人工分子伴侶輔助雞白細(xì)胞介素18重組蛋白的復(fù)性

人工分子伴侶輔助雞白細(xì)胞介素18重組蛋

白的復(fù)性王新華,胡敬東,孔娜,李宏梅,趙宏坤【摘要】 目的:研究表面活性劑十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)和B-環(huán)糊精(B-CD)組成的人工分子伴侶系統(tǒng)輔助雞IL-18重組蛋白的復(fù)性，以提高雞IL-18重組蛋白復(fù)性率，取得更多具有良好活性的蛋白。方式：將重組原核表達(dá)質(zhì)粒pGEX-mChIL-18轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞大腸桿菌BL21(DE3),并用IPTG于37°C誘導(dǎo)培育取得表達(dá)。表達(dá)產(chǎn)物要緊以包涵體的形式存在。包涵體經(jīng)超聲波破碎、洗滌后以6mol/L的鹽酸胍溶解，使蛋白完全變性，然后利用人工分子伴侶系統(tǒng)輔助蛋白復(fù)性。復(fù)性產(chǎn)物經(jīng)透析純化后，利用淋巴細(xì)胞增殖實驗來檢測其活性。結(jié)果：經(jīng)SDS分析說明，表達(dá)產(chǎn)物是與ChIL-18重組蛋白相符的Mr約44000的蛋白條帶。利用人工分子伴侶系統(tǒng)輔助復(fù)性,雞IL-18重組蛋白取得了％復(fù)性率。雞淋巴細(xì)胞增殖實驗說明，表達(dá)產(chǎn)物對雞淋巴細(xì)胞具有明顯誘導(dǎo)增殖作用。結(jié)論：人工分子伴侶系統(tǒng)能夠較好地輔助雞ILT8重組蛋白復(fù)性，取得較高的復(fù)性率。其產(chǎn)物具有良好的生物學(xué)活性，為下一步雞IL-18重組蛋白的應(yīng)用研究奠定了實驗基礎(chǔ)?！娟P(guān)鍵詞】人工分子伴侶系統(tǒng)雞白細(xì)胞介素18重組蛋白B-環(huán)糊精復(fù)性表面活性劑[Abstract]AIM:TostudythetechniqueofboostingtherenaturationyieldofrChIL-18byusingaritificialmolecularchaperonecomposedofcetyltrimethylammoniumbromide(CTAB)andB-cyclodextrin(B-CD).METHODS:TherecombinantplasmidofmChIL-18prokaryoticexpressionwastransformedintoBL21(DE3)strainandtheninducedbyIPTGat37°C.TherecombinantmChIL-18wasexpressedefficientlyininclusionbodiesin.Aftercrushedandwashed,theinclusionbodieswerethoroughlydenaturedwith6mol/Lofguanidinehydrochloride,andthentheartificialmolecularchaperonewasusedtopromoteproteinrefolding.Aftertherehabilitationofproductswaspurifiedbybagfilter,itsactivitywasdetectedbylymphocyteproliferationassays.RESULTS:TheSDSanalysisindicatedtheexpressedChIL-18proteinhadmolecularweightof44000.TheexpressedproductexistedintheformofinclusionproteinbandsofMr44000and26000appearedonSDSgel.ThepercentageofrenaturationwaswithartificialmolecularresultsofMTTassayshowedtheexpressionofChIL-18proteininBL21(DE3)greatlyinducedtheproliferationofchickenTlymphocytes.CONCLUSION:TheartificialchaperonetechniquecanobviouslyboosttherenaturationyieldofrChIL-18.ThepurifiedandexpressedproductoffusionchickenInterleukin-18geneinhaverelativityhighbioactivity.［Keywords］artificialmolecularchaperone;chickenILT8recombinationprotein;&-cyclodextrin;refolding;surfactant白細(xì)胞介素18(interleukinT8,ILT8)也稱為Y干擾素(IFN-丫)誘導(dǎo)因子(interferony-inducingfactor,IGIF),是Okamura等［1］第一次從小鼠肝臟中克隆取得的，它具有增加FasL的表達(dá)和增強(qiáng)NK細(xì)胞毒性作用等多種生物學(xué)效能，在免疫調(diào)劑、抗感染及慢性炎癥性疾病發(fā)病進(jìn)程中起著重要作用［2］。本實驗室關(guān)于雞IL-18成熟蛋白基因已經(jīng)構(gòu)建了其原核表達(dá)質(zhì)粒pGEX-mChIL-18［3］。該質(zhì)粒在大腸桿菌中是以包涵體的形式高效表達(dá),但是包涵體是無活性固體顆粒,因此必需通過蛋白質(zhì)復(fù)性使其變成有活性的蛋白,而利用分子伴侶協(xié)助蛋白質(zhì)復(fù)性正成為該領(lǐng)域的新熱點。分子伴侶是指能夠結(jié)合和穩(wěn)固另外一種蛋白質(zhì)的不穩(wěn)固構(gòu)象,并能通過有操縱的結(jié)合和釋放,增進(jìn)新生多肽鏈的折疊、多聚體的裝配或降解及細(xì)胞器蛋白的跨