實(shí)驗(yàn)八.尿藥法測定核黃素片劑消除速率常數(shù)

實(shí)驗(yàn)八

尿藥法測定核黃素片劑消除速率常數(shù)1一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、熟悉尿藥法在生物藥劑實(shí)驗(yàn)中的應(yīng)用。2、掌握尿藥法在計(jì)算消除速度常數(shù)等動(dòng)力參數(shù)的方法。2二、實(shí)驗(yàn)原理藥物在體內(nèi)的吸收、分布、代謝、等過程中既有區(qū)別，又有聯(lián)系，觀察一個(gè)方面的變化，?？砷g接地認(rèn)識(shí)另一方面的情況，所以藥物在體內(nèi)的速度過程變化規(guī)律，既可用血藥法來估算，也可用尿藥法來估算。在多數(shù)情況下，尿藥濃度高于血藥濃度，定量分析精密度好，測定方法較易建立，而且取樣方便，受試者可免受多次抽血的痛苦。因此，在體內(nèi)藥物大部分以原形從尿中排除條件下，通常可用尿藥法估算消除速度常數(shù)、生物半衰期等動(dòng)力學(xué)參數(shù)。尿中原形藥物的瞬時(shí)排泄速度，可用下列微分式表示：

Ke為表現(xiàn)一級(jí)排泄速度常數(shù)，Xu為t時(shí)間尿中原形藥物的累計(jì)排泄量，X為t時(shí)間體內(nèi)存有的藥。在靜脈給藥時(shí)，體內(nèi)藥量經(jīng)時(shí)過程可由下式表示：

X為給藥劑量，K為表現(xiàn)一級(jí)消除速度常數(shù)。

（1）（2）將（2）式X值代入（1）式后得：兩邊取對(duì)數(shù)得：（3）（4）由（4）式可見，原形藥物排泄速度的對(duì)數(shù)對(duì)時(shí)間作圖為一直線，其斜率為與血藥濃度的對(duì)數(shù)對(duì)時(shí)間作圖所求的斜率相同。（4）式適用于靜脈給藥后求算消除速度常數(shù)。若口服給藥，則體內(nèi)藥量經(jīng)時(shí)過程可由下式表示：Ka為表現(xiàn)一級(jí)吸收速度常數(shù)。（5）尿中原形藥物的瞬時(shí)排泄速度可用（5）式代入（1）式得：當(dāng)Ka＞K，t充分大時(shí)，則，（5）式簡化為：（6）（7）兩邊取對(duì)數(shù)得：（8）由上述關(guān)系式可見，若以／對(duì)t作圖，可得到一條二項(xiàng)指數(shù)曲線，從其后段直線的斜率可求出一級(jí)消除速度常數(shù)K.。由于尿中原形藥物排泄速度的瞬時(shí)變化率是不可能用實(shí)驗(yàn)方法求算的，通過實(shí)驗(yàn)只可求出平均排泄速度，設(shè)在一段時(shí)間間隔△t內(nèi)藥物的排泄量為△Xu，則平均排泄速度為，這樣（4）或（8）式可改寫如下：X－

X－

㏒═㏒KX0－（9）㏒＝㏒－（10）由于實(shí)驗(yàn)中采取平均排泄速度代替瞬時(shí)排泄速度，求得的消除速度常數(shù)K會(huì)出現(xiàn)一些誤差。但若以恒定的時(shí)間間隔集尿，其時(shí)間間隔補(bǔ)大于一個(gè)藥物的半衰期時(shí)，則僅發(fā)生較小偏差。三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容與操作(—)服藥及尿樣收集1、臨服藥前排空小便。2、早餐后立即服用核黃素三片（5mg/片），用溫水250ml吞服不咀碎，記錄服藥時(shí)間。3、按服下藥片后的第0、0.5、1、1.5、2、2.5、3、4、5、6、8、10小時(shí)收集尿液，記錄尿液重量（按密度為1折算藥液體積），然后，將尿液倒入盛有0.1mL冰醋酸的刻度試管內(nèi)至10mL，搖勻，于陰涼避光處保存。注意點(diǎn)：1、每次收集尿液后飲150～200mL左右水以維持尿量。2、大便時(shí)收集小便，切勿損失。3、試驗(yàn)期間（包括服藥前一天）控制食譜，不能吃含有核黃素的食物，如：蛋類、牛奶、麥乳精、奶糖等。并不得服用含有B族維生素的藥物。（二）尿液中核黃素含量的測定

1、原理：核黃素的異咯嗪環(huán)上具有活潑的雙鍵，能接受和放出氫原子，在保險(xiǎn)粉（連二亞硫酸鈉）的作用下，能還原為無色雙氫核黃素，利用這一特性，可以由加入保險(xiǎn)粉前后二次測得的吸收度（核黃素在波長444nm處有吸收）的差值，來計(jì)算尿液中核黃素的含量。2、方法（1）標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備精密稱取105℃干燥2小時(shí)的核黃素對(duì)照品10mg于100mL量瓶中，加0.02m0l／L醋酸液稀釋60mL，置水浴加熱溶解后，放冷至室溫，用0.02mol／L醋酸液稀釋至刻度，搖勻，即得，每1mL中含核黃素100μg（100μg/mL），然后加入甲苯覆蓋上面，置涼暗處保存。（2）標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密吸取標(biāo)準(zhǔn)溶液0.1、0.3、0.5、1.0、2.0、3.0mL分別置于10mL量瓶中用酸化蒸餾水（每100mL蒸餾水中含1mL冰醋酸）稀釋至刻度，搖勻。以酸化蒸餾水作空白，在444nm波長處測定吸收度，然后，在每管中各加保險(xiǎn)粉約3mg搖勻。在一分鐘內(nèi)再次測定吸收度。兩次測定值之差，即為核黃素的吸收度，以此值為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。（3）尿樣中核黃素含量測定取尿液置于盛有0.1mL冰醋酸的刻度試管內(nèi)至10mL，搖勻，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下的方法，從“以酸化蒸餾水作空白”起，依法測定吸收度，以兩次測定值之差，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上計(jì)算出尿液中核黃素的含量。以上操作步驟，均須注意避光。四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論1.原始記錄服藥后尿液收集與測定數(shù)據(jù)表1空白尿藥測定數(shù)據(jù)空白尿體積（ml）：空白尿中排泄核黃素的總△Xu（μg）量：平均每2小時(shí)排泄核黃素的微克數(shù)：2、繪制尿藥排泄速率二項(xiàng)指數(shù)曲線。3、從二項(xiàng)指數(shù)曲線后段直線部分計(jì)算斜率，