SRB法檢測沒食子酸乙酯對PC12細(xì)胞的毒性作用

本文格式為Word版，下載可任意編輯——SRB法檢測沒食子酸乙酯對PC12細(xì)胞的毒性作用

材料

1.1藥物、細(xì)胞株與主要試劑

沒食子酸乙酯（購自阿拉丁，E119029）；小鼠腎上腺嗜鉻瘤細(xì)胞株P(guān)C12（上海細(xì)胞生物研究所細(xì)胞庫）；SulforhodamineB（Sigma，批號230162），胚胎牛血清（FBS，Thermo，批號SV30087.02）；DMEM（Life，12800-017）。

1.2主要儀器

CO2培養(yǎng)箱（Thermo，型號：3111），倒置顯微鏡（Olympus，型號：IX53），酶標(biāo)儀（BioTek，型號：Elx808）

2方法

2.1細(xì)胞培養(yǎng)

PC12細(xì)胞置37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中，用含10%FBS的高糖DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng)。倒置顯微鏡查看細(xì)胞生長處境，0.25%胰蛋白酶消化傳代，取對數(shù)生長期細(xì)胞用于測驗。

2.2SRB法檢測沒食子酸乙酯對PC12細(xì)胞的毒性

取對數(shù)生長期PC12細(xì)胞，胰酶消化，調(diào)整濃度為10000個/mL的單細(xì)胞懸液并接種于96孔培養(yǎng)板，100μL/孔，24h后參與含不同濃度沒食子酸乙酯培養(yǎng)液，對照組參與等體積溶劑培養(yǎng)液，每組設(shè)6個復(fù)孔（重復(fù)3次），置培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72h，終止時棄培養(yǎng)液，參與100μL預(yù)冷的10%TCA固定，4℃冰箱置1h。棄固定液，清水洗3次，甩干枯燥，每孔參與100μL0.4%SRB室溫作用30min，用1%冰醋酸洗去游離染料。甩干枯燥，每孔參與100μL10mMTris溶解，放搖床直至染料全部溶解。結(jié)果用酶標(biāo)儀在564nm波優(yōu)點測定OD值。細(xì)胞抑制率%=（1-測驗組平均OD/對照組平均OD）×100%

2.3統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS11.5舉行統(tǒng)計學(xué)處理。計量資料以x±s表示。組間對比采用配對t檢驗。

3結(jié)果

由表1結(jié)果顯示，不同濃度的沒食子酸乙酯對PC12細(xì)胞的增值均有不同程度的抑制作用，并隨濃度增加，抑制率增大即細(xì)胞存活個數(shù)越少（圖1），其中1.25μg/mL～5μg/mL濃度范圍對PC12細(xì)胞的毒害最小。

4議論

磺基羅丹明B（sulforhodamineB，SRB）是一種蛋白質(zhì)結(jié)合染料，可與生物大分于中的堿性氨基酸結(jié)合，其顏色變化與活細(xì)胞蛋白成正比。SRB法不僅具備MTT法操作簡便、敏感的特點，而且測量結(jié)果不受時間影響，更加適用于大規(guī)模藥物篩選及毒性評價。

PC12細(xì)胞是大鼠腎上腺髓質(zhì)嗜鉻瘤分化細(xì)胞株，屬神經(jīng)嵴源性，具神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞的一般特征，且具可傳代特點，能夠代替原代培養(yǎng)的神經(jīng)細(xì)胞[2]，廣泛應(yīng)用于神經(jīng)生理、藥理學(xué)研究。

沒食子酸乙酯作為一種抗氧化劑，神經(jīng)細(xì)胞的氧化應(yīng)激損傷具有確定養(yǎng)護作用，但其有確定細(xì)胞毒性，本研究采用SRB法進一步評價其對PC12細(xì)胞的毒性作用。結(jié)果顯示不同濃度的沒食子酸乙酯對PC12細(xì)胞的增值均有不同程度的抑制作用，且呈劑量憑借性，其中1.25μg/mL～5μg/mL濃度范圍對PC12細(xì)胞的毒害最小。

[1]田偉，畢玉婷，周啟龍，等.沒食子酸酯對神經(jīng)細(xì)胞的抗氧化養(yǎng)護作用研究[J].自然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2022，25：1423-1427.

[2]黃文超，李云峰，羅