微生物標(biāo)本采集技術(shù)臨床環(huán)鏡空氣

微生物標(biāo)本采集技術(shù)臨床環(huán)鏡空氣第一頁，共六十六頁，2022年，8月28日

臨床微生物標(biāo)本采集技術(shù)第二頁，共六十六頁，2022年，8月28日正確的微生物標(biāo)本采集和運送，是準(zhǔn)確的病原學(xué)診斷的前提第三頁，共六十六頁，2022年，8月28日基本原則1.及時采集微生物標(biāo)本作病原學(xué)檢查2.在抗菌藥物使用前采集標(biāo)本3.采樣時嚴(yán)格執(zhí)行無菌操作4.采樣后立即送檢5.棉拭子標(biāo)本宜用運送培養(yǎng)基7.標(biāo)本容器須滅菌處理，但不得使用消毒劑。8.送檢標(biāo)本應(yīng)注明來源和檢驗?zāi)康?.混有正常菌群的標(biāo)本，不可置肉湯培養(yǎng)第四頁，共六十六頁，2022年，8月28日如何提高細(xì)菌陽性檢出率標(biāo)本采集時機標(biāo)本采集方法標(biāo)本的質(zhì)與量標(biāo)本的運送與保存鏡檢篩選合格標(biāo)本高質(zhì)量、多種分離培養(yǎng)基培養(yǎng)環(huán)境第五頁，共六十六頁，2022年，8月28日

痰標(biāo)本采集第六頁，共六十六頁，2022年，8月28日關(guān)于咳痰標(biāo)本在抗生素應(yīng)用前采集痰標(biāo)本;標(biāo)本采集后1～2h內(nèi)必須立即進(jìn)行實驗室處理；咳痰標(biāo)本應(yīng)用最早且廣泛，但也是最受爭議的標(biāo)本;采集標(biāo)本過程中要有專業(yè)的醫(yī)務(wù)人員指導(dǎo);第七頁，共六十六頁，2022年，8月28日病原體種類繁多而復(fù)雜

使下呼吸道感染病原診斷成為難題細(xì)菌（包括放線菌與奴卡菌，厭氧菌與分枝桿菌）真菌（包括肺孢子菌）病毒支原體、衣原體與立克次體原蟲寄生蟲第八頁，共六十六頁，2022年，8月28日痰標(biāo)本采集-----自然咳痰標(biāo)本患者清晨起床后，用清水或冷開水反復(fù)漱口去除過量的口腔細(xì)菌，有假牙者應(yīng)取下假牙。先輕咳，咳出口腔中的痰液棄去，在用力深咳，從氣管咳出呼吸道深部的痰，直接吐入清潔、無菌的容器中。無痰可用3％～5％NaCl5ml霧吸約5min導(dǎo)痰；也可用物理療法、體位引流等法取痰；第九頁，共六十六頁，2022年，8月28日2023/2/7Dr.HUBijie10幾種下呼吸道直接采集的標(biāo)本經(jīng)氣管穿刺吸引transtrachealaspiration,TTA經(jīng)胸壁針刺吸引transthoracicneedleaspiration,TNA

經(jīng)支氣管鏡采樣支氣管肺泡灌洗bronchoalveolarlavage,BAL經(jīng)支氣管鏡直接吸引防污染樣本毛刷protectivespecimenbrush,PSB開胸肺活檢open-lungbiopsy，OLB經(jīng)人工氣道吸引分泌物endotrachealaspirates，ETA第十頁，共六十六頁，2022年，8月28日痰標(biāo)本采集-----吸痰吸痰：無法咳痰或不合作者、人工氣道者，戴好無菌手套，無菌集痰器分別連接吸引器和無菌吸痰管。按吸痰法將痰吸入無菌集痰器內(nèi)，加蓋送檢。經(jīng)支氣管鏡直接吸引:注意嚴(yán)格無菌操作第十一頁，共六十六頁，2022年，8月28日PSB及BAL

對可疑的VAP患者進(jìn)行纖支鏡保護(hù)樣本刷（PSB)及支氣管肺泡灌洗(BAL)采樣，以此技術(shù)取支氣管分泌物不易污染，進(jìn)行呼吸道感染細(xì)菌定量或半定量培養(yǎng)，若分離細(xì)菌濃度>103CFU/ML(PSB)及>104CFU/ML(BAL)，可作為診斷標(biāo)準(zhǔn)，其敏感性為76%一83%，特異性為91%一100%。通過與尸檢對照，已證實PSB和BAL技術(shù)診斷的正確性，被認(rèn)為是目前最可靠的診斷方法。肺泡灌洗液直接鏡檢BAL~D被認(rèn)為對快速診斷、及早治療VAP是一個有價值的方法。第十二頁，共六十六頁，2022年，8月28日尿標(biāo)本正確采集---清潔中段尿標(biāo)本應(yīng)保證尿液在膀胱內(nèi)至少停留4h以上。最好留取早晨清潔中段尿標(biāo)本，方法：患者睡前少飲水，清晨起床后先用肥皂水清洗會陰部，女性應(yīng)用手分開大陰唇，男性應(yīng)翻上包皮，仔細(xì)清洗，再用清水沖洗尿道口周圍；開始排尿，將前段尿排出，棄去，不要停頓，直接將中段尿約1020ml直接排入專用的無菌容器中，立即送檢。容器內(nèi)是無菌的，所以打開容器蓋后，應(yīng)拿在手中，不要隨意亂放。記錄留取標(biāo)本的時間，保證在留取標(biāo)本后1小時內(nèi)送至檢驗科。第十三頁，共六十六頁，2022年，8月28日尿標(biāo)本正確采集---留置導(dǎo)尿消毒導(dǎo)尿管外部(接頭上端近會陰部）,按無菌操作方法用注射器穿刺導(dǎo)尿管吸取尿液10ml，操作時注意防止混入消毒劑（推薦用三步清毒法：75％乙醇----2%碘酒----75%酒精脫碘待干）.注意不能從收集袋中采集尿液。第十四頁，共六十六頁，2022年，8月28日

血培養(yǎng)標(biāo)本

采集與運送第十五頁，共六十六頁，2022年，8月28日血培養(yǎng)標(biāo)本采集1.手清潔：無明顯污染使用速干乙醇消毒液洗手.2.血培養(yǎng)瓶口消毒：75%乙醇消毒一遍，待干60s.3.靜脈穿刺消毒：推薦用三步法

(1).用75％乙醇清毒采集部位(2).用2%碘酒從穿刺點向外畫圈消毒，至消毒區(qū)域直徑達(dá)3cm以上，涂擦穿刺皮膚2遍，待干。（3）75%酒精脫碘：用75%酒精由內(nèi)向外方向涂抹去碘酒液,待酒精揮發(fā)干燥后采血。2009年美國感染性疾病學(xué)會推薦的經(jīng)皮抽血局部皮膚消毒或?qū)Ч芙涌谟玫怍蚓凭蚓凭纫讯?>0.5%),不建議使用聚維酮碘.第十六頁，共六十六頁，2022年，8月28日采血量

成人采血量是10ml-20ml/套嬰兒，3－5ml/套第十七頁，共六十六頁，2022年，8月28日操作注意事項（1）從靜脈采血，不建議從動脈采血，（2）用注射器無菌穿刺取血后,勿換針頭(如果行第二次穿刺,應(yīng)換針頭)直接注入消毒后的血培養(yǎng)瓶。（3）血抽到培養(yǎng)瓶后,輕輕顛倒混勻以防血液凝固。立即送檢,切勿冷藏?。?）多次采血應(yīng)在不同部位的血管穿刺以排除皮膚菌叢污染的可能。除非無法作靜脈穿刺取血，否則不應(yīng)從留置導(dǎo)管內(nèi)取血。（5）抽血前應(yīng)將標(biāo)簽貼于血培養(yǎng)瓶頸上，標(biāo)簽內(nèi)容包括病人基本信息、采血時間、采血部位。注意不要把標(biāo)簽貼在培養(yǎng)瓶條形碼上，否則儀器無法識別。第十八頁，共六十六頁，2022年，8月28日

血培養(yǎng)次數(shù)和采血時間--1

采血培養(yǎng)應(yīng)該盡量在使用抗菌藥之前進(jìn)行,在患者發(fā)熱期間越早越好，以發(fā)熱高峰前1h內(nèi)或病人寒戰(zhàn)和發(fā)熱開始時采集為宜。在10分鐘內(nèi)于不同部位采集外周血2～3份培養(yǎng)(有助于判斷是污染還是感染，提高檢出陽性率)注意報陽性時間，陽性瓶數(shù).。在采取血培養(yǎng)后的2-5天內(nèi)，不需要再重復(fù)采取血培養(yǎng)，因為進(jìn)行治療后的2-5天血液中的感染細(xì)菌不會馬上消失。第十九頁，共六十六頁，2022年，8月28日對可疑中心靜脈導(dǎo)管相關(guān)血流感染（CR-BSI)保留導(dǎo)管外周靜脈血1份，中心靜脈導(dǎo)管血1份,不用棄去導(dǎo)管起始部分的血液.拔除導(dǎo)管:2個外周靜脈血、導(dǎo)管尖端5cm.

(在進(jìn)行中心靜脈導(dǎo)管血和周圍靜脈血培養(yǎng)時應(yīng)記錄報陽時間)第二十頁，共六十六頁，2022年，8月28日導(dǎo)管尖段標(biāo)本的采集血管內(nèi)導(dǎo)管尖段標(biāo)本的采集、送檢程序①用75%酒精清潔導(dǎo)管周圍皮膚；②無菌操作移動導(dǎo)管，剪取尖端末端5cm，直接置入無菌試管內(nèi)或直接置入血平板內(nèi)；③立即送檢（不超過15min），防止干燥。

如因懷疑CRBSI移除皮下埋置式靜脈輸液港,將該輸液港內(nèi)容物及導(dǎo)管尖端做定量培養(yǎng)。第二十一頁，共六十六頁，2022年，8月28日第二十二頁，共六十六頁，2022年，8月28日血培養(yǎng)常見錯誤培養(yǎng)瓶放冰箱瓶橡膠塞上小蓋未打開直接穿刺抽血后未及時混勻血液凝固第二十三頁，共六十六頁，2022年，8月28日如何正確運送標(biāo)本運送培養(yǎng)基溫度應(yīng)適當(dāng)原則：保持細(xì)菌活力血培養(yǎng)、腦脊液標(biāo)本：應(yīng)及時送檢，不能及時送檢的標(biāo)本應(yīng)置溫箱或室溫中，切不能放入冰箱中保存(除病毒、霉菌、分支桿菌培養(yǎng)樣本置4℃)痰、尿等標(biāo)本：如不能及時送檢可置冰箱，以抑制雜菌生長，但時間不應(yīng)超過6h。第二十四頁，共六十六頁，2022年，8月28日

血培養(yǎng)瓶驗收:

(1)檢查培養(yǎng)瓶是否有滲漏、破裂或明顯污染。

(2)檢查瓶子上的標(biāo)簽與申請單是否相符。

(3)檢查血液標(biāo)本是否適量，血液是否凝固。第二十五頁，共六十六頁，2022年，8月28日各類標(biāo)本儲存的環(huán)境

標(biāo)本采取后應(yīng)該立即送檢,如不能立即送檢,儲存的環(huán)境的要求儲存環(huán)境標(biāo)本來源4℃冰箱---痰、尿液、糞便、活檢組織、氣管沖洗物、導(dǎo)尿管、心包積液、膿和傷口分泌物等室溫（25℃）---血液培養(yǎng)、腦脊液、泌尿生殖道、眼、耳、鼻、喉、血管導(dǎo)管尖、體液、厭氧菌培養(yǎng)標(biāo)本第二十六頁，共六十六頁，2022年，8月28日2023/2/7Dr.HUBijie27

手術(shù)切口、燒傷創(chuàng)面與膿液第二十七頁，共六十六頁，2022年，8月28日2023/2/7Dr.HUBijie28皮膚組織標(biāo)本

（損傷、膿腫、燒傷、滲出液）標(biāo)本的選擇更大程度上依賴于感染的程度和性質(zhì)而不是可疑的病原體。對大多數(shù)開放傷口，采集前應(yīng)先去除表面菌群。除非有滲出物，干燥、結(jié)痂傷口一般不做培養(yǎng)。閉合膿腫應(yīng)取滲出物和膿腫壁標(biāo)本。開放膿腫處理同開放傷口。燒傷傷口應(yīng)在廣泛清洗和清創(chuàng)術(shù)后采集培養(yǎng)。建議取活檢標(biāo)本，傷口表面定量培養(yǎng)不一定有意義。代表性的標(biāo)本應(yīng)采自病灶活動區(qū)域或基底部有而不僅僅是膿液。第二十八頁，共六十六頁，2022年，8月28日29方法未破裂膿腫：不能用拭子。消毒覆于膿腫表面的皮膚，用注射器將膿腫內(nèi)容物吸出。然后切開膿腫、引流，取部分膿腫壁送檢。送檢時，標(biāo)本都置于厭氧培養(yǎng)基中。開放病灶和膿腫：用無菌鹽水擦去表面滲出物，用拭子深入潰瘍基底部或邊緣部，采集兩個拭子，分別做培養(yǎng)和革蘭染色，也可對滲出物做需氧培養(yǎng)。開放病灶不能做厭氧培養(yǎng)。燒傷傷口：清創(chuàng)，出現(xiàn)滲出液后以拭子用力采集，僅作需氧培養(yǎng)。也可送檢活檢組織標(biāo)本。膿皰或水皰：酒精消毒使之干燥，對于患兒用23號針頭挑破膿皰，拭子采集膿皰液和基底部標(biāo)本。第二十九頁，共六十六頁，2022年，8月28日

大便標(biāo)本第三十頁，共六十六頁，2022年，8月28日糞便標(biāo)本采集自然排便后，取有膿血、粘液、組織碎片部分糞便1～3g。液體糞便則取絮狀物，一般取1～3ml，直接裝入糞便容器或保存液或運送培養(yǎng)基中送檢。直腸拭子法將肛門周圍洗凈，然后用一根浸過無菌生理鹽水的棉拭子，插入肛門約５mm-2cm處，輕輕旋轉(zhuǎn)，使之與直腸黏膜表面接觸，然后取出置于無菌試管中立刻送至微生物室．本法只適用于排便困難患者或嬰幼兒，不推薦使用拭子做常規(guī)性病原菌培養(yǎng)。第三十一頁，共六十六頁，2022年，8月28日第三十二頁，共六十六頁，2022年，8月28日環(huán)境采樣第三十三頁，共六十六頁，2022年，8月28日有關(guān)采樣采樣方法：采樣是決定結(jié)果的第一要素！采樣時間：查問題時以提高檢出率為原則。培養(yǎng)基：質(zhì)量問題影響檢出率！關(guān)注！檢測條件：注意實驗室污染。培養(yǎng)條件：注意培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)時間。結(jié)果報告：不能零報，報方法最小檢出單位。應(yīng)該讓懂院感知識的檢驗人員來采樣會更好！陽性檢出率越高說明檢測水平越高第三十四頁，共六十六頁，2022年，8月28日美國的理念1970年以前，美國的醫(yī)院定期對空氣和環(huán)境表面（如，地面、墻壁、臺面）進(jìn)行培養(yǎng)。到了1970年，CDC和美國醫(yī)院協(xié)會（AHA）主張停止對環(huán)境的常規(guī)培養(yǎng)，因為醫(yī)院感染發(fā)生率與空氣或環(huán)境表面中總的微生物污染水平不相關(guān)，且環(huán)境表面或空氣中微生物含量的允許水平也沒有有意義的標(biāo)準(zhǔn)。1970-1975年，美國有25%的醫(yī)院減少了這種常規(guī)的環(huán)境培養(yǎng)工作——一個已經(jīng)持續(xù)的趨勢。第三十五頁，共六十六頁，2022年，8月28日什么情況下要求進(jìn)行環(huán)境采樣

四種狀況下要求進(jìn)行環(huán)境采樣

一是當(dāng)環(huán)境中的宿主或媒介物被認(rèn)為在疾病傳播中有流行病學(xué)意義時，提供疾病或感染暴發(fā)的依據(jù)。

第二種情況是在研究過程中進(jìn)行適當(dāng)?shù)沫h(huán)境采樣。

第三種情況是為了監(jiān)測潛在的危險環(huán)境條件，確認(rèn)有害的化學(xué)或生物因素的存在，并驗證危險因素的成功消除。

第四種情況是為了質(zhì)量保證（QA）而采樣，以評估改變感染控制措施取得的效果或是確保設(shè)施或系統(tǒng)按照規(guī)范和預(yù)期結(jié)果執(zhí)行。第三十六頁，共六十六頁，2022年，8月28日

物體表面采樣

物體表面細(xì)菌總數(shù)的檢測是評價被污染程度消毒效果

主要依據(jù)第三十七頁，共六十六頁，2022年，8月28日物體表面采樣--涂抹法涂抹法：將5cm×5cm的標(biāo)準(zhǔn)滅菌規(guī)格板，放在被檢測物品表面，用浸有無菌生理鹽水的棉拭子在規(guī)格板內(nèi)來回均勻涂抹整個方格，并隨之轉(zhuǎn)動棉拭子，剪去手接觸部分后，將棉拭子放入盛有10ml生理鹽水的試管中，充分振搖1min，作適量稀釋后，接種于普通營養(yǎng)瓊脂平板上進(jìn)行計數(shù)，然后根據(jù)平板上菌落數(shù)得出物品表面每平方厘米的細(xì)菌數(shù)第三十八頁，共六十六頁，2022年，8月28日物體表面采樣--斑貼法斑貼法:按無菌操作方法將5cm×5cm的無菌濾紙用滅菌生理鹽水浸濕，均勻貼附于物體表面，1min取下放人盛有25ml滅菌生理鹽水試管中，充分振搖1min，作適量稀釋后，接種于普通營養(yǎng)瓊脂平板上作菌落計數(shù)，同樣得出物品表面每平方厘米的細(xì)菌數(shù)。壓印法第三十九頁，共六十六頁，2022年，8月28日壓印法

在檢驗時，只需在現(xiàn)場打開皿蓋，將略突出于培養(yǎng)皿口平面的培養(yǎng)基輕輕往被檢物品表面一按，蓋上皿蓋，在培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)一定時間后計菌落數(shù)。此數(shù)值即為10cm2被檢物品表面上的細(xì)菌數(shù)，無需任何換算即可同消毒標(biāo)準(zhǔn)和公共場所衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)加以比較。十分快捷、方便，甚至沒有無菌室和專門檢驗人員也可順利完成操作。是目前最理想的用于公共場所物品表面細(xì)菌污染程度監(jiān)測的方法。第四十頁，共六十六頁，2022年，8月28日

不規(guī)則物品如何采樣?第四十一頁，共六十六頁，2022年，8月28日第四十二頁，共六十六頁，2022年，8月28日第四十三頁，共六十六頁，2022年，8月28日第四十四頁，共六十六頁，2022年，8月28日消毒物品表面的監(jiān)測：1、采樣時間：消毒處理后4小時內(nèi)進(jìn)行采樣。2．采樣面積：被采面積＜100cm2

，取全部表面；≥100cm2，取100cm2

。

3、采樣方法：用5CM*5CM的標(biāo)準(zhǔn)滅菌規(guī)格板放在被檢消毒物品表面，用含相應(yīng)中和劑無菌洗脫液（5ML）的棉試子在規(guī)格板內(nèi)橫豎往返均勻涂擦各5次并隨之轉(zhuǎn)動采樣棉拭子，剪去手接觸部位，將棉拭子投入無菌洗脫液中，立即送檢。小型物體表面的結(jié)果計算用cfu/件表示。第四十五頁，共六十六頁，2022年，8月28日

1、采樣時間:在接觸病人和從事醫(yī)療活動前進(jìn)行采樣或消毒后立即采樣。2、采樣面積及方法（棉拭方法）被檢人五指并攏，用含相應(yīng)中和劑無菌洗脫液（5ML）的棉試子在雙手指屈面從指根到指端往返涂擦2次，并隨之轉(zhuǎn)動采樣棉拭子，剪去手接觸部位，將棉拭子投入無菌洗脫液中，立即送檢。每只手面積按照30CM2計算。手消毒效果監(jiān)測第四十六頁，共六十六頁，2022年，8月28日三、洗脫法該法較其它兩種方法采菌量多，但操作較復(fù)雜。取滅菌生理鹽水200ml～300ml，倒入適當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi)，將待檢查的手浸入生理鹽水中，反復(fù)沖洗1min～2min。然后將沖洗后的水用細(xì)菌過濾器過濾，過濾完畢，將濾膜貼于普通瓊脂培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)24h，計算菌落數(shù)。第四十七頁，共六十六頁，2022年，8月28日皮膚粘膜采樣方法

用5cm×5crn滅菌現(xiàn)格板，放在被檢皮膚處；用沒有含相應(yīng)中和劑的無菌洗脫液的棉拭子1支，在規(guī)格板內(nèi)橫豎往返均勻涂擦各5次，并隨之轉(zhuǎn)動棉拭子，剪去手接觸部位后，將棉拭子投人10ml含相應(yīng)中和劑的無菌洗脫液的試管內(nèi)，立即送檢。不規(guī)則的粘膜皮膚處可用棉拭子直接涂擦采樣。

第四十八頁，共六十六頁，2022年，8月28日指壓法取一塊普通血瓊脂平板，把待檢查手的十個手指的指腹部分別按壓在平板表面。然后把平板放入37℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)48h，計算菌落數(shù)。第四十九頁，共六十六頁，2022年，8月28日

衛(wèi)生手標(biāo)準(zhǔn)：10CFU/CM2;消毒手標(biāo)準(zhǔn)：5CFU/CM2第五十頁，共六十六頁，2022年，8月28日空氣微生物監(jiān)測空氣污染的監(jiān)測得到足夠重視空氣微生物研究的范圍在不斷擴大空氣微生物的診斷在不斷提高控制空氣微生物的方法不斷更新對空氣微生物采樣方法認(rèn)識不斷提高第五十一頁，共六十六頁，2022年，8月28日空氣微生物采樣方法一、沉降法二、浮游菌測定法第五十二頁，共六十六頁，2022年，8月28日

*：將普通營養(yǎng)瓊脂平板放在室內(nèi)各采樣點處，采樣時將平板蓋打開,扣放于平板旁，暴露5min，蓋好立即送檢。

*檢測方法：將采樣平板置37℃培養(yǎng)48h，計數(shù)并鑒定細(xì)菌。結(jié)果計算：

細(xì)菌總數(shù)=50000N/（A*T）沉降平皿法采樣方法第五十三頁，共六十六頁，2022年，8月28日第五十四頁，共六十六頁，2022年，8月28日空氣消毒效果監(jiān)測：

采樣時間：在消毒處理后、操作前進(jìn)行采樣采樣方法采樣高度：距地面1.5m（80-150cm）。布點方法：室內(nèi)面積≤30m2,設(shè)內(nèi)、中、外對角線三點;

室內(nèi)面積>30m2,設(shè)4角及中央5點，均距墻壁1m

第五十五頁，共六十六頁，2022年，8月28日平板沉降法缺點

1、平板沉降法屬重心沉降，此法只能采集10μm左右的粒子，而且不能作精確定量。因為就單個細(xì)菌而言，最大只有幾個μm，小到1μm以下，所以它只能采集到附著于各種塵埃和氣溶膠表面的細(xì)菌，難以采集到懸浮的細(xì)菌，而經(jīng)空氣感染更多的是由于懸浮于空氣中的細(xì)菌所致。缺點2、采樣時受周圍氣流、粒經(jīng)大小和粒經(jīng)沉降速度等因素影響，不能準(zhǔn)確的反應(yīng)空氣細(xì)菌的分布水平。3、奧梅良斯基公式規(guī)定：假如100cm2的平皿在空氣中暴露5min即相當(dāng)于10l空氣中的細(xì)菌數(shù)，此值是一假定值，無法定量，所以公式中的矯正數(shù)也是很不準(zhǔn)確的。第五十六頁，共六十六頁，2022年，8月28日潔凈部空氣采樣（一）采樣方法：1、當(dāng)送風(fēng)口集中布置時，應(yīng)對手術(shù)區(qū)和周邊區(qū)分別檢測；2、當(dāng)送風(fēng)口分散布置時，按全室統(tǒng)一布點方法檢測（按室內(nèi)面積大小布點）；第五十七頁，共六十六頁，2022年，8月28日3