課堂】微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用課件

2023高考一輪復(fù)習(xí)微生物培養(yǎng)及應(yīng)用目錄contents1微生物的基本培養(yǎng)2微生物的選擇培養(yǎng)和計(jì)數(shù)核心素養(yǎng)1.生命觀念——分析與綜合：分析培養(yǎng)基的成分及其作用；

比較與分類：平板劃線法和稀釋涂布平板法異

同；選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基的區(qū)別2.科學(xué)探究——設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)：探究微生物培養(yǎng)的條件及如何分離某種微生物等4.社會(huì)責(zé)任——關(guān)注有害微生物的控制，食品安全，宣傳健康

生活方式01微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)例題精講【例題】（2021·北京高考）人體皮膚表面存在著多種微生物，某同學(xué)擬從中分離出葡萄球菌。下述操作不正確的是（）

A.對(duì)配制的培養(yǎng)基進(jìn)行高壓蒸汽滅菌

B.使用無菌棉拭子從皮膚表面取樣

C.用取樣后的棉拭子在固體培養(yǎng)基上涂布

D.觀察菌落的形態(tài)和顏色等進(jìn)行初步判斷棉拭子上的微生物需要用平板劃線法在培養(yǎng)基上進(jìn)行接種，C錯(cuò)誤。C知識(shí)總結(jié)（一）培養(yǎng)基【生命觀念、科學(xué)探究】1.概念：人們按照微生物對(duì)營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)。知識(shí)總結(jié)2.營養(yǎng)成分碳源：提供C元素的物質(zhì)

（CO2、NaHCO3、糖類、脂肪酸、花生粉餅、石油）

氮源：提供N元素的物質(zhì)

（N2、NH3、銨鹽、硝酸鹽、尿素、牛肉膏、蛋白胨）水無機(jī)鹽微生物碳源氮源能源藍(lán)細(xì)菌CO2NH、NO等光能硝化細(xì)菌CO2NH3NH3的氧化根瘤菌糖類等有機(jī)物N2有機(jī)物酵母菌糖類、蛋白質(zhì)等有機(jī)物蛋白質(zhì)等有機(jī)物幾種微生物的營養(yǎng)和能量來源微生物對(duì)培養(yǎng)基的需求乳酸桿菌添加_______霉菌將培養(yǎng)基調(diào)至_____性細(xì)菌將培養(yǎng)基調(diào)至____________性厭氧微生物提供______的條件維生素酸中性或弱堿無氧pH、O2、特殊物質(zhì)（生長因子、氨基酸、維生素、堿基等）

知識(shí)總結(jié)3.其他要求知識(shí)總結(jié)4.培養(yǎng)基的分類（1）按物理狀態(tài)

液體培養(yǎng)基：不加凝固劑（用于工業(yè)生產(chǎn)）

半固體培養(yǎng)基：加凝固劑

（用于觀察微生物的運(yùn)動(dòng)、分類鑒定）

固體培養(yǎng)基：加凝固劑

（用于分離、鑒定、計(jì)數(shù)、保藏）知識(shí)總結(jié)（一）培養(yǎng)基【生命觀念、科學(xué)探究】（2）按化學(xué)成分

合成培養(yǎng)基：含化學(xué)成分不明確的天然物質(zhì)

（用于工業(yè)生產(chǎn)）

天然培養(yǎng)基：成分明確

（用于微生物的分類、鑒定）知識(shí)總結(jié)（一）培養(yǎng)基【生命觀念、科學(xué)探究】（3）按功能種類制備方法原理用途舉例選擇培養(yǎng)基加入某些化學(xué)物質(zhì)依據(jù)某些微生物對(duì)某些物質(zhì)的特殊要求或抗性而設(shè)計(jì)從眾多微生物中分離加入青霉素——分離得到酵母菌和霉菌鑒別培養(yǎng)基加入某種指示劑或化學(xué)藥品產(chǎn)生特定的顏色或其他變化鑒別不同種類的微生物用伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基——鑒別大腸桿菌例1.在Ⅰ-Ⅲ3個(gè)培養(yǎng)皿中分別加入10mL不同的培養(yǎng)基,然后接種相同的大腸桿菌樣液。培養(yǎng)36h,計(jì)算菌落數(shù),結(jié)果如下表所示。下列相關(guān)敘述正確的是(

)A.該實(shí)驗(yàn)采用的是液體培養(yǎng)基B.該實(shí)驗(yàn)采用平板劃線法接種C.Ⅰ和Ⅲ對(duì)照,說明大腸桿菌的生長不需要特殊營養(yǎng)物質(zhì)D.Ⅱ和Ⅲ對(duì)照,說明大腸桿菌的生長需要葡萄糖D例題精講培養(yǎng)皿培養(yǎng)基成分菌落數(shù)/個(gè)Ⅰ瓊脂、葡萄糖35Ⅱ瓊脂、葡萄糖、特殊營養(yǎng)物質(zhì)250Ⅲ瓊脂、特殊營養(yǎng)物質(zhì)0例2.已知一種有機(jī)物X(僅含有C、H兩種元素)不易降解，會(huì)造成環(huán)境污染。某小組用三種培養(yǎng)基篩選土壤中能高效降解X的細(xì)菌(目標(biāo)菌)。Ⅰ號(hào)培養(yǎng)基：在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中加入X(5g/L)。Ⅱ號(hào)培養(yǎng)基：氯化鈉(5g/L)，硝酸銨(3g/L)，其他無機(jī)鹽(適量)，X(15g/L)。Ⅲ號(hào)培養(yǎng)基：氯化鈉(5g/L)，硝酸銨(3g/L)，其他無機(jī)鹽(適量)，X(45g/L)?；卮鹣铝袉栴}：(1)在Ⅰ號(hào)培養(yǎng)基中，為微生物提供氮源的是________________。Ⅱ、Ⅲ號(hào)培養(yǎng)基中為微生物提供碳源的有機(jī)物是____________。(2)若將土壤懸浮液接種在Ⅱ號(hào)液體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)一段時(shí)間后，不能降解X的細(xì)菌比例會(huì)________，其原因是__________________________________。例題精講例2.已知一種有機(jī)物X(僅含有C、H兩種元素)不易降解，會(huì)造成環(huán)境污染。某小組用三種培養(yǎng)基篩選土壤中能高效降解X的細(xì)菌(目標(biāo)菌)。Ⅰ號(hào)培養(yǎng)基：在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中加入X(5g/L)。Ⅱ號(hào)培養(yǎng)基：氯化鈉(5g/L)，硝酸銨(3g/L)，其他無機(jī)鹽(適量)，X(15g/L)。Ⅲ號(hào)培養(yǎng)基：氯化鈉(5g/L)，硝酸銨(3g/L)，其他無機(jī)鹽(適量)，X(45g/L)。(3)Ⅱ號(hào)培養(yǎng)基加入瓊脂后可以制成固體培養(yǎng)基，若要以該固體培養(yǎng)基培養(yǎng)目標(biāo)菌并對(duì)菌落進(jìn)行計(jì)數(shù)，接種時(shí)，應(yīng)采用的方法是________________。(4)假設(shè)從Ⅲ號(hào)培養(yǎng)基中得到了能高效降解X的細(xì)菌，且該菌能將X代謝為丙酮酸，則在有氧條件下，丙酮酸可為該菌的生長提供____________和___________。例題精講知識(shí)總結(jié)（二）無菌技術(shù)【科學(xué)探究】類型條件結(jié)果常用方法應(yīng)用范圍消毒較為溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物煮沸消毒法日常用品巴氏消毒法不耐高溫的液體化學(xué)藥劑消毒法酒精——雙手氯氣——水源紫外線消毒法接種室（箱）、超凈工作臺(tái)滅菌強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子灼燒滅菌法接種工具干熱滅菌法玻璃器皿、金屬工具高壓蒸汽滅菌法培養(yǎng)基、容器關(guān)鍵：防止外來雜菌污染。不同對(duì)象的無菌操作方法①灼燒②干熱③巴氏消毒④紫外線⑤化學(xué)藥物⑥高壓蒸汽滅菌a.消毒b.滅菌Ⅰ.接種針（環(huán)）Ⅱ.培養(yǎng)皿Ⅲ.操作者的衣著和手Ⅳ.水源地方法類型對(duì)象例3.(2021年北京高考)人體皮膚表面存在著多種微生物，某同學(xué)擬從中分離出葡萄球菌。下述操作錯(cuò)誤的是(

)A．對(duì)配制的培養(yǎng)基進(jìn)行高壓蒸汽滅菌B．使用無菌棉拭子從皮膚表面取樣C．用取樣后的棉拭子在固體培養(yǎng)基上涂布D．觀察菌落的形態(tài)和顏色等進(jìn)行初步判斷C例題精講例4．微生物培養(yǎng)過程中，十分重視無菌操作，現(xiàn)代生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中的許多方面也要進(jìn)行無菌操作，防止雜菌污染。請(qǐng)分析下列操作錯(cuò)誤的是(

)①煮沸消毒可以殺死所有微生物，包括芽孢和孢子②接種操作要在酒精燈火焰附近進(jìn)行③無菌繁殖脫毒苗時(shí)，植物的外植體要進(jìn)行消毒④家庭制作葡萄酒時(shí)要將容器和葡萄進(jìn)行滅菌⑤培養(yǎng)基要進(jìn)行高壓蒸汽滅菌⑥植物組織培養(yǎng)、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、無土栽培都需要在無菌、無毒環(huán)境中進(jìn)行A．①③④ B．②④⑥C．①③⑤ D．①④⑥D(zhuǎn)例題精講知識(shí)總結(jié)（三）微生物的純培養(yǎng)【科學(xué)探究】純化培養(yǎng)的原理：在培養(yǎng)基上得到的由一個(gè)細(xì)胞繁殖而來的肉眼可見的菌落，即可獲得較純的菌種。知識(shí)總結(jié)1.制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基（1）操作步驟計(jì)算稱量溶化滅菌倒平板知識(shí)總結(jié)（2）倒平板的方法及注意事項(xiàng)①酒精燈滅菌的方法是灼燒滅菌；

②冷卻倒置的目的：即可使培養(yǎng)基表面的水分更好的揮發(fā)，又可

以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。例5．以下關(guān)于倒平板的操作，錯(cuò)誤的是(

)A．在火焰旁取下裝有培養(yǎng)基的瓶塞B．倒平板前，讓錐形瓶的瓶口迅速通過火焰C．倒平板時(shí)將培養(yǎng)皿的蓋拿開，以方便將錐形瓶中的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿D．平板冷卻凝固后要倒過來放置C例題精講知識(shí)總結(jié)2.接種（1）平板劃線法：通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的

操作，將聚集的菌種逐步分散到培養(yǎng)基的表面。

（用于菌種分離、純化，最終獲得單個(gè)菌落）12341.每次劃線的菌液均來自上次劃線的末端，能使細(xì)菌數(shù)目隨劃線次

數(shù)的增加而逐漸減少，最終得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來的菌落。2.最后一區(qū)不可與第一區(qū)相連；3.每次劃線，均要灼燒并冷卻接種環(huán)，以防止溫度太高殺死菌種?！局R(shí)拓展】平板劃線法的注意事項(xiàng)第一次劃線每次劃線前劃線結(jié)束目的殺死接種環(huán)上原有的微生物殺死上次劃線后接種環(huán)上殘留的菌種，使下次劃線的菌種直接來源于上次劃線的末端，使每次劃線菌種數(shù)量減少殺死接種環(huán)上殘存的菌種，避免污染環(huán)境和感染操作者平板涂布是分離菌種常用的方法，下列相關(guān)敘述不恰當(dāng)?shù)氖牵ǎ?/p>

A.固體培養(yǎng)基滅菌后，應(yīng)冷卻至50℃左右時(shí)倒平板

B.倒好的平板需立即使用，以免表面干燥，影響菌的生長

C.平板涂布分離到的單菌落需進(jìn)一步劃線純化

D.平板涂布法既可用于微生物的分離，也可用于微生物的計(jì)數(shù)變式訓(xùn)練倒好的未接種的培養(yǎng)基不能馬上使用，需要在恒溫箱中保存1-2d，如果沒有菌落生長，說明培養(yǎng)基的制備是成功的，這時(shí)才可以使用。B【答案】B【解析】A.固體培養(yǎng)基滅菌后，應(yīng)冷卻至50℃左右時(shí)倒平板，固體培養(yǎng)基中含有瓊脂，40℃左右會(huì)凝固，因此溫度過低會(huì)導(dǎo)致培養(yǎng)基凝固無法倒平板，A正確；B.倒好的未接種的培養(yǎng)基不能馬上使用，需要在恒溫箱中保存1-2d，如果沒有菌落生長，說明培養(yǎng)基的制備是成功的，這時(shí)才可以使用，B錯(cuò)誤；C.平板涂布分離到的單菌落仍需進(jìn)一步劃線純化，以利于菌種保藏，C正確；D.結(jié)合分析可知，平板涂布法既可用于微生物的分離，也可用于微生物的計(jì)數(shù)，D正確。故選B。變式訓(xùn)練知識(shí)總結(jié)（2）稀釋涂布平板法：將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后將

不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)

行培養(yǎng)。

（用于菌種分離、計(jì)算）項(xiàng)目平板劃線法稀釋涂布平板法平板示意圖純化原理通過連續(xù)劃線操作實(shí)現(xiàn)將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋和涂布平板操作實(shí)現(xiàn)注意事項(xiàng)每次劃線前后均需灼燒接種環(huán)稀釋度要足夠高菌體獲取在具有顯著的菌落特征的區(qū)域菌落中挑取菌體從適宜稀釋度的平板上的菌落中挑取菌體優(yōu)點(diǎn)可以根據(jù)菌落的菌落特征獲得某種微生物的單細(xì)胞菌落既可以獲得單細(xì)胞菌落，又能對(duì)微生物計(jì)數(shù)缺點(diǎn)不能對(duì)微生物計(jì)數(shù)操作復(fù)雜，需要涂布多個(gè)平板兩種微生物純化培養(yǎng)的方法比較例6．下圖為實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)和純化大腸桿菌過程中的部分操作步驟，下列說法錯(cuò)誤的是(

)

A．①步驟使用的培養(yǎng)基是已經(jīng)調(diào)節(jié)過pH并滅菌的培養(yǎng)基B．①②③步驟操作時(shí)需要在酒精燈火焰旁進(jìn)行C．③到④的過程中，接種環(huán)共灼燒了5次D．④步驟操作時(shí)，不能將第1次和第5次的劃線相連C例題精講例7．油煙污染由多種有害物質(zhì)組成，不易降解。某同學(xué)從長期受到某食用油產(chǎn)生的油煙污染的土壤中分離出油煙降解菌，其篩選分離過程如圖所示，下列敘述錯(cuò)誤的是(

)

A．圖中①～③的過程稱為梯度稀釋B．在④中的固體培養(yǎng)基加入該食用油，其作用是為微生物提供碳源和能源C．若要判斷④固體培養(yǎng)基是否起到了選擇的作用，應(yīng)設(shè)計(jì)一個(gè)牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基作對(duì)照D．分離得到的降解菌可采用甘油管藏的方法長期保存A例題精講知識(shí)拓展菌種的保存方法【科學(xué)探究】臨時(shí)保藏：4℃冰箱長期保存：-20℃甘油冷凍管藏法（2021·山東一模）金黃色葡萄球菌（SAU）是細(xì)菌性肺炎的病原體之一。細(xì)菌性肺炎一般需要注射或口服抗生素進(jìn)行治療，當(dāng)細(xì)菌出現(xiàn)耐藥性時(shí)療效下降。A、B、C、D四種抗生素約可治療SAU引起的肺炎。為選出最佳療效的抗生素，研究者分別將含等劑量抗生素A、B、C、D的四張大小相同的濾紙片a、b、c、d置于SAU均勻分布的平板培養(yǎng)基上，在適宜條件下培養(yǎng)48h，結(jié)果如圖。下列相關(guān)敘述正確的是（D）

A.對(duì)實(shí)驗(yàn)使用的培養(yǎng)皿采用高壓蒸汽的方法滅菌

B.A、B、C、D四種抗生素，抑菌效果最佳的是抗生素D

C.細(xì)菌出現(xiàn)耐藥性的原因是由于抗生素導(dǎo)致細(xì)菌發(fā)生變異

D.濾紙片b周圍透明圈中出現(xiàn)一菌落，可能是該菌落發(fā)生了基因突變變式訓(xùn)練【答案】D【解析】A.對(duì)實(shí)驗(yàn)使用的培養(yǎng)基采用高壓蒸汽的方法滅菌，A錯(cuò)誤；B.A、B、C、D四種抗生素，抑菌效果最佳的是抗生素A，B錯(cuò)誤；C.細(xì)菌出現(xiàn)耐藥性的原因是由于抗生素對(duì)細(xì)菌的耐藥基因進(jìn)行選擇，C錯(cuò)誤；D.濾紙片b周圍透明圈中出現(xiàn)一菌落，說明具有抗藥性，可能是該菌落發(fā)生了基因突變，D正確。故選D。變式訓(xùn)練02微生物的選擇培養(yǎng)和計(jì)數(shù)例題精講【例題】在“分離以尿素為氮源的微生物”實(shí)驗(yàn)中，下列敘述正確的是（）

A.尿素可以作細(xì)菌的碳源和氮源

B.在尿素培養(yǎng)基上長出的菌落一定是尿素分解菌

C.若要判斷選擇培養(yǎng)基是否起到了選擇作用，需設(shè)置未接種的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基作對(duì)照

D.如酚紅指示劑變紅就能準(zhǔn)確地認(rèn)定該菌能分解尿素分離尿素分解菌用的培養(yǎng)基屬于固體培養(yǎng)基，除含碳源、氮源、水、無機(jī)鹽外，還應(yīng)含有瓊脂，其中尿素可以作細(xì)菌的氮源。D核心突破例題精講【答案】D【解析】A.若要判斷選擇培養(yǎng)基是否起到了選擇作用，需設(shè)置接種了的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基作對(duì)照，若牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基培養(yǎng)基上的菌落種類數(shù)目多于選擇培養(yǎng)基上的菌落類型，則說明起到了選擇作用，A錯(cuò)誤；B.以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基上長出的不都是尿素分解菌，也有可能是自生固氮菌，B錯(cuò)誤；C.分離分解尿素的細(xì)菌用的培養(yǎng)基屬于固體培養(yǎng)基，除含碳源、氮源、水、無機(jī)鹽外，還應(yīng)含有瓊脂，其中尿素可以作細(xì)菌的氮源，C錯(cuò)誤；D.尿素分解菌可以產(chǎn)生脲酶將尿素分解分解為氨，使pH升高，培養(yǎng)基中進(jìn)入酚紅指示劑后，氨可以使指示劑呈紅色，據(jù)此可以用酚紅指示劑鑒別尿素分解菌，如指示劑變紅就能準(zhǔn)確地認(rèn)定該菌能分解尿素，D正確。故選D。知識(shí)總結(jié)（一）篩選菌株【生命觀念、科學(xué)探究】1.自然界中目的菌株篩選的方法：根據(jù)它對(duì)生存環(huán)境的要求，到

相應(yīng)的環(huán)境中去尋找。（篩選Taq酶：美國黃石公園熱泉）2.實(shí)驗(yàn)室中微生物篩選的原理：人為提供有利于目的菌株生長的

條件（包括營養(yǎng)、溫度、pH等），同時(shí)抑制或阻止其他微生物

的生長。（篩選尿素分解菌：以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基）

不能分解尿素的菌株→死亡

能分解尿素的菌株→存活知識(shí)總結(jié)（二）統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目【科學(xué)思維】1.顯微鏡直接計(jì)數(shù)法：特定的細(xì)菌計(jì)數(shù)板或者血細(xì)胞計(jì)數(shù)板。

（缺點(diǎn)：不能區(qū)分死菌與活菌）知識(shí)總結(jié)（1）要點(diǎn)：①菌體濃度高，溶液需要進(jìn)行定量稀釋；②先振蕩試管再取樣，使酵母菌分布均勻，減少誤差；③先蓋上蓋玻片，再吸取培養(yǎng)液滴于蓋玻片邊緣，讓培養(yǎng)液

自行滲入；制好裝片后，應(yīng)靜置一會(huì)，待酵母菌全部沉降

到計(jì)數(shù)室底部再觀察；④需連續(xù)多天在相同時(shí)間取樣計(jì)數(shù)。（2）計(jì)數(shù)方法：抽樣檢測法知識(shí)總結(jié)（3）計(jì)算方法：酵母菌細(xì)胞個(gè)數(shù)/ml=所數(shù)小方格中細(xì)胞總數(shù)×400×104×稀釋倍數(shù)所數(shù)的小方格數(shù)計(jì)數(shù)室（2020·江蘇高考真題）下列關(guān)于“探究培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量的動(dòng)態(tài)變化”實(shí)驗(yàn)的敘述，錯(cuò)誤的是（

）

A.將酵母菌接種到培養(yǎng)液中，并進(jìn)行第一次計(jì)數(shù)

B.從靜置的培養(yǎng)液中取適量上清液，用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)

C.每天定時(shí)取樣，測定酵母菌細(xì)胞數(shù)量，繪制種群數(shù)量動(dòng)態(tài)變化曲線

D.營養(yǎng)條件是影響酵母菌種群數(shù)量動(dòng)態(tài)變化的因素之一變式訓(xùn)練B每次計(jì)數(shù)前，都需要輕緩地將培養(yǎng)液搖勻，使其中的酵母菌分布均勻，再取適量培養(yǎng)液用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，B錯(cuò)誤；【答案】B【解析】A.將酵母菌接種到培養(yǎng)液后，需要對(duì)酵母菌進(jìn)行初次計(jì)數(shù)，以獲得酵母菌種群密度初始值，A正確；B.每次計(jì)數(shù)前，都需要輕緩地將培養(yǎng)液搖勻，使其中的酵母菌分布均勻，再取適量培養(yǎng)液用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，B錯(cuò)誤；C.需要定時(shí)取樣和計(jì)數(shù)，用于繪制酵母菌種群數(shù)量的動(dòng)態(tài)變化曲線，C正確；D.酵母菌種群數(shù)量的動(dòng)態(tài)變化受營養(yǎng)條件、代謝廢物、空間等的影響，D正確。故選B。變式訓(xùn)練知識(shí)總結(jié)（1）原理：當(dāng)樣品稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長的一個(gè)菌落，來源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。（2）活菌計(jì)算方法：2.稀釋涂布平板法（間接，常用）知識(shí)總結(jié)①設(shè)置重復(fù)實(shí)驗(yàn)：在每一稀釋度下設(shè)置

3個(gè)平板作為重復(fù)組，

排除偶然因素對(duì)實(shí)驗(yàn)的干擾。②設(shè)置對(duì)照：提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度。

（如要排除培養(yǎng)基被雜菌污染的可能性，需以未接種細(xì)菌的培養(yǎng)基作為空白對(duì)照。）②適宜菌落數(shù)均在30～300且數(shù)目相差不大的三個(gè)平板，用“平均值”代入計(jì)數(shù)公式。（2）注意事項(xiàng)金黃色葡萄球菌具有高度耐鹽性，可引起人腸炎等疾病，在血平板（培養(yǎng)基中添加適量血液）上生長時(shí)，可破壞菌落周圍的紅細(xì)胞，使其褪色。某研究小組要測定某地自來水中金黃色葡萄球菌的濃度。下列說法錯(cuò)誤的是（

）

A.培養(yǎng)基中加入適量NaCl有利于金黃色葡萄球菌的篩選

B.配制培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)先調(diào)pH到中性偏堿后滅菌，滅菌結(jié)束后無需放入烘箱

C.現(xiàn)將10mL無菌水依次稀釋成10-1、10-2、10-3、10-4四個(gè)稀釋液，再取四

個(gè)稀釋液各0.lmL分別接種到若干個(gè)血平板上，所用方法為涂布分離法

D.若在上述10-3組的3個(gè)血平板上（每個(gè)接種0.lmL），金黃色葡萄球菌菌

落數(shù)分別為35、36和37，則每升自來水中的活菌數(shù)約為3.6×105個(gè)變式訓(xùn)練D【答案】D【解析】A.由于金黃色葡萄球菌具有高度耐鹽性，適量NaCl不影響金黃色葡萄球菌生長的同時(shí)能抑制其它菌的生長，因此，金黃色葡萄球菌的培養(yǎng)基中加入適量NaCl，有利于金黃色葡萄球菌的篩選，A正確；B.金黃色葡萄球菌（細(xì)菌）適宜pH為中性偏堿性，配制培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)先調(diào)pH再滅菌，防止調(diào)pH時(shí)造成雜菌污染，同時(shí)滅菌結(jié)束后無需放入烘箱，否則培養(yǎng)基中的水份會(huì)丟失，B正確；C.先用無菌水稀釋，再用相應(yīng)的稀釋液各0.lmL分別接種到若干個(gè)血平板上，所用接種方法是涂布分離法，C正確；D.若在10-3組的3個(gè)血平板上（每個(gè)接種0．1ml），金黃色葡萄球菌菌落數(shù)分別為35、36和37，則每升自來水中的活菌數(shù)約

為（35+36+37）÷3÷10-3÷0.1×1000=3.6×108個(gè)，D錯(cuò)誤。故選D。變式訓(xùn)練知識(shí)總結(jié)（三）分解尿素的細(xì)菌的分離【科學(xué)探究】1.實(shí)驗(yàn)原理：（1）篩選：配制以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基。（3）鑒定：培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑尿素分解尿素的細(xì)菌脲酶氨pH升高變紅酚紅知識(shí)總結(jié)2.實(shí)驗(yàn)流程土壤取樣→富含有機(jī)質(zhì)的土壤表層土→以尿素為唯一氮源（選擇培養(yǎng)基）→不同微生物，稀釋度不同，以保證菌落數(shù)在30～300之間、適于計(jì)數(shù)的平板→培養(yǎng)溫度30-37℃→菌落的形狀、大小、隆起程度和顏色等→稀釋涂布平板法配制土壤溶液和培養(yǎng)基梯度稀釋接種培養(yǎng)計(jì)數(shù)計(jì)算尿素是一種重要的農(nóng)業(yè)肥料，土壤中的某些細(xì)菌能合成脲酶，可以將尿素分解成氨和CO2，然后被植物利用。下列有關(guān)土壤中尿素分解菌的分離和培養(yǎng)的敘述，正確的是（

）

A.為了防止雜菌污染應(yīng)將采集的土樣進(jìn)行高壓蒸汽滅菌

B.若涂布的3個(gè)平板中的1組數(shù)據(jù)結(jié)果與另外兩組相差太遠(yuǎn)，則需舍棄此數(shù)據(jù)

C.本實(shí)驗(yàn)采用稀釋涂布平板法進(jìn)行分離和計(jì)數(shù)，用酚紅試劑進(jìn)行檢測鑒定

D.從反芻動(dòng)物的瘤胃中與從土壤中分離尿素分解菌的實(shí)驗(yàn)條件和培養(yǎng)方法

相同變式訓(xùn)練C【答案】C【解析】A.采集的土樣中含有欲分離的尿素分解菌，不能進(jìn)行高壓蒸汽滅菌，A錯(cuò)誤；B.若滿足有兩組數(shù)據(jù)在30~300之間，則可以取符合要求的數(shù)據(jù)求平均值，若不滿足有兩組數(shù)據(jù)處于30～300之間，則需要重新實(shí)驗(yàn)，B錯(cuò)誤；

C.分離土壤中尿素分解菌實(shí)驗(yàn)可以采用稀釋涂布平板法進(jìn)行分離和計(jì)數(shù)，由于尿素分解產(chǎn)生氨，使培養(yǎng)基pH升高，可用酚紅試劑進(jìn)行檢測鑒定，C正確；D.反芻動(dòng)物的瘤胃中酸性較大，而土壤中尿素分解菌能使培養(yǎng)基呈堿性，因此兩組分離尿素分解菌的實(shí)驗(yàn)條件不同，D錯(cuò)誤。故選C。變式訓(xùn)練例1．(2021年高考山東高考)為純化菌種，在鑒別培養(yǎng)基上劃線接種分解尿素的細(xì)菌，培養(yǎng)結(jié)果如圖所示。下列敘述錯(cuò)誤的是(

)A．為保證無菌操作，接種針、接種環(huán)使用前都必須滅菌B．倒平板后需間歇晃動(dòng)，以保證表面平整C．圖中Ⅰ、Ⅱ區(qū)的細(xì)菌數(shù)量均太多，應(yīng)從Ⅲ區(qū)挑取單菌落D．該實(shí)驗(yàn)結(jié)果因單菌落太多，不能達(dá)到菌種純化的目的例題精講BD例2．尿素是一種重要的農(nóng)業(yè)肥料，經(jīng)微生物分解后能更好地被植物利用。某生物興趣小組試圖探究土壤中微生物對(duì)尿素是否有分解作用，設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)并成功篩選到能高效分解尿素的細(xì)菌(目的菌)。培養(yǎng)基成分如下表所示。將表中物質(zhì)溶解后，用蒸餾水定容到100mL。實(shí)驗(yàn)過程如圖所示：回答下列問題：例題精講BDKH2PO4Na2HPO4MgSO4·7H2O葡萄糖尿素瓊脂1.4

g2.1

g0.2

g10

g1

g15

g(1)該培養(yǎng)基為微生物生長提供了多種營養(yǎng)物質(zhì)，營養(yǎng)物質(zhì)類型包括_____________________(答出兩點(diǎn)即可)。能篩選出目的菌的原因是_________________________。(2)圖中將細(xì)菌接種到固體培養(yǎng)基上時(shí)，采用的方法是________________。初步篩選出來的菌種還需要進(jìn)一步的鑒定：在培養(yǎng)基中加入_____指示劑，接種并培養(yǎng)初步篩選的菌種，若指示劑變成____色，則可說明該菌種能夠分解尿素。(3)在實(shí)驗(yàn)中，下列材料或用具需要滅菌的是_____(填序號(hào))，需要消毒的是_____(填序號(hào))。①培養(yǎng)細(xì)菌的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿②玻璃棒、試管、錐形瓶和吸管③實(shí)驗(yàn)操作者的雙手例題精講知識(shí)拓展1.纖維素（1）主要存在部位：植物細(xì)胞壁（2）基本單位：葡萄糖（四）纖維素分解菌的篩選【科學(xué)探究】知識(shí)總結(jié)2.實(shí)驗(yàn)原理【科學(xué)探究】(1)篩選：以纖維素作為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基。(2)鑒定：紅色復(fù)合物纖維素分解菌纖維素酶紅色消失，出現(xiàn)透明圈。剛果紅纖維素知識(shí)總結(jié)3.實(shí)驗(yàn)流程【科學(xué)探究】土壤取樣→富含纖維素的環(huán)境→以纖維素為唯一碳源，增加目的菌濃度

（選擇培養(yǎng)基）→制備系列稀釋液→篩選產(chǎn)生透明圈的菌落→將樣品涂布到含剛果紅的培養(yǎng)基上

（鑒別培養(yǎng)基）梯度稀釋選擇培養(yǎng)涂布平板挑選例題精講【例題】秸稈還田可增加土壤肥力，緩解環(huán)境污染。為分離分解纖維素的微生物菌種，實(shí)現(xiàn)廢物的資源化利用，研究人員設(shè)計(jì)了